血液制品病毒滅活/去除方法概述

鄭敏 劉亞絨 徐濤

【摘 要】目前，隨著人們對(duì)血液制品的關(guān)注度越來越高，保障其安全性成為血液制品企業(yè)首要做到的重要內(nèi)容，并且需要采取措施解決血液制品生產(chǎn)過程中的病毒。基于此，文章介紹了幾種血液制品病毒滅活/去除方法，希望給相關(guān)人員提供參考意見。

【關(guān)鍵詞】血液制品；病毒滅活；病毒去除；方法

目前，血液制品的種類在分離純化工藝的發(fā)展下不斷增多，為了提高血液制品的應(yīng)用率，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的相關(guān)規(guī)定，采取有效的血液制品病毒滅活/去除方法如物理法和化學(xué)法，在一定程度上提高了血液制品的安全性，同時(shí)，也為血液制品企業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

一、血液制品中的幾種病毒

血液制品因其不可替代的療效和安全性在維護(hù)人們的生命健康中發(fā)揮著重要的作用，保障血液制品的病毒安全性是血液制品安全與質(zhì)量控制的關(guān)鍵。目前，可經(jīng)血/血液制品傳播的病毒有甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、人免疫缺陷病毒（HIV）、人類細(xì)小病毒（B19），巨細(xì)胞病毒（CMV）以及人類朊病毒。因此，為提高血液制品的安全性，需要在血漿病原體中進(jìn)行篩查并且對(duì)原料血漿檢疫期進(jìn)行有效管理，不斷加強(qiáng)血液制品病毒滅活/去除的方法，從而實(shí)現(xiàn)有效的血液制品管理，并降低或是避免經(jīng)血液途徑傳播的疾病，保證血液制品的質(zhì)量。

二、血液制品病毒滅活/去除的方法

目前，對(duì)血液制品的病毒進(jìn)行滅活和去除的基本方法有物理法和化學(xué)法，其中物理法主要是熱處理法，包括濕熱法（巴斯德法）、干熱法（60℃72h，80℃72h）、蒸汽加熱法（將濕潤(rùn)的凍干產(chǎn)品暴露于60℃、1119mPa的熱蒸汽中進(jìn)行病毒滅活10h）以及納米膜過濾等方法；而化學(xué)法主要是低pH值孵放法、有機(jī)溶劑/表面活性劑法（S/D法）等。以下是對(duì)血液制品病毒滅活/去除的方法的具體分析。

（一）物理法

1.濕熱法

濕熱法也稱巴斯德法，該方法的基本原理是在適宜的溫度下，加快對(duì)病毒結(jié)構(gòu)的破壞速率，并且該速率應(yīng)大于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的破壞速率，由此實(shí)現(xiàn)血液制品病毒的有效滅活/去除。目前，該方法被廣泛應(yīng)用在生產(chǎn)靜脈注射免疫球蛋白（IVIG）、因子Ⅷ、因子Ⅸ以及纖維蛋白原等方面。值得注意的是需要滿足一定的條件，即無穩(wěn)定劑、低鹽、酸性的環(huán)境下進(jìn)行。另外，在近50年的臨床使用結(jié)果及近來的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，白蛋白在溶液狀態(tài)下經(jīng)60℃、10h加熱處理，即巴氏消毒后，不僅能滅活乙肝病毒（HBV），也能滅活丙肝病毒（HCV）和人免疫缺陷病毒（HIV），使白蛋白成為在病毒安全方面最可靠的一種血液制品。

2.干熱法

血液制品病毒滅活/去除物理法中的干熱滅活法，就是將凍干后的制劑再進(jìn)行加熱處理，對(duì)血液制品中的病毒進(jìn)行干熱滅活的方法。一般情況下常用的干熱法為：60℃～80℃、10h～72h加熱法以及80℃、72h加熱法。另外，在對(duì)FⅧ凍干濃制劑和凝血酶原復(fù)合物進(jìn)行熱處理時(shí)，需要使用80℃、72h干熱法，因?yàn)樵?0世紀(jì)80年代初期就已證實(shí)其他熱處理法無法實(shí)現(xiàn)對(duì)其的有效滅活。當(dāng)然除了對(duì)FⅧ凍干濃制劑和凝血酶原復(fù)合物的病毒有效滅活，還對(duì)HBV、HCV、HIV等能夠?qū)崿F(xiàn)其獨(dú)特的療效。

3.納米膜過濾法

納米膜過濾病毒去除法的基本原理為：使用在15～45nm之間的濾膜對(duì)血液制品溶液進(jìn)行過濾，并利用篩分原理在納米膜過濾中將尺寸較大的病毒或其他病原體留在納米膜上，而小于濾膜孔徑的蛋白產(chǎn)繼續(xù)留在溶液中。納米膜過濾法最早被應(yīng)用在20世紀(jì)90年代初、中期，到目前為止納米膜過濾法已經(jīng)發(fā)展成為一種較為成熟、有效、以及穩(wěn)定的病毒去除方法。目前，在相關(guān)病毒去除專家的深入研究中，將納米膜過濾法與巴氏消毒法進(jìn)行結(jié)合，并以豬細(xì)小病毒作為模擬病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過孔徑為20nm的納米濾膜后病毒數(shù)量滴度下降了4log，由此證明納米膜過濾結(jié)合巴氏消毒法對(duì)病毒滅活的有效性，并且能夠投入新的免疫球蛋白制品病毒去除工作，還在一定程度上提高了目標(biāo)蛋白產(chǎn)品的安全性，使蛋白生物活性回收率能夠達(dá)到90%～95%。

（二）化學(xué)法

1.低pH值孵放法

低pH值孵放法的基本原理是在pH值低于4的環(huán)境條件下，使病毒表面的細(xì)胞抗原電荷發(fā)生改變，由于蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生不可逆變性，使得病毒喪失與細(xì)胞受體結(jié)合的能力，從而使得病毒無法進(jìn)入細(xì)胞，更對(duì)細(xì)胞無法侵染。另外，在低pH值孵放法實(shí)施時(shí)需要滿足的滅活條件為pH值是4且溫度為24℃，以此來實(shí)現(xiàn)血液制品病毒的有效滅活/去除。

2.有機(jī)溶劑/表面活性劑（S/D）法

有機(jī)溶劑/表面活性劑S/D法最早應(yīng)用于20世紀(jì)80年代中期，因其有效的滅活/去除血液制品病毒的特目前仍在沿用。有機(jī)溶劑/表面活性劑（S/D）法的基本原理是：根據(jù)有機(jī)溶劑和非離子表面活性劑的混合物能夠破壞脂包膜病毒的類脂膜的特點(diǎn)，應(yīng)用此方法加快類脂從病毒表面脫落速度，并使病毒失去其黏附能力，有效避免病毒感染細(xì)胞。舉一個(gè)應(yīng)用S/D法進(jìn)行病毒滅活的例子，在高純度的凝血因子中應(yīng)用S/D法進(jìn)行病毒滅活時(shí)，為實(shí)現(xiàn)有效滅活病毒的目的，需要以0.3%的TNBP和1%的Triton-X100為S/D試劑，并且在22℃條件下對(duì)凝血因子制品中的牛痘病毒、單純皰疹病毒、辛德畢斯病毒等模擬脂包膜病毒進(jìn)行有效的滅活。另外，S/D法也可以用于凝血因子制品、蛋白酶抑制劑、人免疫球蛋白等血液制品的脂包膜病毒的滅活。

三、幾種病毒滅活方法的滅活效果比較

通過對(duì)各種病毒滅活方法的基本原理的具體分析，得出其對(duì)血液制品病毒滅活/去除的有效性，表1是對(duì)這幾種病毒滅活方法滅活效果比較。

以脂包膜病毒和非脂包膜病毒為例，對(duì)其進(jìn)行病毒滅活效果比較，由表可知物理滅活方法既對(duì)脂包膜病毒具有良好的滅活效果，也在非脂包膜病毒的滅活中起到一定的作用；而化學(xué)滅活方法只對(duì)脂包膜病毒滅活具有良好的效果，對(duì)非脂包膜病毒則沒有滅活效果。

四、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，為保證血液制品的安全性，應(yīng)當(dāng)對(duì)血液制品病毒的有效滅活/去除環(huán)節(jié)格外重視。同時(shí)，針對(duì)病毒本身具有的不易去除的特點(diǎn)，采取適當(dāng)、有效的病毒滅活/去除方式以達(dá)到高效滅活/去除病毒的目的。另外，隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，在血液制品企業(yè)需要不斷更新病毒去除/滅活工藝，從整體上實(shí)現(xiàn)更好的病毒去除/滅活效果。

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