聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲消毒的濃度

楊旭 蔡忠璐 劉霞 陳明康 李遠(yuǎn)眉

摘 要：為研究聚維酮碘在褶皺臂尾輪蟲培育中消毒時的最適添加量，采用不同濃度聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲Brachionus plicatilis進行消毒試驗，研究了聚維酮碘對于輪蟲生長和繁殖的影響。結(jié)果表明：在聚維酮碘（藥品濃度）1 mg/L的情況下，對褶皺臂尾輪蟲的存活、種群增長、繁殖、帶卵率影響不大，即與對照組無顯著性差異 （P>0.05）。

關(guān)鍵詞：褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）；聚維酮碘；消毒

輪蟲廣泛分布于湖泊、池塘、江河、近海等各類淡、咸水水體中，其繁殖力強，環(huán)境適應(yīng)性和抗逆性強，生活周期短，可高密度大量培養(yǎng)，并且營養(yǎng)豐富，含有大量優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、游離氨基酸、維生素、礦物質(zhì)，尤其是不飽和脂肪酸，是魚類等水生生物育苗中常用的開口餌料[1]。現(xiàn)階段輪蟲養(yǎng)殖模式中，采用的大多為室外土池培育。在培養(yǎng)過程中通常會使用動物的糞便等有機肥來進行氮、磷、鉀等元素的補充，這些肥料會將大量有害病菌帶入培育水體，從而影響到養(yǎng)殖生物的健康。

聚維酮碘 （Polyvinilpyrrolidone iodine，povidoneiodine，簡稱 PVP-I）為碘伏類殺菌劑，它是聚乙烯吡咯烷酮（PVP）與碘的復(fù)合物[2]，是一種強力殺菌消毒劑，對病毒、細(xì)菌、真菌及霉菌孢子都有較強的殺滅作用，具有高效、低毒、無殘留、刺激性小，作用持久的特點，且使用安全、簡便，其作用原理是在其水溶液中，碘以低毒性的碘離子存在，離子碘從溶液中游離變成分子碘緩慢釋出，氧化細(xì)菌、真菌以及病毒的蛋白使其變性。分子態(tài)的碘毒性大，離子態(tài)的碘毒性甚微。目前已應(yīng)用于沙蠶[3]、石斑魚[4]、南美白對蝦苗[5-6]、暗紋東方鲀稚魚[7]等水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中，在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物活餌料應(yīng)用上[8]也有報道。

本試驗研究聚維酮碘在褶皺臂尾輪蟲培育中消毒時的最適添加量，旨在為聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲消毒時的安全性提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）來自江蘇鹽城土池培育的群體，暫養(yǎng)于試驗室10 m3水泥池中，以蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidesa）藻膏為餌料，將藻膏采用300目篩絹搓洗均勻后潑灑使用。試驗所選用的輪蟲均為活力較好的群體。培養(yǎng)輪蟲的溶液由過濾的海水和曝氣自來水配制而成。

聚維酮碘購自上海神華科技發(fā)展有限公司，有效碘含量9.0%～12.0%。為保證聚維酮碘的有效濃度，聚維酮碘試液均為每次使用前配制。下文敘述中的藥品濃度皆為藥品本身的濃度。

1.2 方法

1.2.1 輪蟲的培育方法 試驗于大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點試驗室進行，首先進行了聚維酮碘對于褶皺臂尾輪蟲的耐受性試驗。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，設(shè)置濃度分別為1、2.5、5 mg/L 3個濃度組，另設(shè)1個空白對照組。采用消毒后的塑料桶為試驗容器，水體體積為5 L，調(diào)節(jié)水體溫度為22 ℃，鹽度為20‰。通過水浴加熱的方式控制輪蟲水環(huán)境溫度，每個試驗塑料桶中都放有充氣石，保證輪蟲的需氧量。初期投放的褶皺臂尾輪蟲濃度為80個/mL，每組試驗設(shè)3個平行組。每天采用固定的投喂量，采用小球藻進行投喂，每桶投喂15 mL藻液，以保證其正常生長繁殖所需要的營養(yǎng)，避免因為營養(yǎng)不足造成試驗差異。在放入前觀察輪蟲的生長狀態(tài)、帶卵情況，確定輪蟲處于單性繁殖期，使試驗更加具有科學(xué)性嚴(yán)謹(jǐn)性。在輪蟲放入塑料桶后，在1、2、4、6、8、10 d分別對試驗組進行種群數(shù)量計數(shù)，觀察輪蟲種群的增長情況。在輪蟲放入塑料桶時，放入后1、5 d分別觀察輪蟲個體的帶卵情況。

1.2.2 藥品使用方法 本試驗采取藥物的試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，首先配制出濃度為500 mg/L的母液，向塑料桶中分別加入母液10、25、50 mL，使水體聚維酮碘濃度為1、2.5、5 mg/L 。采取一次性添加的方法，在各試驗組開始時只添加一次藥物。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS21.0軟件進行單因素方差分析，并用Tukey HSDa法進行多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果

2.1 聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲種群生長的影響

試驗過程中，不同的聚維酮碘的濃度組對褶皺臂尾輪蟲的種群數(shù)量增長影響見表1。在試驗開始后的前2天，各組輪蟲數(shù)量均呈指數(shù)級增長，但在第6天時，各種密度開始出現(xiàn)差異，但之后各組數(shù)量趨于穩(wěn)定。到第10天時，對照組密度最高，為475.7個/mL，1 mg/L濃度組與之接近，為474.0個/mL，其他兩組與對照組相比差異顯著，分別為344.7、274.3個/mL。

2.2 聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲帶卵的影響

不同濃度的聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲的帶卵數(shù)量的影響見表2。試驗開始時輪蟲帶卵率為15.4%。從表2可知，試驗開始后1天，各濃度組中的輪蟲帶卵數(shù)量都有所增加，但帶卵比率最高的是對照組，為24.23%，其他濃度組帶卵率分別為22.67%、20.00%、19.33%。到第5天時，帶卵率明顯出現(xiàn)了差異，除 1 mg/L濃度組外，其它濃度組顯著低于對照組。帶卵比率最高的是對照組，為33.0%，1 mg/L的濃度組的輪蟲帶卵率為31.33%，兩者基本一致。而濃度為2.5 mg/L濃度組帶卵率為17.67%，濃度5 mg/L濃度組帶卵率僅剩下7.33%。

3 討論

3.1 聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲種群增長的影響

輪蟲是水域環(huán)境中常見的一種浮游動物，其個體小、繁殖力強、營養(yǎng)豐富，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中作為魚類等育苗的活餌料被廣泛應(yīng)用。當(dāng)聚維酮碘濃度達(dá)到0.5～1 mg/L即有殺菌的效果。劉青等[9]研究表明濃度為 0.2 mg/L（該濃度為有效碘濃度）以上的聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲的壽命、繁殖和種群增長有顯著影響，而與對照組相比，0.1 mg/L的聚維酮碘對褶皺臂尾輪蟲的存活、產(chǎn)前發(fā)育時間影響不大。與本實驗結(jié)果相符，水體中1 mg/L的聚維酮碘，不會影響到褶皺臂尾輪蟲的種群生長。

3.2 聚維酮碘對于褶皺臂尾輪蟲帶卵率的影響

輪蟲的帶卵率是反應(yīng)輪蟲生活狀態(tài)、生活環(huán)境的一個很重要的參考指標(biāo)。在實驗第1天，各濃度組帶卵率與對照組無顯著性差異。具體來說，1 mg/L組的帶卵率和對照組無顯著性差異，說明用此濃度聚維酮碘對輪蟲進行消毒處理，后期對該輪蟲的帶卵率影響不大，不會影響到褶皺臂尾輪蟲正常的繁殖。但兩個高濃度組已經(jīng)與對照組產(chǎn)生了顯著性差異。濃度為2.5 mg/L濃度組在試驗過程中，出現(xiàn)了數(shù)量波動，帶卵率先增加后減少。高濃度5 mg/L濃度組，在試驗過程中，前期還很正常，但第5天帶卵率就已經(jīng)有了大幅度的減少，僅剩下7.3%，說明聚維酮碘高濃度作用于褶皺臂尾輪蟲，使其帶卵數(shù)量減少，影響到正常的生長繁殖。

3.3 聚維酮碘水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

聚維酮碘現(xiàn)已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的消毒劑。研究表明，各種水產(chǎn)動物對于聚維酮碘的耐受性差異較大，已研究出的安全濃度表明，南美白對蝦無節(jié)幼體為0.65 mg/L[5]、暗紋東方鲀稚魚為32.97 mg/L[7]、雙齒圍沙蠶為89.1 mg/L[3]。相比較而言，輪蟲對聚維酮碘是敏感的，除了南美白對蝦無節(jié)幼體小于輪蟲外，其他兩物種遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于輪蟲的使用濃度。林克冰等[4]對石斑魚受精卵進行處理，聚維酮碘5～10 mg/L浸泡卵20 min。吳崗等[8]認(rèn)為采用聚維酮碘500 mg/L浸泡鹵蟲卵30 min，可以達(dá)到殺菌效果。從本實驗看來，該濃度對于鹵蟲當(dāng)時影響不大，但實驗未涉及其后期的生長繁殖情況，無法說明是否影響其繁殖等生命活動。

本實驗表明，褶皺臂尾輪蟲對聚維酮碘是敏感的，劉青等[9]的結(jié)論與本實驗結(jié)果相符。在生產(chǎn)消毒中，保持1 mg/L的濃度是安全的，既能殺滅病菌，也不會對褶皺臂尾輪蟲的生長、繁殖帶來影響。

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