忍冬葉綠原酸含量測定

黃興龍等

【摘要】目的：研究忍冬葉的化學成分，為忍冬葉藥材標準的制定提供實驗數據和科學依據。方法：采用高效液相色譜法測定了綠原酸的含量。結果：綠原酸含量不得少于0.83%。結論：為忍冬葉藥材的準確鑒定和質量標準的制定提供了科學依據和資料，也為忍冬葉的開發應用研究奠定了基礎。

【關鍵詞】忍冬葉；質量標準；高效液相

1實驗方法

1.1色譜條件

色譜柱：Damonsil C18 柱（250x4.6mm，5μm）：流動相：乙睛：0.4%磷酸（14：86），臨用前以0.45gm微孔濾膜過濾并經超聲脫氣處理；檢測波長：327mm：柱溫：35℃；流速：0.8mL/min：進樣量20μl。

1.2對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸標準品4.33mg，置25mL棕色容量瓶中，精密加入水，定容至刻度，搖勻，備用。

1.3供試品溶液的制備

取藥材粉末（過四號篩）0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水25ml，稱定重量，水浴回流45min，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過。棄初濾液，精密吸取續濾液5ml置25ml棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

1.4工作曲線的繪制

分別精密吸取綠原酸對照品溶液各0.5、1、1.5、2、2.5、3mL，置10ml的容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾；按上述色譜條件進行測定，設定進樣體積為20μL，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，綠原酸進樣量為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=29.99X+2.8893，r=0.9999，（n=6）。表明綠原酸在0.1732gg/ml～1.0392gg/ml范圍內呈良好的線性關系，結果見表1、圖1。

1.4.1精密度考察

將4號供試品溶液按上述色譜條件進行測定，連續進樣6次，每次進樣量20μL，測定峰面積，結果見表，RSD=1.62%（n=6），表明精密度良好。如表2所示。

1.4.2重現性考察

精密稱取6份同一樣品（4號），各約0.25g，按上述供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，再上述色譜條件測定，進樣體積為20μL，得出綠原酸峰面積的RSD=2.10%（n=6），表明重現性良好，結果見表3。

1.4.3穩定性考察

精密稱取4號供試品溶液，按上述色譜條件測定，設定進樣體積為20μl，

每隔2h進樣1次，共進6次，測定峰面積，結果見表，RSD=2.82%（n=6），表明樣品溶液在lOh內穩定。如表4所示。2加樣回收實驗

取6份干燥至恒重的己知含量的忍冬葉粉末（4號）約0.25g，精密稱定后，分別加入綠原酸對照品約2mg，按上述條件進行供試品溶液的制備；按上述色譜條件測定進行測定含量，按公式回收率一（測得量一樣品中的含量）/（加入對照品的量）×100%計算，結果表明平均回收率為98.48%，RSD=2.65%（見表5）。

2.1樣品含量測定

按上述色譜條件進行測定，進樣量為20μl，測定不同樣品忍冬葉中綠原酸的百分含量。

2.2數據統計與分析

將測得數據采用SAS統計分析軟件進行顯著性分析。

3結果與分析

本次實驗選用了15批忍冬葉樣品，每個樣品測得了6個含量，不同樣品忍冬葉中綠原酸的平均含量（以干燥品計算）以及經統計學處理的結果見表6。

研究結果顯示，15個樣品中綠原酸含量為0.65～2.56%，樣品間表現出較大的差異。10號樣品葉中綠原酸的含量最高，為2.51±0.048%，并與其它樣品存在顯著性差異；樣品6、2、14、1、5、9、3中綠原酸含量為1.48～2.30%，屬于含量較高的樣品，己經達到了《中國藥典》規定的金銀花中綠原酸的含量，且與其它樣品存在顯著性差異；樣品13、7、8、12、15、4葉中綠原酸含量為0.83～1.38%，屬含量較低的樣品，并與其它樣品比較具有顯著性差=異；樣品11號葉中綠原酸含量最低，僅為0.67+0.018%，亦與其他樣品存在顯著性差異。

（通訊作者：張麗艷）