兩種試劑盒分別檢測豬口蹄疫O型、A型疫苗抗體的對比試驗

楊虹 吳聰

1.南昌市動物疫病預(yù)防控制中心 2.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動物的一種急性、高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）列為A類烈性傳染病，我國將其列為一類動物傳染病。口蹄疫在世界上許多國家地區(qū)都有發(fā)生和流行，對各國養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。目前，發(fā)達國家控制口蹄疫主要采取撲殺、無害化處理等措施。我國采取以疫苗強制免疫為主的綜合措施來防控口蹄疫，主要是通過疫苗免疫使動物產(chǎn)生抵抗該病的有效抗體，以達到預(yù)防的目的。疫苗免疫后抗體水平檢測是評價疫苗免疫效果最簡單最直接的方法。

2018年以前，我國對豬一直進行O型口蹄疫的強制免疫，但根據(jù)農(nóng)醫(yī)發(fā)[2018]1號文件“農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2018年國家動物疫病強制免疫計劃》的通知”各省自行確定對豬進行A型口蹄疫的強制免疫。因此，本檢測室使用VP1-ELISA和SPC-ELISA兩種檢測試劑盒分別對豬口蹄疫O型、A型二價疫苗免疫抗體進行了免疫效果的對比試驗。

一、材料與方法

1.疫苗種類。豬口蹄疫O型、A型二價疫苗，國內(nèi)某生物制品公司生產(chǎn)。

2.血清樣品背景。血清來自本市一個接種豬口蹄疫O型、A型二價疫苗的規(guī)模化豬場，隨機從一次免疫后28天的豬群中采集30份血樣。

3.檢測試劑盒。（1）豬口蹄疫O型病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒（VP1-ELISA）：批號20180302，購自鄭州中道生物技術(shù)有限公司；豬口蹄疫A型病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA診斷試劑盒（VP1-ELISA）：批號20171001，購自鄭州中道生物技術(shù)有限公司；（2）口蹄疫病毒O型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒（SPC-ELISA）：批號PIO 20/2017，購自IZSLER（意大利進口）；口蹄疫病毒A型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒（SPC-ELISA）：批號PIA 4/2017，購自IZSLER（意大利進口）。

4.檢測方法。采集的30份豬血液樣品經(jīng)4℃，3 000 r/min離心3 min后取上清液，按試劑盒使用說明書進行檢測。

5.結(jié)果判定。VP1-ELISA診斷試劑盒O型被檢樣品OD450值≥Cut Off值0.2842則判為陽性，＜Cut Off值0.2842則判為陰性；A型被檢樣品S/P值≥0.3判為陽性，被檢樣品S/P值＜0.3判為陰性。SPCELISA檢測試劑盒O型阻斷率≥50%判為陽性，＜50%判為陰性。SPC-ELISA檢測試劑盒A型阻斷率≥50%判為陽性，＜50%判為陰性。

二、結(jié)果

1.抗體檢測合格率。使用VP1-ELISA診斷試劑盒檢測O型、A型口蹄疫抗體合格率分別為86.67%、80.00%，使用SPC-ELISA檢測試劑盒檢測O型、A型口蹄疫抗體合格率分別為90.00%、83.33%（表1）。

表1 兩種試劑盒檢測抗體合格率

2.抗體檢測離散度。使用VP1-ELISA診斷試劑盒檢測O型、A型抗體水平離散度分別為51.57%、62.85%；SPC-ELISA檢測試劑盒檢測O型、A型抗體水平離散度分別為41.10%、43.59%（表2）。

表2 兩種試劑盒檢測抗體離散度

3.兩種試劑盒符合率。使用SPC-ELISA檢測試劑盒檢測O型、A型的合格樣品中各有1份樣品為VP1-ELISA診斷試劑盒檢測的不合格樣品，二者檢測結(jié)果相差不大，符合率達96.67%（表3）。

表3 兩種試劑盒檢測結(jié)果符合率

三、結(jié)果分析

1.此次使用兩種口蹄疫檢測試劑盒分別檢測O型、A型抗體合格率均在90%以下，影響疫苗免疫抗體合格率高低的因素較多，部分豬抗體不合格可能與豬只健康狀況、母源抗體干擾、免疫程序不合理、疫苗保存使用不當(dāng)、接種操作不規(guī)范等因素有關(guān)。建議首次免疫后28 d加強免疫一次，使抗體不合格的或低抗體水平的豬只抗體水平達到較高的抗體水平，進而達到更好的免疫效果。

2.抗體水平離散度越小，說明抗體整齊度越高，VP1-EISA診斷試劑盒和進口SPC-ELISA檢測試劑盒檢測口蹄疫O型抗體水平離散度小于A型抗體水平離散度，表明O型抗體水平整齊度較A型抗體水平整齊。主要原因有三個，一是疫苗中O型、A型抗原的含量有差異，O型的抗原含量比A型高；二是如果O型和A型的抗原含量一致，那么就說明O型抗原的免疫原性比A型強；三是母源抗體的干擾，仔豬免疫前如果母源抗體水平高，對首次免疫的疫苗有一定的拮抗作用。

3.試劑盒檢測結(jié)果的準確性和試劑盒的敏感性有直接的關(guān)系，從兩種試劑盒的符合率可以看出，國產(chǎn)VP1-ELISA診斷試劑盒和進口SPC-ELISA檢測試劑盒都可以用來評價豬口蹄疫O型、A型二價疫苗免疫后抗體水平，兩種試劑盒的敏感性差異不大。但從檢測效率考慮，建議使用VP1-ELISA診斷試劑盒進行檢測，此種試劑盒操作起來方便，省時省力。

4.根據(jù)農(nóng)醫(yī)發(fā)[2018]1號文件“農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2018年國家動物疫病強制免疫計劃》的通知”各省自行確定對豬進行A型口蹄疫的強制免疫，因此從國家政策方面考慮，豬場不但要重視O型口蹄疫的免疫，還要重視A型口蹄疫的免疫，同時免疫后要加強O型、A型抗體的檢測，從檢測數(shù)據(jù)評價免疫密度和抗體水平，正確評估豬群抵抗口蹄疫病毒的能力。

參考文獻（略）