強力生發丸質量標準研究*

石紅霞，馬 靜，楊 林

（四川大學華西醫院臨床藥學部，四川 成都 610041）

強力生發丸由當歸、首烏、白芍和五味子等11味藥材組方，有補血填精、滋補肝腎、烏須黑發的功效，臨床常用于治療肝腎不足所致頭發早白、稀疏、斑禿、脫發等癥。為了讓本品質量更可控，本研究中采用薄層色譜（TLC）法對強力生發丸中的五味子和當歸進行定性鑒別，參照2015年版《中國藥典（四部）》通則0108“丸劑”項下規定對水分及溶散時限進行了檢查，并參考2015年版《中國藥典（一部）》方法［1］，采用高效液相色譜（HPLC）法測定強力生發丸中芍藥苷的含量，結果準確可靠。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DHG－9140型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）；DK98－1型水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）；PBQⅠ型薄層自動鋪板器（重慶南岸新力實驗電器廠）；KQ3200E型超聲波清洗器（功率為80 W，工作頻率為40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司）；LB－2D型智能崩解時限測定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；XP205DR型十萬分之一電子天平（梅特勒托利多公司）；LC－10AT型高效液相泵、SPD－10Avp型紫外檢測器（日本島津公司）；美國奧泰SS420X工作站；色譜柱為 Scienhome C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm，天津琛航公司）及 Diamonsil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm，迪馬公司）；硅膠G板和硅膠GF254板分別為自制薄層板和市售薄層板（青島海浪硅膠干燥劑廠）。

1.2 試藥

甲醇、乙酸乙酯、正己烷等（分析純，成都市方舟化學試劑廠）；乙腈（色譜純，霍尼韋爾公司）；純凈水（娃哈哈集團有限公司）；芍藥苷對照品（批號為110736－201035），五味子甲素對照品（批號為 110764－201010），當歸對照藥材（批號為 120927 －201510，供鑒別用），均購自中國食品藥品檢定研究院；強力生發丸（成都永康制藥有限公司，批號分別為20160403，20160404，20160405）。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

當歸：取本品10 g，研細，置錐形瓶中，加乙醚50 mL浸泡過夜，時時振搖，過濾，揮干，殘渣加1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。另取當歸藥材0.5 g，加入乙醚10 mL，同法制成對照品溶液。按強力生發丸處方和工藝調配缺當歸的陰性對照品10 g，按上述方法制成當歸陰性對照品溶液。按2015年版《中國藥典（四部）》通則0502試驗，吸取3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 A。

五味子：取本品10 g，研細，置圓底瓶中，加入三氯甲烷50 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液。另取五味子甲素對照品適量，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。按強力生發丸處方和工藝調配缺五味子的陰性對照品10 g，按上述方法制成五味子陰性對照品溶液。照2015年版《中國藥典（四部）》通則0502試驗，吸取3種溶液各10 μL，分別點于同一GF254薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯 －甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑。展開，取出，晾干，置254 nm紫外光燈下觀察。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 檢查

水分檢查參照2015年版《中國藥典（四部）》通則0832水分測定法的第二法（烘干法）進行測定，溶散時限參照2015年版《中國藥典（四部）》通則0921崩解時限的擋板法進行測定。結果水分平均值為7.6%（未超過9.0%），制劑在1 h內全部溶散，平均耗時50 min，均符合相關規定。詳見表1。

表1 水分及溶散時間測定結果

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：采用C18柱為填充劑；流動相：乙腈－0.1%磷酸（15 ∶85）；流速：1.0 mL ／min；檢測波長：230 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL。

2.3.2 溶液制備

對照品溶液：稱取芍藥苷對照品11.90 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為1.190 g／L的對照品貯備溶液；精密量取貯備溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為0.238g／L的對照品溶液，再精密量取該溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得芍藥苷質量濃度為23.8 μg／mL的溶液。

供試品溶液：取本品適量，研成細粉，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率為150 W，頻率為40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用50%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，續濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

陰性對照品溶液：按強力生發丸處方和工藝調制缺白芍藥材的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2.3.2項下3種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣檢測，并記錄色譜圖（見圖2）。結果表明，供試品溶液與對照品溶液均能達到基線分離，芍藥苷主峰分離度良好，分離度（R）≥1.5，陰性對照品溶液在與對照品溶液和供試品溶液色譜相應位置上無吸收峰，說明方法專屬性良好。

線性關系考察：分別精密吸取質量濃度為23.8μg／mL和 0.238 mg／mL 的芍藥苷對照品溶液 5，10，20 μL，注入高效液相色譜儀，以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X，mg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝589.88 X－22 273，r＝0.999 6（n＝6）。結果表明，芍藥苷進樣量在0.119～4.760 mg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取質量濃度為23.8 μg／mL的芍藥苷對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件連續進樣6次，計算峰面積。結果的 RSD 為 0.79%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖2 芍藥苷高效液相色譜圖

穩定性試驗：按2.3.2項下方法制備供試品溶液（批號為 20160403），另取濃度為 23.8 μg ／mL 的芍藥苷對照品溶液適量，分別放置 0，2，4，6，8，12 h，按擬訂色譜條件進樣，記錄峰面積。結果的 RSD為1.56%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批（批號為20160403）強力生發丸適量，研成細粉，稱取6份，每份約2 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液及質量濃度為 23.8 μg ／mL 的芍藥苷對照品溶液各 10 μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄峰面積，計算含量。結果強力生發丸中芍藥苷的平均含量為 0.167 mg／g，RSD為1.45%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的同一批（批號為20160403，含芍藥苷 0.669 mg／g）強力生發丸 6 份，各約1 g，精密稱定，分別置6個具塞錐形瓶中，精密加入芍藥苷對照品溶液（質量濃度為 0.715 mg／mL）1.0 mL，依法制備溶液，按擬訂色譜條件，記錄峰面積，計算回收率。結果見表2。

表2 芍藥苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

各取3批強力生發丸適量，依法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液與質量濃度為23.8 μg／mL的芍藥苷對照品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄峰面積值，計算含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n＝3）

3 討論

首烏為方中君藥，其中二苯乙烯苷類為其活性成分，但由于該類成分在強酸、強堿和遇光條件下易氧化，給操作帶來了不少困難，故未選擇其作為含量測定的指標成分［1］。由于建立復方中藥制劑的含量測定指標成分時一般首選化學性質穩定且含量較高的成分，不建議選取含量較低的成分［2］，故本研究中選用強力生發丸方中臣藥白芍中的活性成分芍藥苷作為本品含量測定的指標成分。芍藥苷的檢測方法有 HPLC 法［2－4］、紫外分光光度（UV）法［5］、薄層掃描法［6］等。采用 UV 法測定時，供試品溶液中微粒成分會影響吸光度值的響應，從而導致定量不準確；采用薄層掃描法時重復性差，操作較煩瑣；而HPLC法的紫外檢測器（HPLC－UV）是一種廣譜檢測器，適用于具有紫外吸收的化學成分分析，其靈敏度較高，穩定性和重復性好，已被廣泛用于這類物質的檢測。

本研究中對方中當歸進行TLC鑒別時，考察了不同的展開劑條件［2－4］，包括甲苯 －乙酸乙酯－冰醋酸（90∶10∶2）、環己烷－二氯甲烷 －乙酸乙酯－甲酸（4∶1 ∶1 ∶0.1）和正己烷 －乙酸乙酯（9 ∶1）等，結果顯示，展開劑為正己烷－乙酸乙酯（4∶1）時，分離度最好。另外還分別在不同渠道的薄層板（自制板和市售板）和不同的點樣量（2.5，5，10，20 μL）下進行了考察，結果方法的重復性和耐用性均良好。曾嘗試過鑒別處方中首烏和丹參藥材，但因鑒別時均出現陰性干擾，故未納入標準。

本研究中考察了不同色譜柱：Scienhome C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），Diamonsil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），不同的流動相條件［5－8］，如乙腈 － 水（17 ∶83），甲醇 －0.05mol／L 磷酸二氫鉀（60∶40）、甲醇 －水（35 ∶65）和乙腈 －水（16 ∶84），以及不同柱溫，如 25，30，35℃。結果顯示，在上述條件下，供試品溶液中與對照品溶液的保留時間一致，綜合考慮分離度、理論板數及出峰時間等因素的影響，發現流動相為乙腈－0.1%磷酸（15∶85）、柱溫為35℃時，芍藥苷與其他組分的分離度達到要求（R≥1.5），拖尾因子（T）為 1.04。另外，在紫外分光光度計下測定芍藥苷的紫外吸收光譜圖發現，在230 nm波長處有最大吸收，故以此為檢測波長。

本研究中還考察了供試品的前處理方法，分別選用超聲提取 30，40min，選用乙醇、30%乙醇和 50% 乙醇［9］為提取溶劑，加熱回流提取 30，40 min 為提取方法［10－12］。結果顯示，強力生發丸以50%乙醇為提取溶劑，超聲處理30 min時，芍藥苷含量和提取效率最高，供試品溶液中芍藥苷與雜質的分離度均達到要求［13－15］。

綜上所述，本方法適用于測定強力生發丸中芍藥苷的含量，可用于其質量控制。