6804例抗線粒體抗體檢測的臨床分析

崔星羽 ，梁從碧 ，陳慧芳 ，艾文倩 ，羅清

(1、南昌大學醫學院，江西 南昌 330006；2、南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006)

抗線粒體抗體 （antimitochondrial antibody，AMA）是針對線粒體兩層生物膜蛋白的抗體，多種組織（肝、腎、胃、心臟）細胞內都含有線粒體膜蛋白，但該抗體主要在原發性膽汁性膽管炎（primary biliary cirrhosis，PBC）病人中特征出現[1]。 PBC 是一種由自身免疫介導的膽汁淤積性肝病，組織學從最初的小葉間膽管炎逐步發展為匯管區周圍炎、小葉間隔纖維化，最終進展為膽汁淤積性肝硬化[2]。該病多見于中年女性，患者血清中常常出現AMA，尤其以M2型抗體陽性為主要特征。自從AMA檢測被廣泛應用于臨床后，發現PBC絕不是一種罕見疾病，近年來發現我國PBC發病率呈逐步增高趨勢，且在自身免疫性肝炎、系統性紅斑狼瘡等其他自身免疫性疾病患者血清中陸續檢測到AMA。本文通過間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）和線性印跡法對6804例患者血清進行了AMA和AMA－M2檢測，現報告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 回顧統計分析南昌大學第一附屬醫院2015年1月1日至2017年6月26日住院和門診6804例患者AMA檢測結果以及2015年1月1日至2017年6月26日AMA陽性住院患者臨床診斷，其中PBC確診參照2015年更新的膽汁淤積性肝病診斷治療專家共識[3]，自身免疫性肝炎確診是依據2010美國肝病學會的診療指南[4]，其他自身免疫疾病如系統性紅斑狼瘡和類風濕關節炎均符合美國風濕病學會診斷標準[5，6]。

1．2 方法

1．2．1 血清抗AMA抗體檢測 采用德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司自身抗體檢測抗原片 （肝臟馬賽克）IIF檢測患者血清AMA抗體。血清1：100稀釋后與抗原基質片反應30min（同時設陽性和陰性對照），用磷酸鹽緩沖液浸泡5min，加入熒光標記的二抗避光孵育30min，再同上浸泡5min，加甘油封片后熒光顯微鏡下判讀結果。以抗體滴度≥1：100為陽性。

1．2．2 血清AMA－M2使用線性印跡法，檢測試劑盒由德國歐蒙診斷公司生產。在第一次溫育時，已稀釋的血清(按試劑盒要求進行1：100稀釋)標本與固定在膜條上的靶抗原反應，如果標本陽性，特異性抗體與相應抗原結合。在第二次溫育時，結合的抗體與辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG抗體反應，加入底物顯色，肉眼直接觀察結果，嚴格按試劑盒說明書要求操作。

1．2．3 統計學分析 用SPSS 17．0統計軟件進行統計分析，計數資料采用四格表χ2檢驗，以P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 6804例患者的AMA總陽性率 在6804例患者中，AMA陽性率為2．35%。其中，男性AMA陽性率為0．65%；女性 AMA陽性率為5．27%，兩組差異有統計學意義 (χ2=146．884，P＜0．001)， 見表 1。 在160例AMA陽性患者中，AMA亞型AMA－M2陽性 151 例，陽性率 94．38%(151/160)。

表1 6804例患者AMA陽性率性別分布比較[n(%)]

2．2 不同年齡組中AMA陽性率分析 本文將研究人群分為3個年齡組≤20歲組、21～49歲組和≥50歲組[7，8]，采用卡方檢驗分析各組以及男女之間AMA的陽性率，結果顯示，不同年齡組陽性率差異具有統計學意義(χ2=52．278，P＜0．001)；21～49 歲組和≥50歲組中的不同性別間AMA陽性率差異同樣有統計學差異(χ2=70．695、63．927，P＜0．001)，見表 2。

表2 AMA陽性患者不同性別、年齡組中AMA陽性率比較[n(%)]

2．3 160例AMA陽性者的科室分布 在各科室的送檢標本中，中醫科和普外科的陽性率最高，原因可能為送檢標本數較少。風濕免疫科（6．63%）、神經內科（4．82%），消化科（5．40%）陽性率較高，見表 3。

2．4 88例AMA陽性患者臨床診斷結果分析 在88例AMA陽性住院患者的臨床診斷結果中，經過統計分析可得：56例AMA陽性患者確診為PBC；10例AMA陽性患者確診為自身免疫性肝炎；7例AMA陽性患者確診為其他自身性免疫疾?。贿€可見于乙肝、腫瘤等其他疾病，經過比較，AMA在PBC中的陽性率最高，見表4。

表3 160例陽性患者的科室分布[n(%)]

2．5 88例AMA－M2陽性與陰性住院患者的臨床診斷結果分析 結果顯示，AMA－M2真陽性率在不同疾病中存在一定的差異。見表4。

表4 88例AMA陽性的臨床診斷結果[n(%)]

3 討論

6804份臨床就診患者AMA檢測標本中的陽性率為2．35%，陽性患者中女性與男性的陽性率比為3．52：1。AMA總體陽性率與國內的報道結果一致[9]。且分析不同年齡階段AMA陽性率發現≥50歲女性組的陽性率最高，這與該病常見于中年女性是相符的[10]。

本研究表明AMA陽性的患者除了出現在中醫科 （8．89%）、 風濕免疫科 （6．63%）、 消化科（5．40%），其在普外科、干部病房和神經內科的陽性檢出率也較高。其原因是在本院以AMA為特征性抗體的PBC主要納入中醫科、風濕免疫科和消化科就診治療[11]，而普外科、干部病房和神經內科檢出率高是因為其送檢率低。旨在提示臨床工作者加大對AMA檢測的關注，準確判斷AMA陽性出現與PBC的關聯性，以防誤診、漏診。

通過對160例AMA陽性患者的分析，本研究發現AMA的亞型AMA－M2陽性的患者為151例，陽性率為94．38%，其原因是AMA存在M2、M4、M8等9個亞型，以M2特異性最高[12]，故臨床上也以檢測AMA-M2為主。此外，調查88例AMA陽性住院患者的診斷結果，發現56例AMA陽性患者確診為PBC。雖然AMA陽性對PBC的確診有一定的意義，但其診斷敏感性和特異性為90%～95%[13]。結合此次數據分析，AMA陽性對PBC預測傾向性不高。繼而對上述88例AMA陽性住院患者中AMA亞型AMA-M2做進一步檢測發現：在56例PBC確診患者中，55例AMA-M2檢測結果陽性，真陽性率達到98.21%。研究結果與其他研究報道是一致[14-16]，AMA-M2對于PBC的診斷較AMA更特異，疾病傾向性高。因此，AMA-M2對于PBC的早期診斷具有巨大的應用價值。故臨床醫生應結合臨床表現和AMA、AMA-M2的聯合檢測來提高PBC的確診率，有效地避免誤診和漏診。

通過本次分析，了解了AMA在男女及其各年齡階段中的分布，研究了AMA陽性患者在各科室中的分布及其陽性率的差異，探討了AMA陽性住院患者的疾病類別及AMA和AMA-M2在不同疾病中的陽性率，檢測AMA及AMA-M2在PBC的早期診斷與治療具有重要意義，因此臨床工作中應重視AMA及AMA-M2在疾病診斷中的臨床價值。