高效液相色譜法測(cè)定頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量

王妍

摘 要：頭孢氨芐為半合成頭孢菌素類廣譜抗生素。頭孢氨芐的作用機(jī)制是抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。方法：采用安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm），水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：頭孢氨芐干混懸劑；含量；測(cè)定

頭孢氨芐化學(xué)名為（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。頭孢氨芐為半合成頭孢菌素類廣譜抗生素。頭孢氨芐抗菌譜與頭孢噻吩相似，除腸球菌屬、甲氧西林耐藥葡萄球菌外，多數(shù)革蘭陽(yáng)性球菌對(duì)本品敏感。

頭孢氨芐干混懸劑適用于敏感細(xì)菌所致的輕、中度急性扁桃體炎、咽峽炎、中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道感染、尿路感染和皮膚軟組織感染等。頭孢氨芐的測(cè)定方法較多[1-5]。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)頭孢氨芐干混懸劑中的頭孢氨芐的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1儀器與試藥

1.1儀器：液相柱溫箱（滕州市滕海分析儀器有限公司）；TH-UP實(shí)驗(yàn)室專用高純水機(jī)（滕州市滕海分析儀器有限公司）；德安特分析天平 0.1mg（上海升徽電子有限公司）；精密電子天平（廈門(mén)德量檢測(cè)儀器有限公司）；HS11-1電熱恒溫水浴鍋（上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；Waters2695高效液相色譜儀（北京京科瑞達(dá)科技有限公司）；721可見(jiàn)光分光光度計(jì)（四川賽恩思儀器有限公司）；SB25-12D超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2色譜柱：安捷倫 C18色譜柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對(duì)照品：青霉素 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.4試劑：甲醇（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、三乙胺（濟(jì)南匯豐達(dá)化工有限公司）、乙腈（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、磷酸二氫鈉（濟(jì)南匯豐達(dá)化工有限公司）、冰醋酸（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、醋酸鈉（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、醋酸（青島雅各化學(xué)試劑銷售有限公司）、磷酸（濟(jì)南匯豐達(dá)化工有限公司）。甲基纖維素（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、枸櫞酸（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、枸櫞酸鈉（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、檸檬黃（西安泰華醫(yī)藥科技有限公司）、香精（湖北武漢新河生物工程有限責(zé)任公司）、蔗糖（湖北武漢新河生物工程有限責(zé)任公司）。

1.5試藥：頭孢氨芐干混懸劑

2測(cè)定方法確定

2.1色譜條件

頭孢氨芐水溶液在pH8.5以下較穩(wěn)定。依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01），檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按頭孢氨芐峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取頭孢氨芐對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取頭孢氨芐干混懸劑適量，研細(xì)，精密稱取，加5毫升流動(dòng)相，超聲2分鐘，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至10毫升容量瓶?jī)?nèi)，即得。

2.4專屬性試驗(yàn)

取甲基纖維素、枸櫞酸、枸櫞酸鈉、檸檬黃、香精、蔗糖等制成陰性樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在頭孢氨芐出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗(yàn)

精密稱取頭孢氨芐對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.89%，表明本方法精密度良好。

2.6對(duì)照品的線性考察

精密稱取頭孢氨芐對(duì)照品20mg，置250ml容量瓶中，加入流動(dòng)相溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1.5、2.5、3.0、3.5、4.5mL，置于5mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，頭孢氨芐在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的頭孢氨芐對(duì)照品，上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.1%，RSD=0.99%。結(jié)果表明此方法的回收率良好。

3結(jié)論

頭孢氨芐干混懸劑適用于流行性感冒，氣腫疽、惡性水腫、壞死桿菌病、等所引起的敗血性高熱（41～43℃）或持續(xù)低溫（37℃以下）等，是臨床常用藥物。本實(shí)驗(yàn)分別考察磷酸鹽緩沖液（pH4.5）-甲醇-乙腈（80：10：10），甲醇-0.2%磷酸溶液（40：60），甲醇-水（67：33），乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液 （pH 6.5）（36：64），水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用水-乙腈-3.86%醋酸鈉溶液-醋酸（800∶180∶20∶0.01）為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量測(cè)定。頭孢氨芐干混懸劑中頭孢氨芐的含量為標(biāo)示量的95-105%。

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