依托紅霉素片含量測定方法的改進

王姣

摘 要：本實驗對依托紅霉素片中的依托紅霉素的測定方法進行研究。方法：采用C18 色譜柱，0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調節pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相，檢測波長為205nm，流速為1.0ml/min。依托紅霉素在0.5～3.0mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。依托紅霉素平均回收率分別為99.3%。結論：本法簡便、準確，可用于依托紅霉素片中依托紅霉素的含量測定。

關鍵詞：依托紅霉素片；含量；測定

依托紅霉素片屬大環內酯類抗生素，對葡萄球菌屬、各組鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具抗菌活性。本實驗采用高效液相色譜法對依托紅霉素片含量進行測定。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高分離度液相色譜”，是色譜法的一個重要分支。1960年中后期以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了高效液相色譜法。高效液相色譜法具有、高壓、高速、高效、高靈敏度、應用范圍廣等特點。本實驗對依托紅霉素片中的依托紅霉素的測定方法進行研究。

1儀器與試藥

1.1儀器：ZXTA-20雙極反滲透實驗室超純水機（北京卓信博澳儀器有限公司）；FA2004電子天平儀器（上海天平儀器技術有限公司）；HWP-5實驗室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三頻恒溫數控超聲波清洗器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；賽默飛Spectronic 200可見分光光度計（百道亨儀器設備（北京）有限公司）；WC-52B1精密恒溫槽（上海思爾達科學儀器有限公司）；DTA-27多功能靜音型臺式超聲波清洗機（鼎泰（湖北）生化科技設備制造公司）；上海PHS-25臺式數顯pH計（上海圣科儀器設備有限公司產品）。

1.2色譜柱：迪馬C18鉆石色譜柱（220 mm×4.6mm，5μm）。

1.3對照品：依托紅霉素

1.4試劑：甲醇（武漢強松精細化學品有限公司）、乙腈（永華化學科技（江蘇）有限公司）、磷酸（武漢強松精細化學品有限公司）、十二烷基磺酸鈉（武漢強松精細化學品有限公司）、三乙胺（武漢強松精細化學品有限公司）、醋酸鈉（淄博鑫榮化工科技有限公司）、醋酸銨（淄博鑫榮化工科技有限公司）、氨水（淄博鑫榮化工科技有限公司）、甲酸（武漢強松精細化學品有限公司）、磷酸二氫鉀（淄博鑫榮化工科技有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢強松精細化學品有限公司）。

2測定方法確定

2.1色譜條件

色譜條件條件如下[1-6]。流動相：0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調節pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相，檢測波長：205nm，流速：1.0m·min-1。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取依托紅霉素對照品適量，加流動相制成每毫升含1毫克依托紅霉素的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取依托紅霉素片，研碎，置25毫升容量瓶中，加入流動相10毫升，超聲處理5分鐘，放冷，用流動相定容，濾過，即得。

2.4精密度試驗

精密稱取依托紅霉素對照品溶液精密吸取10μl，測定6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.56%，表明本方法精密度良好。

2.5對照品的線性考察

精密稱取適量依托紅霉素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0毫克的溶液。依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，依托紅霉素在0.5～3.0mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.6重現性試驗

稱取同一批的依托紅霉素片樣品6份，測定含量并計算RSD值，結果RSD為0.76%，結果表明此方法的重現性良好。

2.7陰性溶液的制備

依照處方取輔料等，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，依上述方法測定，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.8準確度試驗

精密稱取已知含量的樣品9份，加入依托紅霉素對照品，測定含量并技術回收率，回收率為99.3%，RSD為0.83%。

2.9樣品穩定性試驗

取供試品溶液，分別于第0、1、2、3、4、5小時測定并記錄色譜圖。測定依托紅霉素片中依托紅霉素的RSD=0.73%。結果表明供試品5小時內穩定。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定依托紅霉素片三批樣品中依托紅霉素的含量，結果三批樣品的含量分別為標示量的100.6%、99.8%、99.6%。

3討論

分別考察以甲醇-水為流動相梯度洗脫；甲醇-0.02mol·L-1醋酸鈉（62∶40）；乙腈-40mmol·L-1醋酸銨水溶液（氨水調pH至10.5）33：67）；A為0.1%甲酸-水（V/V），流動相B為乙腈，線性洗脫梯度；乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫；10%甲酸水溶液-甲醇/乙腈/水/甲酸（22.5/22.5/40/10，V/V）；磷酸二氫鉀溶液（0.05mol·L-1） -甲醇 （400∶600） （pH4.0）和磷酸二氫鉀溶液 （0.05mol·L-1） -乙腈（55∶45） 梯度洗脫；0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調節pH值至3.4）-乙腈（60∶40），結果以0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（含0.2%三乙胺，并用磷酸調節pH值至3.4）-乙腈（60∶40）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好。本實驗表明此方法可用于依托紅霉素片中依托紅霉素的含量測定。

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