MMP-2與NF-KB在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用

劉 敏

惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)很復(fù)雜的過程，研究表明，癌細(xì)胞脫落后，首先需要突破細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜所結(jié)合而成的屏障，然后才能向周圍擴(kuò)散，進(jìn)入血液系統(tǒng)進(jìn)行轉(zhuǎn)移[1]。由此可見，從分子水平上了解肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)理，是獲取治療肺癌新手段的關(guān)鍵所在[2]。有研究表明，由于基質(zhì)金屬蛋白酶可降解細(xì)胞外基質(zhì)，而核因子信號(hào)傳導(dǎo)通路激活可促進(jìn)MMP的分泌，因此可以推測在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和NF-KB(核因子KB(nuelearafctor-KB)的表達(dá)起到了很重要的作用[3]。本研究就是通過對80例肺癌患者和40例肺癌旁正常組織的MMP-2和NF-KB的表達(dá)水平比較，分析 MMP-2與NF-KB在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。現(xiàn)將相關(guān)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2014年10月至2015年10月，我院80例肺癌組織為觀察組及40例肺癌旁正常組織為對照組。80例肺癌患者中45例男性，35例女性，年齡范圍32～74歲，平均年齡52.8歲，術(shù)前均無化療或放療患者。40例肺癌旁正常組織患者中男性26例，女性患者14例，年齡范圍33～72歲，平均年齡50.5歲。80例肺癌根據(jù)1997年公布修訂的分期標(biāo)準(zhǔn)35例鱗癌，45例腺癌；低分化31例，中分化30例，高分化19例；36例Ⅰ+Ⅱ期，44例Ⅲ+Ⅳ期；44例淋巴結(jié)陽性轉(zhuǎn)移，36例陰性轉(zhuǎn)移。完整隨訪78例，隨訪時(shí)間2015年11月至2016年5月，以手術(shù)日期到隨訪結(jié)束日期記為生存時(shí)間，或者因復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移死亡的日期為生存時(shí)間。本研究征得患者同意并與患者簽訂知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)法

用二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化2組的石蠟切片[4]，浸泡3%甲醇-過氧化氫溶液20 min，抗原袖12 min[5-6]，用購自北京中杉公司的免疫組化SP試劑盒和DAB顯色試劑，10～15 min室溫用H2O2氧化物進(jìn)行染色[7-8]。

1.3 結(jié)果判定

胞膜或胞質(zhì)染成棕色為陽性反應(yīng)，NF-KB以細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性[9-10]。以200個(gè)細(xì)胞作為每張切片的計(jì)數(shù)基數(shù)，統(tǒng)計(jì)不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比。0分：胞膜或胞質(zhì)無染色患者；1分：胞膜或胞質(zhì)染色淺棕患者；2分：胞膜或胞質(zhì)染色深棕患者[11]。不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比：0分為0%～5%；1分為6%～25%；2分為26%～50%；超過50%為3分[12]。胞膜或胞質(zhì)染色分?jǐn)?shù)不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比分?jǐn)?shù)的得分作為陽性表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)[13-14]，強(qiáng)陽性大于6分、中等陽性4～6分、弱陽性2～3分、陰性0～1分，其中陰性或弱陽性為低表達(dá)、中等陽性或強(qiáng)陽性為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0數(shù)據(jù)處理軟件對所得數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果與臨床病理參數(shù)計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、NF-KB在肺癌和正常肺組織中的表達(dá)比較

80例肺癌患者基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-2呈陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)64例，高表達(dá)16例，陽性表達(dá)為20.0%；40例癌旁正常組織呈陰性或少數(shù)微弱陽性11例，陽性表達(dá)28例(71.6%)。2組MMP-2陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.773，P=0.000)。 80例肺癌患者NF-KB呈陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)28例，高表達(dá)52例，陽性表達(dá)率為65.0%，在高倍顯微鏡下腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)或胞核成棕黃色；40例正常肺組織中陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)26例，高表達(dá)14例(35.8%)，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.021，P=0.000)。

由此可以看出MMP-2與NF-KB蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

2.2 MMP-2與NF-KB蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

MMP-2、NF-KB蛋白的陽性表達(dá)與性別、腫瘤大小、病例分型以及吸煙史無明顯關(guān)系，P>0.05；與分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存期有關(guān)。見表1。

2.3 MMP-2和NF-KB蛋白表達(dá)與肺癌患者術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系

80例肺癌患者中78例完整隨訪，隨訪發(fā)現(xiàn)MMP-2低表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于高表達(dá)患者生存時(shí)間，NF-KB高表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于低表達(dá)患者生存時(shí)間，總之患者的生存時(shí)間受MMP-2低表達(dá)和NF-KB高表達(dá)影響。見表2。

3 討論

MMP-2可以降解如基底膜及其結(jié)締組織等細(xì)胞外間質(zhì)，為腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移打開了第一道缺口。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的MMP-2表達(dá)低于正常組織[15]。核因子KB及NF-KB是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，NF-KB信號(hào)通路可以調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡等重要生理功能，同時(shí)與腫瘤發(fā)生聯(lián)系密切。

本研究結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組和對照組MMP-2的表達(dá)率分別為20.0%(16/80)、71.6%(28/40)；實(shí)驗(yàn)組和對照組NF-KB蛋白的表達(dá)率分別為68.7%(55/80)、35.8%(14/40)，數(shù)據(jù)對比顯示，實(shí)驗(yàn)組肺癌患者在MMP-2表達(dá)方面弱于對照組，分析其原因，MMP-2是一組鋅離子依賴性內(nèi)膚酶，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分，在病理情況下，MMP-2通過降解基質(zhì)膜和包繞腫瘤的基質(zhì)，突破基質(zhì)屏障，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。在此過程，癌細(xì)胞通過細(xì)胞與細(xì)胞間粘附的松解而脫離出來，通過溶蛋白過程而進(jìn)入周圍的細(xì)胞外基質(zhì)，再進(jìn)入血管和淋巴管。NF-KB是一種作用十分廣泛的真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，由結(jié)果分析，其陽性表達(dá)隨肺癌分化變高而降低，且MMP-2與NF-KB蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。探究其機(jī)理，在典型NF-KB活化途徑中，細(xì)胞受到外界信號(hào)或致癌因素刺激時(shí)，它能夠誘導(dǎo)激活特定位點(diǎn)上的絲氨酸殘基磷酸化，隨后釋放出大量NF-KB，進(jìn)而轉(zhuǎn)入細(xì)胞核與特定序列DNA結(jié)合，由此可見，NF-KB信號(hào)通路不僅具有調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡等重要生理功能，而且其異常活化與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。另外，隨訪發(fā)現(xiàn)MMP-2低表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于高表達(dá)患者生存時(shí)間，NF-KB高表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于低表達(dá)患者生存時(shí)間。

表1 MMP-2與NF-KB蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系 (例，%)

表2 MMP-2和NF-KB蛋白表達(dá)與術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系

綜上所述，MMP-2的低表達(dá)以及NF-KB蛋白的高表達(dá)對肺癌侵襲轉(zhuǎn)移有直接影響，且MMP-2與NF-KB蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，MMP-2低表達(dá)可促使NF-KB蛋白信號(hào)激活，促進(jìn)肺癌侵襲轉(zhuǎn)移。