低咖啡因普洱茶提取物的促進消化功能實驗研究

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1. 廣東省醫(yī)學實驗動物中心，廣東 佛山 528248； 2. 天士力研究院，天津 300410

功能性消化不良是常見的胃腸道疾病，臨床出現(xiàn)餐后飽脹感、上腹部疼痛或燃燒等癥狀，影響人們生活質量，癥狀較輕時容易被忽視[1]。功能性消化不良的病理生理學尚不完全清楚，常被認為是上消化道炎癥和運動障礙[1]。普洱茶，為山茶科植物普洱茶的嫩葉，味苦、甘，性寒，歸胃、肝、大腸經。普洱茶作為一種傳統(tǒng)歷史名茶，因其獨特的口感和多種保健功能深受人們喜愛。《本草綱目拾遺》記載，普洱茶綠色者更佳，消食化痰，清胃生津，功力尤大[2]。現(xiàn)代文獻記載，普洱茶及其提取物具有抗腫瘤[3]、保護神經系統(tǒng)[4]、降脂減肥[5]、改善卵巢切除術后的骨質疏松[6]，以及殺菌、抗疲勞、抗氧化和預防心血管疾病等[7]功能。

本實驗的普洱茶產地是云南普洱，通過優(yōu)化普洱茶的提取工藝得到低咖啡因普洱茶提取物，主要成分有茶多酚、茶褐素和茶多糖等。本普洱茶提取物的特點是咖啡因含量低，普通普洱茶提取物中咖啡因的含量為7%～9%，本普洱茶提取物中咖啡因的含量為2%～4%，安全性更高[8]。本實驗參照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》(2003版)促進消化功能評價方法[9]，通過檢測大鼠體重、體重增重、攝食量、食物利用率和消化酶，以及小鼠小腸運動實驗，研究此低咖啡因普洱茶提取物對動物的促進消化作用，評價其作為促進消化保健產品的開發(fā)價值。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及實驗環(huán)境 SPF級SD雄性大鼠60只，120～150 g；BALB/c雄性小鼠50只，18～22g，均購于廣東省醫(yī)學實驗動物中心〔SCXK(粵)2013-0002〕，實驗動物質量合格證編號44007200018517和44007200030983。本實驗所有動物實驗操作均在廣東省醫(yī)學實驗動物中心實驗設施內進行，實驗動物使用許可證號：SYXK(粵)2013-0002。

1.2 主要藥品與試劑 低咖啡因普洱茶提取物粉末(批號：20130926)，由云南天士力帝泊洱生物茶集團有限公司提供；復方地芬諾酯片(批號：12030401)，河南鼎昌藥業(yè)有限公司；阿拉伯樹膠(批號：20101119)，天津市大茂化學試劑廠；活性炭(批號：20100611)，茂名市鴻生活性炭廠；鹽酸(批號：20141104-1)，36%～38%，500 mL，廣州化學試劑廠；屈臣氏蒸餾水(批號20150104)，廣州屈臣氏食品飲料有限公司。

1.3 低咖啡因普洱茶提取物提取工藝[8]取適量的普洱熟茶和生茶，分別加10倍水80℃提取2次，每次1 h，過濾，茶渣再加入8倍量的水，80℃提取0.5 h，過濾，合并提取液，過300目濾布，濾液減壓真空濃縮，離心，分別得到熟茶上清液和生茶上清液。取熟茶上清液，加入95%乙醇，醇沉，過夜離心，加水復溶，離心，得上清，噴霧干燥，得到熟茶提取物；取生茶上清液，噴霧干燥得到生茶提取物。熟茶提取物和生茶提取物以4∶1比例混合均勻，得到本次實驗所用普洱茶終提取物。

1.4 分組和劑量設計

1.4.1 大鼠實驗 選擇實驗開始時動物體重的差異不超過平均體重的10%的48只大鼠進行實驗，按體重隨機分為正常對照組、普洱茶提取物低、中、高劑量組，共4組，12只/組。普洱茶提取物分別以人體推薦量的5倍(0.25 g/kg)、20倍(1.0 g/kg)和30倍(1.5 g/kg)作為低、中、高劑量組，正常對照組給予蒸餾水。

1.4.2 小鼠實驗 將檢疫合格的50只小鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、普洱茶提取物低、中、高劑量組，共5組，10只/組。即普洱茶提取物分別以人體推薦量的10倍(0.5 g/kg)、20倍(1.0 g/kg)和30倍(1.5 g/kg)作為低、中、高劑量組，正常對照組和模型對照組給予蒸餾水。

1.5 干預方法 大鼠實驗和小鼠小腸運動實驗分別按照1 mL/100 g BW和0.2 mL/10 g BW的體積灌胃，連續(xù)30 d。

1.6 大鼠體重、體重增重、攝食量、食物利用率測定方法 從實驗開始到結束期間，每周測量2次動物體重和食物總攝入量。計算體重增重和食物利用率。食物利用率(%)=(動物體重增重/食物總攝入量)×100%。

1.7 大鼠消化酶測定方法 實驗結束前，各組動物禁食不禁水24 h，采用幽門結扎法收集5 h內排出的胃液，計算1 h胃液量。胃蛋白酶活性測定采用Mett氏法，選取內徑1.5 mm玻璃管注入新鮮雞蛋清，在熱水浴上平放待蛋白質凝固后取出，選用無氣泡的蛋白管，4℃保存，使用前制成3 cm長度。取胃液1 ml加入0.05 mol/L鹽酸15 mL置三角瓶中混勻，每瓶加入3 cm長度蛋白管2根，密封，置恒溫箱中24 h后取出，用游標卡尺測量蛋白管兩端透明部分的長度(mm)，以四端之值求平均值。計算胃蛋白酶的排出量。胃蛋白酶活性(u/mL)=四端蛋白管透明部分長度均值2×16。胃蛋白酶排出量(u/h)=胃蛋白酶活性×每小時胃液量。

1.8 小鼠小腸運動實驗方法 實驗結束前，各組動物禁食不禁水16 h。測定當天各組再給予相應受試物干預1次。30 min后，各實驗組和模型對照組灌胃復方地芬諾酯(濃度為0.025 %)，正常對照組給予蒸餾水。30 min后，各組再灌胃墨汁，墨汁按照0.2 mL/10 g BW給予。25 min后，頸椎脫臼處死動物，測量小腸總長度(幽門至回盲部)和墨汁推進長度(幽門至墨汁前沿)。計算墨汁推進率：墨汁推進率(%)= 墨汁推進長度(cm)/小腸總長度(cm) ×100%。

2 結果

2.1 體重、體重增重、攝食量和食物利用率(食物利用率經數(shù)據(jù)轉換后進行比較) 與正常對照組比較，各組的初始體重、實驗末體重和食物利用率均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，普洱茶提取物高劑量組的體重增重和總攝食量有所減低(P<0.05，P< 0.01)。見表1～2。結果表明，普洱茶提取物高劑量組可減輕大鼠體重。

表1 對大鼠體重、 體重增重的影響 ♂，n=12)

注：與正常對照組比較，△P<0.05。

表2 對大鼠攝食量及食物利用率的影響 ♂，n=12)

注：與正常對照組比較，△△P<0.01。

2.2 消化酶 與正常對照組比較，普洱茶提取物高劑量組的1 h胃液量和胃蛋白酶排出量顯著增加(P<0.05，P<0.01)，普洱茶提取物低、中劑量組的1 h胃液量和胃蛋白酶排出量未見統(tǒng)計學差異(P>0.05)。與正常對照組比較，各組的胃蛋白酶活性無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。見表3。

表3 對大鼠1 h胃液量、胃蛋白酶活性及排出量的影響 ♂，n=12)

注：與正常對照組比較，△P<0.05 、△△P<0.01。

2.3 墨汁推進率(數(shù)據(jù)轉換后進行比較) 與正常對照組比較，模型對照組小鼠的墨汁推進率轉換值降低(P<0.01)，提示模型建立成功。與模型對照組比較，普洱茶提取物低劑量組小鼠的墨汁推進率轉換值無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，普洱茶提取物中、高劑量組小鼠的墨汁推進率轉換值升高(P<0.01)，見表4。此部分結果表明，普洱茶提取物中、高劑量組可提高墨汁推進率轉換值。

表4 各組小鼠的墨汁推進率 ♂，n=10)

注：與正常對照組比較，△△P<0.01；與模型對照組比較，**P<0.01。

3 討論

從結果可以看出，本實驗的低咖啡因普洱茶提取物可以增加大鼠消化酶測定實驗中的1h胃液量、胃蛋白酶排出量和小鼠小腸運動實驗中的墨汁推進率轉換值。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》促進消化功能的判定方法[9]，其大鼠消化酶測定實驗和小鼠小腸運動實驗均為陽性，此低咖啡因普洱茶提取物具有一定的促進動物消化的功能。不過，在大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率實驗中，各劑量組的體重、體重增重和總攝食量并沒有增加，高劑量組的體重增重和總攝食量反而有所減低，筆者認為，這可能與普洱茶提取物降脂減肥的作用有關。

本實驗普洱茶提取物具有低咖啡因的特點。茶中含有的咖啡因對大腦有興奮作用，對心臟有一定的刺激作用，它可以阻止大腦中腺嘌呤核苷和它的接收器結合，導致神經細胞活動增高，引起心跳加快、血壓增高等副作用[8]。本實驗普洱茶提取物通過優(yōu)化提取工藝，有效地降低了咖啡因的含量，安全性提高，且具有輔助促進動物消化的功能，具有一定的開發(fā)價值。對于促進消化的作用機理，還需后續(xù)進一步研究。