原發性肝細胞肝癌YAP、FOXP1 mRNA的表達及對患者預后的影響

陳 櫞，周 元，尹必輝，李懷亮，侯衛曉，周益龍，邵冰峰，張素青，徐愛兵，張一心*

1.南通大學附屬腫瘤醫院外科，南通 226300 2.南通大學醫學院研究生院臨床醫學系，南通 226019

肝癌在我國發病率居惡性腫瘤的第4位，死亡率居第3位[1]，其中原發性肝細胞肝癌(HCC)占85%～90%以上。南通地區位于江海平原，是乙型肝炎高發地區，大多數患者就診時病變已屬中晚期，如何早期監測肝癌的發生成為關鍵。目前認為，致癌基因的激活與腫瘤發生發展密切相關，抑制癌基因的高表達可以防止正常細胞向惡性轉化，甚至可使惡性腫瘤細胞向正常方向逆轉，從而達到治療腫瘤的目的[2]。Yes-associated protein(YAP)和Forkhead-box P1(FOXP1)是HCC的致癌基因，在HCC組織中二者是否相互作用，值得進一步研究。因此，本研究觀察HCC肝癌組織中YAP、FOXP1 mRNA的表達情況，初步探討二者對患者預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2004年1月至2007年12月本院收治并經病理組織學確診的HCC患者的石蠟腫瘤標本共114例，其中男性91例，女性23例，中位年齡49.28歲(年齡范圍21～75歲)。腫瘤TNM分期按WHO診斷標準，收集患者臨床信息，包括年齡、性別、病理類型、臨床分期等。所有患者術前未經任何放化療和免疫治療，患者詳細資料見表1。本研究經醫院倫理委員會審核批準，所有患者均知情同意。

1.2 主要試劑及儀器 Real-time RT-PCR試劑盒：High Pure RNA Tissue Kit、Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit、LightCycler480 SYBR Green Ⅰ Master均購自Roche公司。YAP、FOXP1、GAPDH引物由上海生工生物工程技術有限公司合成，具體序列如下，YAP引物序列：5′-CTA TTG GTC GTC ATT GTT CTC-3′(正向)，5′-AGT TAG CCC TGC GTA GCC-3′(反向)，FOXP1引物序列：5′-CGG TAC TCA GAC AAA TAC AA-3′(正向)，5′-GTC GGA AGT AAG CAA ACA-3′(反向)，GAPDH引物序列：5′-AGA AGG CTG GGG CTC ATT TG-3′(正向)，5′-AGG GGC CAT CCA CAG TCT TC-3′(反向)。

1.3 Real time RT-PCR測定基因表達 HCC及癌旁石蠟組織(paraffin-embedded tissues)中RNA的提取：將蠟塊組織切成6～8 μm切片，至1.5 mL離心管中，加入1 mL二甲苯，混勻，離心2 min?！?br>