紫外分光光度法測定牛樟芝子實體的總三萜含量

楊彬君，吳建國，吳巖斌，吳錦忠

（福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122）

牛樟芝（Antrodia camphorate T.T.Chang&W.N.Chou）是臺灣一種罕見的藥用真菌，屬擔子菌門菌蔁綱無褶菌目多孔菌科薄孔菌屬，又名樟芝、樟菇、牛樟菇、紅樟芝、血靈芝，牛樟芝生長在臺灣特有的牛樟樹的內部心材上。牛樟樹僅在臺灣生長，主要分布在海拔450～2 000 m的闊葉林中，生長緩慢。近年來，人工培養牛樟芝逐漸興起，主要有椴木栽培、液體培養、固體培養三種方法［1］。牛樟芝活性成分多種，其中已被鑒定的超過200種，主要有三萜、多糖及糖蛋白、類固醇、木脂素、苯醌衍生物、馬來酸和琥珀酸衍生物等［2］。現代研究表明：牛樟芝具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、保肝、預防肝纖維化、神經保護、舒張血管、抗高血壓等作用［3］。其中，三萜是牛樟芝的主要活性成分之一，也是牛樟芝苦味的主要來源，具有抗腫瘤、保肝、降血壓等作用［4］。本研究通過比色法測定人工培育牛樟芝子實體的總三萜含量，為牛樟芝子實體的開發利用提供一定的實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-1800紫外可見分光光度計（日本島津儀器有限公司）；RT-04小型高速粉碎機（北京燕山正德機械設備有限公司）；AR2310千分之一電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］；MS105DU萬分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；DZF-6051真空干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；RE-52系列旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 材料 熊果酸（純度≥98%，上海士鋒生物科技有限公司，批號：201403618）；香蘭素、高氯酸、冰乙酸、甲醇均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；牛樟芝由汕頭君研生物技術有限公司提供，經福建中醫藥大學藥學院吳錦忠教授鑒定為多孔菌科薄孔菌屬植物牛樟芝子實體。

2 方法與結果

2.1 牛樟芝醇提物的制備 牛樟芝子實體切片，60℃干燥后粉碎，過40目篩，60℃干燥至恒重。取牛樟芝粉末20 g，加入400 mL 95%乙醇回流提取3次，過濾，濾液濃縮干燥即得牛樟芝的醇提物。牛樟芝醇提物平均得率為（35.47±0.15）%，RSD為0.4%。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取牛樟芝醇提物5 mg加甲醇定容至10 mL，配制成0.5 mg／mL的供試品溶液。

2.3 標準曲線的繪制 精密稱取熊果酸2.04 mg，加甲醇定容至10 mL，得0.204 mg／mL的熊果酸對照品溶液。 精密量取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL于試管中，水浴揮干，加5%香草醛-冰乙酸溶液0.2 mL、高氯酸 0.8 mL，60℃水浴 15 min，再冰水浴 5 min，加5 mL冰乙酸，搖勻后放置至室溫，于510 nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程：Y＝4.16×10-2X－7.85×10-2，r值＝0.999 1。 熊果酸在 3.4～27.2 μg／mL范圍內線性關系良好。

圖1 熊果酸標準曲線

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度 取濃度為0.2 mg／mL的對照品溶液，按2.3下的方法進行測定，平行6份，得RSD值為2.34%，表明儀器精密度良好。

2.4.2 重復性 取供試品6份，配制成0.5 mg／mL的待測溶液；取600 μL的供試品溶液，按2.3下的方法測定吸光度，計算三萜含量，RSD值為3.3%，表明重復性良好。

2.4.3 穩定性 精密量取樣品，按2.3下的方法測定吸光度，每15 min測定1次，在2 h內顯色穩定，RSD值為1.77%，表明待測樣品溶液在2 h內穩定。2.4.4 加樣回收率實驗 取已知含量的供試品6份，按照1∶1的比例加入一定量的對照品混勻，精密吸取混勻后的供試品溶液，按2.3下的方法測定吸光度，計算加樣回收率和RSD值，結果見表1。計算得平均加樣回收率為102.0%，RSD為1.96%，加樣回收率范圍99.40%～104.63%，表明該方法具有良好的加樣回收率。2.5 牛樟芝醇提物中總三萜的含量測定 取牛樟芝醇提物粉末5 mg，定容至10 mL，即得 0.5 mg／mL的供試品溶液；取600 μL樣品溶液，按2.3下的操作方法進行測定，計算醇提物中總三萜的含量，平行3份。測得牛樟芝醇提物中總三萜含量為（29.40±0.97）%，相當于干品牛樟芝總三萜含量為10.43%。

表1 加樣回收實驗

3 討論

牛樟芝作為傳統藥物在臺灣民間用以解食物中毒、解酒、保肝、治療腹瀉及皮膚瘙癢等癥［5］。近年來由于牛樟芝的人工培養技術日漸成熟，迫切需要建立牛樟芝的質量評價標準，以為其開發利用提供理論依據［6］。

三萜是牛樟芝子實體的重要活性成分之一，可作為評價其質量的重要指標之一。本文以熊果酸作為對照品，采用比色法對牛樟芝總三萜含量進行了測定，結果表明牛樟芝中總三萜含量高達10.43%。該方法測定三萜重復性好，可作為評價牛樟芝子實體質量的方法之一。