2017年華東六省豬偽狂犬病感染抗體檢測

張盼盼，張日騰，范 慧，李仕海，姜 平，白 娟

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動(dòng)物細(xì)菌學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210095）

豬偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies，PRV）感染引起的一種危害較大的豬急性傳染病，在世界大部分地區(qū)呈地方性流行[1]。該病毒有潛伏感染特性，可以伴隨宿主一生。豬的三叉神經(jīng)節(jié)、骶神經(jīng)節(jié)和扁桃體是病毒的主要潛伏位點(diǎn)。應(yīng)激（如運(yùn)輸、保定）和荷爾蒙失調(diào)（如妊娠、產(chǎn)仔）均可使病毒活化并排出[2-3]。豬群感染 PRV后的臨床癥狀各異：仔豬常表現(xiàn)高熱、呼吸困難、運(yùn)動(dòng)失調(diào)并伴有神經(jīng)癥狀；母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎等繁殖障礙；公豬則常見睪丸腫脹、萎縮，種用性能降低或喪失等[4-5]。豬感染PRV后將終生帶毒和排毒。該病毒常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病病毒、鏈球菌等混合感染，因而加劇了該病的防控難度，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[6-8]。

疫苗免疫是防控 PR的重要手段。目前國內(nèi)正在通過免疫PRV gE 基因缺失疫苗并結(jié)合gE抗體檢測，開展PR控制與凈化工作[9-10]。但疫苗免疫并不能完全抵抗PRV野毒感染。新型變異毒株的出現(xiàn)以及弱毒疫苗的安全性隱患等，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[11]。自2011年以來，PRV出現(xiàn)了一系列新型變異毒株，其堿基序列和致病力均與傳統(tǒng)毒株Ea株有較大差異，導(dǎo)致我國許多免疫豬場相繼出現(xiàn)PR疫情[12]。因此，必須加強(qiáng)PR的流行病學(xué)監(jiān)測，掌握該病在我國養(yǎng)豬業(yè)中的流行狀況。本研究對(duì)2017年華東地區(qū)6個(gè)省份310個(gè)場送檢的10 179份豬血清，進(jìn)行PRV gE 抗體檢測，旨在全面了解華東地區(qū)PR流行特點(diǎn)，為日后PR防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2017年共收到來自華東地區(qū)6個(gè)省份310個(gè)不同規(guī)模豬場送檢的10 179份血清樣品（表1）。各豬場抽樣策略為系統(tǒng)抽樣。各豬場均未使用含gE基因的PRV疫苗。

表1 樣品來源及分布情況

1.2 檢測試劑

豬偽狂犬病病毒gE抗體阻斷法鑒別診斷試劑盒：購自美國IDEXX公司。

1.3 檢測方法

取抗原包被板，在反應(yīng)孔中加入2倍稀釋的待檢血清樣本100 μL，并加入等量的陰性和陽性對(duì)照，于18～26 ℃放置1 h后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌4次后拍干；每孔加入100 μL酶標(biāo)記抗體，18～26 ℃ 孵育20 min后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌4次后拍干；每孔加入100 μL TMB底物液，18～26 ℃避光反應(yīng)15 min后，加入終止液50 μL，終止反應(yīng)，5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀測定并記錄其波長650 nm下的光密度值。在陰性對(duì)照值（N）減去陽性對(duì)照值（S）≥0.30成立的前提下，當(dāng)被檢血清樣品的 S/N ≤ 0.60，樣品判定為 PRV gE 抗體陽性；當(dāng)被檢血清樣品的 S/N＞0.70，樣品判定為 PRV gE 抗體陰性；如果 0.60＜S/N≤0.70，則判定為可疑，需再次檢測。在進(jìn)行豬場結(jié)果判定時(shí)，如果豬場有1個(gè)樣品為陽性，則該場判定為PRV野毒陽性場。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

在10 179份血清樣本中，檢出PRV gE抗體陽性血清樣本4 546份，平均樣本陽性率為44.66%；檢出陽性豬場248個(gè)，平均場群陽性率為80.00%。

2.2 空間分布

華東地區(qū)6個(gè)省份樣本中均有PRV gE抗體陽性被檢出，其中山東樣本陽性率最高（62.16%），其次是浙江（48.29%）、福建（47.36%）和江西（34.42%），而江蘇（32.83%）和安徽（28.21%）較低；浙江豬場PRV gE抗體陽性率最高（89.09%），其次是山東（84.38%）、江蘇（79.69%）和江西（73.08%），而福建（68.00）和安徽（66.67%）較低（表2）。

表2 不同省份豬群PRV gE抗體檢測情況

運(yùn)用SPSS 20統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)不同省份豬場及血清樣本的PRV gE抗體陽性率分別進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。結(jié)果顯示：山東、福建、江西、江蘇和安徽5個(gè)省份豬場間的PRV gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），而浙江與江西、安徽豬場陽性率差異顯著（P＜0.05）；浙江和福建，江西、江蘇和安徽之間的血清樣本PRV gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），其余省份間血清樣本PRV gE抗體陽性率差異極顯著（P＜0.001）。

2.3 時(shí)間分布

對(duì)樣品檢測結(jié)果按季節(jié)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)：春季的PRV gE抗體陽性率最高，平均場陽性率為85.06%，樣本陽性率為55.21%；冬季PRV gE抗體陽性率最低，平均場陽性率為74.19%，樣本陽性率為29.38%（表3）。

表3 不同季節(jié)豬群 PRV gE抗體檢測情況

運(yùn)用SPSS 20統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)不同季節(jié)的豬場及血清樣本PRV抗體陽性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：不同季節(jié)的豬場gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05）；夏季和冬季血清樣本gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），而其它季節(jié)血清樣本gE抗體陽性率差異極顯著（P＜0.001）。

2.4 畜間分布

對(duì)樣品檢測結(jié)果按飼養(yǎng)階段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)：種母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬及妊娠母豬血清樣本PRV gE抗體陽性率高于其它豬群，其中種公豬陽性率最低，為27.11%；種母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬群gE抗體陽性率均大于81.2%，高于其他階段豬群，而后備母豬群陽性率最低（表4）。

運(yùn)用SPSS 20統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)不同飼養(yǎng)階段豬群及血清樣本PRV gE抗體陽性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：種母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和妊娠母豬之間，育肥豬和種公豬之間，gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），而種母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬與其它階段豬群的抗體陽性率差異顯著（P＜0.05）；經(jīng)產(chǎn)母豬和妊娠母豬之間，以及后備母豬、育肥豬和種公豬之間，血清樣本gE抗體陽性率差異不顯著（P＞0.05），而種母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和妊娠母豬同后備母豬、育肥豬和種公豬之間，血清樣本gE抗體陽性率差異極顯著（P＜0.001）。

表4 不同階段豬群 PRV gE抗體檢測情況

3 討論

隨著基因缺失疫苗及相應(yīng)鑒別診斷方法的使用，世界上一些PR流行國家相繼啟動(dòng)了根除計(jì)劃并已取得顯著成效[13]。過去幾年，PR在我國大部分地區(qū)存在流行，使得我國對(duì)該病的防控仍然面臨較大壓力。目前，國內(nèi)豬場普遍采用 PRV gE基因缺失疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防，并配套使用 gE-ELISA 抗體檢測試劑盒來區(qū)分免疫與野毒感染[14]，通過定期監(jiān)測豬群PRV gE抗體，淘汰陽性豬，實(shí)現(xiàn)逐步凈化該病的目的。

本研究檢測發(fā)現(xiàn)，2017年華東六省血清樣本gE抗體陽性率達(dá)44.66%，場群gE抗體陽性率為80.00%，說明華東六省豬群普遍存在PRV野毒感染。不同省份的PRV野毒感染水平差異較大。這種差異可能是不同地區(qū)生產(chǎn)管理水平或氣候條件不同造成的，也可能是不同地區(qū)送檢樣品的差異導(dǎo)致的。另外，本次檢測發(fā)現(xiàn)，該病在春季和秋季的感染率高于夏季和冬季，這符合PR的流行特點(diǎn)[15]。不同飼養(yǎng)階段豬群野毒感染率差異較為顯著，種母豬陽性率最高，為60.59%，其次是經(jīng)產(chǎn)母豬，公豬陽性率最低，這與全炎銘等[16]研究結(jié)果一致。同時(shí)，從檢測結(jié)果可以看出，母豬陽性率顯著高于育肥豬，這與母豬在豬場飼養(yǎng)時(shí)間長有直接關(guān)系。另外，本研究結(jié)果顯示，種公豬陽性率最低。這說明公豬站從源頭上嚴(yán)格把關(guān)，淘汰可疑及陽性豬，保證種公豬精液質(zhì)量，起到了明顯的防控效果。豬場母豬飼養(yǎng)周期較長，妊娠母豬感染該病時(shí)，可通過垂直傳播方式感染仔豬，所以母豬群是PR防控的重點(diǎn)。豬場應(yīng)采用科學(xué)的免疫程序，逐頭檢測種母豬和種公豬，堅(jiān)決淘汰陽性豬，建立陰性后備種豬群，最終實(shí)現(xiàn)PR凈化。

4 結(jié)論

本研究對(duì)華東地區(qū)6個(gè)省份的10 179份豬血清樣品，應(yīng)用PRV gE-ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行感染抗體檢測，發(fā)現(xiàn)80.00%的豬場存在PRV野毒感染，個(gè)體陽性率為44.66%，說明這些地區(qū)的PRV野毒感染較為普遍，感染程度較為嚴(yán)重。PR流行呈現(xiàn)一定的季節(jié)性，春秋季節(jié)較為嚴(yán)重，因此需要結(jié)合每年春防和秋防工作，加強(qiáng)PR防控；母豬PRV陽性率較高，是今后PRV凈化的重點(diǎn)豬群，要堅(jiān)持“檢測-淘汰”的原則，逐步建立陰性種豬群，完成PR凈化的目標(biāo)。