高鹽飲食對H.pylori感染的MGs胃黏膜TFF2表達(dá)水平的影響

陳雪 胡又 謝穎 王瑩

【摘要】目的：明確幽門螺桿菌（H.pylori）感染和高鹽飲食對蒙古沙土鼠胃黏膜Trefoil factor 2 （TFF2）表達(dá)的影響。方法：用80只MGs建立H.pylori感染的胃疾病模型。免疫組化檢測TFF2的表達(dá)。結(jié)果：成功建立H.pylori感染的MGs模型，免疫組化結(jié)果顯示，H.pylori+高鹽飲食組中，25% （4/16）的MGs為TFF2高表達(dá)，明顯低于H.pylori組61%（11/18）。結(jié)論：高鹽飲食會降低H.pylori誘導(dǎo)的MGs胃黏膜TFF2的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】TFF2；幽門螺桿菌；高鹽飲食；胃疾病；蒙古沙土鼠

【中圖分類號】R5

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】2096-5249（ 2018） 03-007-02

前言

胃疾病可有多種因素引起，如H.pylori，高鹽等。H.pylori感染可導(dǎo)致多種胃疾病，如淺表性胃炎，萎縮性胃炎、胃潰瘍等[1，2]。研究表明，高鹽飲食可加劇H.pylori誘導(dǎo)的胃疾病[3-6]。

TFF2主要表達(dá)在頸粘液細(xì)胞、深竇腺細(xì)胞和十二指腸Brunner腺中，可對胃黏膜起到保護(hù)作用[7-9]。有研究表明， H.pylori相關(guān)性胃疾病中，TFF2表達(dá)水平高于非H.pylori相關(guān)性胃疾病[10]，腸化生、異型增生以及胃癌組織中TFF2的表達(dá)依次減少[11]。但在H.pylori感染和高鹽飲食這兩種因素同時存在時，TFF2表達(dá)情況如何尚未見報道。

本研究通過檢測胃黏膜TFF2表達(dá)水平以明確H.pylori感染和高鹽飲食聯(lián)合作用對TFF2表達(dá)的影響。

1 實驗材料和方法

1.1 動物和H.pylori菌株

選用6w雄性SPF級MGs80只，隨機(jī)分4組：對照組，H.pylori組，高鹽飲食組和H.pylori+高鹽飲食組，各20只。所有MGs在遼寧千一測試評價科技發(fā)展有限公司的屏障系統(tǒng)內(nèi)飼育管理。

本實驗中，選用的H.pylori，NCTC11637，由遼寧千一測試評價科技發(fā)展有限公司提供。

1.2 H.pylori接種和高鹽飲食處理的實驗方案

H.pylori組和H.pylori+高鹽飲食組動物灌胃給予Iml的菌株懸浮液（1×108 CFU/ml），對照組和高鹽飲食組灌胃給予Iml的生理鹽水，每天1次，連續(xù)3天。然后，對照組及H.pylori組動物正常飲食，高鹽飲食組和H.pylori+高鹽飲食組其食物中摻入10%食用鹽粉末。52周后，將MGs解剖并觀察。

1.3 病理組織學(xué)診斷和H.pylori的組織學(xué)鑒定

HE結(jié)果的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照悉尼法，由一位病理專家診斷，后由另一位專家盲法閱片。

采用Warthin-Starry銀染（北京雷根生物技術(shù)有限公司）鑒定胃組織H.pylori的感染。

1.4 免疫組織化學(xué)染色

采用sP試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），用TFF2抗體（Abcam）免疫組化染色。室溫下，過氧化酶阻斷劑孵育20min；正常非免疫動物血清（羊）孵育25min；TFF2抗體孵育1小時；生物素標(biāo)記的二抗孵育lOmin；鏈菌霉抗生物素一過氧化物酶孵育lOmin；最后DAB顯色。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計分析。HE結(jié)果和TFF2表達(dá)均采用Fisher確切概率法。p<0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 實驗結(jié)果

2.1 成功建立H.pylori感染的MGs模型，此外，H.pylori+高鹽飲食組中胃疾病的發(fā)病率明顯增加

MCs接種52w后，共存活73只（對照組20只；H.pylori組18只；}L pylori+高鹽飲食組16只；高鹽飲食組19只）。

通過Warthin-Starry銀染，鏡下可見胃組織中，H.pylori位于胃黏膜表面粘液層、胃小凹中，呈黑色，彎曲狀或短桿狀菌（圖l，40×）。

HE染色顯示，正常胃黏膜排列整齊，結(jié)構(gòu)正常（圖2A，lOx）。對照組中可見淺表性胃炎3例（圖2B，10×）；H.pylori組中萎縮性胃炎1例（圖2C，20×），淺表性胃炎7例；高鹽組出現(xiàn)淺表性胃炎5例；H.pylori+高鹽飲食組中出現(xiàn)胃潰瘍3例（圖2D，10×），淺表性胃炎8例，萎縮性胃炎2例。H- pylori+高鹽飲食組（13/16）胃疾病的發(fā)病率明顯高于H.pylori組（8/18） （P< 0.05）。

2.2 H.pylori感染會使TFF2表達(dá)上調(diào)，然而，高鹽飲食會降低H.pylo ri感染誘導(dǎo)的MGs胃黏膜TFF2的表達(dá)。

通過免疫組化分析不同組間TFF2的表達(dá)水平。其評分標(biāo)準(zhǔn)為：染色范圍：0（0%），l（O-lO%），2（10-50%），3（50-100%）；染色強(qiáng)度：O（無色），1（淡黃色），2（棕黃色），3（棕褐色）。每個樣本的得分是染色強(qiáng)度和染色范圍的乘積。0-3分為低表達(dá)（圖3A，40×），4-9分為高表達(dá)（圖3B，40x）。

對照組中，15%（ 3/20）為TFF2高表達(dá)；H.pylori組中，61%（ 11/18）為TFF2高表達(dá)，明顯高于對照組（P<0.05）；高鹽飲食組中，21%（4/19）為TFF2高表達(dá)，明顯低于H.pylori組（P<0.05），但與其它組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P> 0.05）；H.pylori+高鹽飲食組中，25%（4/16）為TFF2高表達(dá)，明顯低于H.pylori組（P<0.05），但與其它組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。其中3例胃潰瘍TFF2均為低表達(dá)。

3 討論

本研究成功建立了H.pylori長期慢性感染的胃模型。HE染色顯示，在H.pylori+高鹽飲食組胃疾病發(fā)病率高于H.pylori組，且胃潰瘍只發(fā)生在此組，與H.pylori組相比，雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但不難看出有加重趨勢。因此，可以推斷高鹽飲食可加劇H.pylori引起的胃疾病。

我們還通過免疫組化檢測不同組TFF2的表達(dá)。TFF2是胃黏膜分泌的小分子多肽，具有保護(hù)修復(fù)作用【12】。組化結(jié)果顯示，H.pylori組中TFF2表達(dá)明顯高于對照組。這表明H.pylori長期慢性感染會刺激TFF2表達(dá)增加，這與Kubota等人【10】在人組織中的研究相一致。H.pylori+高鹽飲食組中，胃黏膜TFF2的表達(dá)水平明顯低于H.pylori組，這也提示高鹽飲食會使H.pylori感染誘導(dǎo)的TFF2表達(dá)下降，這一發(fā)現(xiàn)在本研究中被首次提出。Michelis等人發(fā)現(xiàn)，在CagA（cytotoxin-associated geneA）陽性的H.pylori相關(guān)性CAG（chronic active gastritis）中，胃竇部TFF2表達(dá)明顯下降【13】。另外，高鹽可促進(jìn)H.pylori的CagA表達(dá)水平上調(diào)【14】。本研究中，選用了CagA陽性的H.pyloriNCTC11637菌株。我們推測，高鹽飲食之所以會下調(diào)H.pylori誘導(dǎo)的胃黏膜TFF2表達(dá)水平，是因為在高鹽誘導(dǎo)下，CagA毒素分泌增加所致，但具體機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究。

總之，本研究顯示，H.pylori感染會使TFF2表達(dá)上調(diào)，但高鹽飲食會降低H.pylori感染的MGs胃黏膜TFF2的表達(dá)。這一研究結(jié)果首次明確了H.pylori感染和高鹽飲食聯(lián)合作用對MGs胃黏膜TFF2表達(dá)的影響。

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