阿利維A酸原料藥的微粉化工藝研究

楊玉金 唐舒棠 王紹輝

中圖分類號 R943 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）07-0914-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.12

摘 要 目的：篩選阿利維A酸原料藥的微粉化工藝。方法：以原料藥粉碎后的粒徑分布特征值[d（0.9）]和雜質A含量為指標，篩選阿利維A酸原料藥的粉碎方式（萬能粉碎機、球磨機、氣流粉碎機）、粉碎氣源（壓縮空氣、高壓氮氣）、粉碎壓力（0.2、0.4、0.6 MPa），并進行驗證試驗。結果：最優工藝為采用氣流粉碎機以高壓氮氣作為氣源在0.4 MPa下粉碎；驗證試驗中3批原料藥粉碎后的粒徑分別為8.57、8.55、8.54 μm（均小于10 μm，RSD=0.15%，n=3），雜質A的含量與未粉碎前比較未見增加（均為0.07%）。結論：篩選的阿利維A酸原料藥的微粉化工藝操作可行、質量穩定。

關鍵詞 阿利維A酸；微粉化工藝；粉碎工藝；d（0.9）；雜質A

ABSTRACT OBJECTIVE： To screen the optimal micronization technology of Alitretinoin crude drug. METHODS： Using characteristic value of particle size distribution [d（0.9）] and the content of impurity A of crude drug after crushed as indexes， crushing method （universal pulverizer， ball crusher， airslide disintegrating mill）， crushing gas source （compressed air， high pressure nitrogen） and crushing pressure （0.2， 0.4， 0.6 MPa） of Alitretinoin crude drug were screened， and validation test was also conducted. RESULTS： The optimal technology was as follows as airslide disintegrating mill， high pressure nitrogen as gas source， at 0.4 MPa. In validation test， particle sizes for 3 batches of crude drug after crushed were 8.57， 8.55， 8.54 μm （<10 μm，RSD=0.15%， n=3）. The content of impurity A was not increased compared with before crushed （0.07%）. CONCLUSIONS： Screened micronization technology of Alitretinoin crude drug is feasible and stable in quality.

KEYWORDS Alitretinoin； Micronization technology； Crushing technology； d（0.9）； Impurity A

阿利維A酸（Alitretinoin）是一種內源性維甲酸，維甲酸類化合物包含了維生素A系列的代謝產物及其合成類似物。臨床研究表明，維甲酸能調節多種代謝，促進細胞生長和運轉，如細胞分化、增殖和凋亡[1]。阿利維A酸被證實可以用于3種惡性腫瘤即神經母細胞瘤、橫紋肌肉瘤和滑膜肉瘤以及慢性手部濕疹的治療[1-4]。1999年，美國FDA批準0.1%阿利維A酸凝膠劑用于治療卡波濟肉瘤[5]；2009年11月，加拿大批準阿利維A酸軟膠囊上市，用于局部外用強效糖皮質激素無效的慢性手部濕疹患者。

藥物在人體內的吸收速度常常由溶解性決定，固體制劑中的藥物在被吸收前，必須經過崩解和溶解然后轉為溶液的過程，如果藥物不易從制劑中釋放出來或藥物的溶解速度極為緩慢，則該制劑中藥物的吸收速度或吸收程度均達不到被人體吸收而發揮藥效的要求；另一方面，某些藥理作用劇烈、安全指數小、吸收迅速的藥物如果溶出速度太快，可能產生明顯的不良反應，且維持藥效的時間也將縮短。在這種情況下，必須對制劑中藥物的溶出速率進行控制[6-9]。原料藥粒徑是影響制劑溶出速率的關鍵質量屬性。研究表明，阿利維A酸的生物藥劑學分類為Ⅳ類，其在水中的溶解度極低[10]。因此，阿利維A酸釋放過快或者過慢均不利于其在體內的吸收，其溶解行為對生物利用度有極大的影響。為了能夠有效控制阿利維A酸制劑的釋放速度，將其控制在合理范圍內，必須對阿利維A酸的粒徑分布進行有效控制。由于阿利維A酸為共軛多烯類化合物，在空氣中極易吸潮氧化，在制劑研究中對其開展粒徑控制的文獻報道較少，筆者對其進行了相關的粉碎工藝研究，以期為制備可供制劑生產的粒度合格的阿利維A酸原料藥提供參考，同時為這類原料藥的粒度控制方法的建立提供參考。

1 材料

1.1 儀器

YQ100-1氣流粉碎系統（上海賽山粉體機械制造有限公司）；Malvern Mastersizer 2000激光粒度分析儀和Hydro 2000 MU濕法進樣器（英國馬爾文儀器有限公司）；LC2010A高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

阿利維A酸對照品/原料藥（重慶華邦勝凱制藥有限公司，批號：ALI-160301，純度：99.90%，雜質A：0.07%）；阿利維A酸雜質A（阿利維A酸氧化雜質，批號：ALI-A-151201，純度：98.90%）、雜質B（維A酸，批號：TRA-160204，純度：99.78%）、雜質C（異維A酸，批號：ISO-160101，純度：99.85%）、雜質D（11-cis-維A酸，批號：ALI-D-160201，純度：98.67%）對照品均來源于重慶華邦制藥有限公司；聚山梨酯80、甲醇、冰乙酸、正己烷、十二烷基磺酸鈉等均為分析純，均來源于國藥化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 粒度測定方法

2.1.1 進樣方式和進樣器的選擇

參考2015年版《中國藥典》（四部）方法[11]，分別選用干法進樣器和濕法進樣器對微粉后的成品進行測定。結果顯示，濕法進樣器下成品的粒徑測定結果與顯微鏡下標尺測量結果更為接近，由于阿利維A酸原料藥的粒徑分布特征值[d（0.9），代表占總粒子量90%的粒子對應的粒徑]均小于20 μm，干法進樣器的測定結果受到本品分散效率的影響，與顯微鏡下的觀察結果差異較大，故選擇濕法進樣器進行后續試驗中本品粒度的測定。

2.1.2 測定條件的確定

參考2015年版《中國藥典》（四部）方法[11]，在前期試驗中，對測定方法中各條件[包括：分散介質（水、己烷）、分散劑（0.2%聚山梨酯80水溶液、0.1%十二烷基磺酸鈉水溶液）、吸光度（0.01、0.005、0.02）、攪拌速度（800、 1 000、1 200、1 500、1 600、1 900 r/min）、平衡時間（0.5、1、2、3、4、5 min）、測量時間（2、5、10、20 s）]以及供試品溶液制備方法等進行篩選，確定最優的測定條件如下。

（1）分散介質：水；分散劑：0.2%聚山梨酯80水溶液；成品折射率：1.678；成品吸光度：0.01；分散介質折射率：1.33；攪拌速度：1 500 r/min ；平衡時間：1 min；測量時間：10 s；遮光度范圍：5%～15%；分析模型：通用模型；結果類型：體積分布。

（2）供試品溶液制備：稱取微粉阿利維A酸樣品約30 mg，置于50 mL燒杯中，加30 mL分散劑，超聲（頻率：40 kHz，功率：120 W）并攪拌25 min，即得到分散均勻的供試品溶液。

2.1.3 測定方法

在濕法進樣器中加入800 mL分散介質，系統對光及背景扣除完成后，加入供試品溶液，使遮光比在5%～15%，平衡1 min后開始測定，重復測定5次，記錄d（0.9），取平均值。

2.1.4 測定方法驗證結果

參照《中國藥典》要求[11]對上述粒度測定方法進行系統方法驗證。經方法驗證結果表明，采用此方法測定本品粒度，滿足粒徑測定結果。平行6次測定結果的RSD[d（0.1）]≤10%，RSD[d（0.5）]≤6%，RSD[d（0.9）]≤10%，符合2015 年版《中國藥典》（四部）通則粒度方法中第三法[11]的相關規定。

2.2 有關物質含量測定方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Sphorisorb ODS1（150 mm×4.6 mm，3 ?m）；流動相：甲醇-水-冰乙酸=（700 ∶ 294 ∶ 6，V/V/V）；采用紫外檢測器，檢測波長：350 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

（1）供試品溶液：稱取待測樣品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（2）自身對照溶液：精密吸取供試品溶液1.0 mL，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）雜質B對照品貯備液：稱取雜質B對照品20 mg，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（4）阿利維A酸對照品貯備液：稱取阿利維A酸對照品20 mg，精密稱定，置于20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（5）系統適用性溶液：精密移取阿利維A酸對照品貯備液1.0 mL和雜質B對照品貯備液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（6）雜質定位溶液：分別稱取雜質A、雜質C、雜質D對照品20 mg，精密稱定，分別置于3個不同的20 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為雜質A、雜質C、雜質D對照品溶液。移取雜質A對照品溶液0.15 mL，雜質C、雜質D對照品溶液各0.1 mL，雜質B對照品貯備液0.5 mL，置于同一100 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 測定方法

（1）取雜質定位溶液進樣，記錄色譜圖，各雜質出峰順序分別為雜質A、雜質C、雜質D、雜質B。

（2）取系統適用性溶液進樣6次，記錄色譜圖，阿利維A酸與雜質B峰的峰面積RSD均未超過2.0%（如超過，本次試驗結果不可用）。

（3）取供試品溶液進樣，記錄色譜圖（供試品溶液記錄色譜圖中如有與雜質定位溶液記錄色譜圖中雜質A、雜質C、雜質D、雜質B保留時間一致的色譜峰，則判定供試品溶液中的雜質為雜質A、雜質C、雜質D、雜質B）。

（4）取自身對照溶液進樣，記錄色譜圖，計算雜質含量。

①雜質含量計算公式如下：

外標法計算雜質B含量公式：雜質B（%）=（A樣×C對）/（C樣×A對）×Ps×100%。式中：A樣為供試品溶液中雜質B峰的峰面積；C樣為供試品溶液的質量濃度（?g/mL）；A對為雜質B對照品溶液中主峰的峰面積；C對為雜質B對照品溶液的質量濃度（?g/mL）；Ps為雜質B對照品的純度（%）。

②其余雜質含量計算公式：X（%）=Ax/A自×RRF×100%。式中，Ax為供試品溶液中其余雜質（除雜質B外）的峰面積；A自為自身對照溶液中阿利維A酸主峰的峰面積；RRF為校正因子（雜質A的相對校正因子為1.217 1，雜質C的相對校正因子為0.963 0，雜質D的相對校正因子為2.179 0，未知雜質按1計算）。

③總雜質含量計算公式：總雜質=已知雜質總量（%）+未知雜質總量（%）

2.3 原料藥粉碎方法篩選

取適量純度為99.87%的阿利維A酸原料藥，分別用萬能粉碎機（轉速：2 500 r/min）、球磨機（轉速：2 500 r/min）以及氣流粉碎機（高壓氮氣，0.6 MPa粉碎壓力）進行粉碎試驗。按“2.1”項下方法進行粒度測定。按“2.2”項下方法用色譜法進行有關物質測定以及純度[純度（%）=100%-總雜質含量]計算，結果見表1。

從表1可以看出，阿利維A酸采用萬能粉碎機和球磨機進行粉碎后d（0.9）均大于10 μm，而且在粉碎過程中雜質A分別由0.07%增加到了0.56%和0.42%，超出了制劑質量要求。采用氣流粉碎機進行粉碎，d（0.9）均小于10 μm，雜質增加不明顯。因此選用氣流粉碎機對阿利維A酸進行粉碎。

2.4 氣流粉碎機的氣源篩選

在同一氣流粉碎機上分別用壓縮空氣和高壓氮氣在粉碎壓力為0.6 MPa下對阿利維A酸進行粉碎，檢測樣品，結果見表2。

從表2可知，采用壓縮空氣作為氣源，阿利維A酸粉碎過程中雜質A由0.07%增加到0.22%，增加明顯；采用高壓氮氣作為氣源，阿利維A酸粉碎過程中雜質不變，無增加趨勢。

2.5 氣流粉碎機粉碎壓力篩選

在同一氣流粉碎機上，采用高壓氮氣作為氣源，采用不同的逐步降低的粉碎壓力對阿利維A酸進行氣流粉碎，檢測樣品，結果見表3。

從表3可以看出，當粉碎壓力分別為0.2、0.4、0.6 MPa時，粉碎得到的阿利維A酸粒徑分布d（0.9）分別為11.21、8.52、7.96 μm，因此粉碎壓力為0.4、0.6 MPa時可以滿足粉碎后d（0.9）小于10 μm的要求，而且粉碎過程中雜質不增加，純度不下降。

2.6 驗證試驗

在同一氣流粉碎機上，采用高壓氮氣作為氣源，粉碎壓力為0.4 MPa，進行3.0 kg阿利維A酸原料藥的粉碎，3批樣品測定結果見表4。

從表4可以看出，當采用高壓氮氣為氣源、粉碎壓力為0.4 MPa時粉碎得到的阿利維A酸d（0.9）的均值為8.55 μm，3批粒度分布的RSD為0.15%，粉碎過程中雜質不增加，純度不下降。由此證明此工藝條件穩定可靠。

3 討論

為解決對空氣敏感的阿利維A酸原料藥的粒度分布控制的問題，筆者采用了3種不同粉碎方法，并對篩選得到的最優方法氣流粉碎法的氣源和粉碎壓力進行了篩選，以粉碎后原料藥的粒度分布、雜質增長情況和原料藥的純度為指標考察了3種粉碎方法優劣。以高壓氮氣為氣源，在惰性氣體的保護下，阿利維A酸原料藥粉碎過程中不與氧氣接觸，避免了氧化雜質的增大；在粉碎壓力為0.4 MPa時，氣流粉碎機磨盤中物料對撞力度足以將阿利維A酸原料藥顆粒粉碎至d（0.9）為10 μm以下。最終確定了工業化粉碎阿利維A酸原料藥的方法。提供了在空氣中對易氧化的化合物批量粉碎的新方法。

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（收稿日期：2017-10-09 修回日期：2017-11-16）

（編輯：劉 萍）