康艾注射液對乳腺癌組織中PI3k/akt通路和CD、NK細胞的影響

王紅兵 蒲志忠 鄧彬 雷霄

摘要目的：觀察康艾注射液在提高乳腺癌癌患者的臨床療效及其免疫力方面的機制，探討其對PI3k/akt通路的影響。方法：選取2016年1月至2017年9月重慶市開州區人民醫院收治的乳腺癌患者90例，采取隨機數字表法分成對照組和觀察組，各45例。2組均給予乳腺癌相關的基礎治療和化療，觀察組此基礎上予以康艾注射液治療，比較2組治療的臨床療效、免疫指標、臨床受益情況并分析對PI3k/akt通路的影響。結果：治療后臨床有效率觀察組和對照組分別為8623%，6811%，差異有統計學意義（P<005）；治療前2組免疫功能差異無統計學意義（P>005），治療后觀察組免疫功能指標有提高，差異有統計學意義（P<005），但對照組無明顯改變，差異無統計學意義（P>005）；觀察組臨床受益情況（KPS和體重變化的穩定率和改善情況）均明顯比對照組優，差異有統計學意義（P<005）；與治療前比較，2組治療后各時間節點的PI3K、pAKT、bcl水平均下降，差異有統計學意義（P<005），而bax水平則升高，差異有統計學意義（P<005），但是，各時間節點PI3K/AKT信號通路標志性蛋白水平的變化趨勢，對照組比觀察組更明顯，差異有統計學意義（P<005）。結論：康艾注射液可明顯改善乳腺癌患者療效，是通過提高其免疫水平來實現，其中與PI3k/akt通路的介導有密切關聯。

關鍵詞康艾注射液；乳腺癌；PI3k/akt；信號通路；CD；NK細胞；免疫系統；分子生物學

Effect of Kangai Injection on Expression of PI3k / akt in Breast Cancer Tissue and Its Effect on CD and NK Cells

Wang Hongbing， Pu Zhizhong， Deng Bin， Lei Xiao

（Department of General Surgery， People ′s Hospital of Kaizhou District， Chongqing 405400， China）

AbstractObjective：To observe the mechanism of Kangai injection in improving the clinical efficacy and immunity of breast cancer patients， and to explore its effect on PI3k / akt pathway. Methods：From January 2016 to September 2017， 90 patients with breast cancer who were received by our department were divided into control group and observation group by random number table method， with 45 patients in each group. The two groups of patients were given breast cancerrelated basic treatment and chemotherapy， and the observation group was added Kangai injection treatment. The clinical efficacy， immune indicators， clinical benefit and of PI3k / akt pathway of two groups were analyzed. Results：1）The clinical effective rates of the two groups were observation group 8623% and control group 6811% （P<005）； 2）immune function indicators of the two groups before treatment were not comparable （P>005）. 3）The clinical benefit （KPS and the stability and improvement of KPS） were observed in the observation group， and the difference was statistically significant （P<005）. The level of PI3K， pAKT and bcl in the two groups were decreased at all time points after treatment （P<005）， and the level of bax was increased （P<005）. However， the trend of marker protein concentration of PI3K / AKT signal pathway was significantly higher in the control group than in the observation group （P<005）. Conclusion：Kangai injection can significantly improve the efficacy of breast cancer patients， which is achieved by improving its immune level. And it is closely associated with PI3k / akt pathway.

Key WordsKangai injection； Breast cancer； PI3k / akt； Signal pathway； CD； NK； Immune system； Molecular biology

中圖分類號：R2895；R7302文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.026

隨著人們生活節奏的加快和社會競爭的日益劇烈，生活和工作的巨大壓力容易導致一些亞健康甚至是疾病的產生，其中女性的健康和生命質量日益受到關注，近年來最為明顯也最廣受關注的就是乳腺增生，其發病率高達60%[1]。乳腺增生不一定會有明顯臨床表現，最普遍的是乳房脹痛，尤其是月經來前，容易受到忽視。乳腺增生未及時治療容易進展為乳腺癌，乳腺癌近年來的發病年齡也越來越小，通常是采取手術切除的方式，雖然效果顯著，但也確實嚴重影響患者的生活[2]。中醫學對乳腺癌并無明確的中醫學病名，早在幾千年前的傳統古醫學書籍《外科正宗》就明確指出，乳腺癌即乳痹，多為憂郁郁結，轉于肝、思重傷及脾，隨后傷心，經絡阻塞不同，隨后聚集于核[3]。因此，免疫力低下中，肝氣郁結是乳腺癌發病中最關鍵的一個環節，同時，乳腺癌也是機體免疫力低下的重要信號。康艾注射液含有各種免疫活性成分，通過調節或提高機體免疫水平而對癌細胞有一定抑制或抵抗作用，且不良反應小[4]。本研究采用康艾注射液對90例乳腺癌患者進行治療，現報道如下。

1資料與方法

11一般資料選取2016年1月至2017年9月收入我科的乳腺癌患者90例，男女患者各45例，年齡42～74歲，平均年齡（452±71）歲，住院時間8～13 d，平均住院時間（100±20）d。以隨機數字表法分為對照組和觀察組，各45例。2組在性別、年齡、疾病時長、乳腺癌癌腫分型、癌細胞轉移情況以及受教育程度等比較，差異無統計學意義（P>005），具有可比性。見表1。本研究是否經倫理委員會批準（倫理批件號2938294DW）

表12組一般情況比較組別男/女（例）年齡（±s，歲）病程（±s，d）觀察組（n=45）22/23453±41110±19對照組（n=45）23/22466±38109±20χ2/t4784316322P008603450235

12診斷標準西醫的診斷標準：1）采用《中國常見惡性腫瘤診治規范》以及歐洲臨床腫瘤協會年會（EsMO）中提出的關于乳腺癌的診療標準[56]；2）行病理檢查確定為乳腺癌者；3）Kanoarfly評分超過60分。中醫診斷標準：參照《中醫乳腺癌診斷學》中乳腺癌肝郁氣滯型中的相關證候標準[7]。

13納入標準1）符合12診斷標準者；2）年齡40～55歲；3）在本研究前的1個月內沒有采用過與本病相關的治療，比如紫杉醇化療、手術根除治療等措施，并無大手術經歷；4）所有入選患者及家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

14排除標準1）嚴重心、肝、腎臟功能異常者；2）血小板計數<10×109/L者；3）伴有嚴重感染者或治療過程中有嚴重不良反應出現；4）妊娠期、哺乳期婦女；5）精神障礙或語言溝通不暢者；6）中藥不耐受者或藥物過敏。

15脫落與剔除標準1）在研究期間使用治療方案以外藥物者；2）在治療過程中因故中途退出或隨訪中自然脫落者；3）不配合本研究的干預治療措施，影響研究進行者；4）在研究過程中出現嚴重不良反應或并發癥者。

16治療方法2組均給予乳腺癌相關的基礎治療和化療：補液、營養支持、糾正電解質紊亂、白蛋白及止痛等對癥治療等，此外予以化療：紫杉醇（哈爾濱萊博通藥業有限公司，國藥準字H20067522）150 mg/m2和順鉑（齊魯制藥有限公司，國藥準字H20023460）40 mg/m2各加入到5%葡萄糖注射液250 mL，靜脈滴注。觀察組在對照組基礎上加用康艾注射液（由北南康艾抗癌制藥有限股份公司，生產批號：H17384190）50 mL，規格：10 mL/支，主要組成：人參、黃苠和苦參素等。該注射液需加入到09%氯化鈉注射液500 mL進行靜脈滴注，1次/d，在化療后靜脈滴注，共治療14 d。

17觀察指標

171免疫功能綜合評價免疫功能的檢查我們采取查CD3+（總T淋巴細胞）、CD4+（輔助T淋巴細胞）、CD8+（抑制/細胞毒T淋巴細胞）和自然殺傷（NK）細胞，具體方法：由專門培訓過的技術人員，采取由江蘇常州醫療公司提供的專業試劑盒，以及流式細胞儀測定[8]。注意先抽取患者清晨空腹的手肘靜脈血15 mL，在室溫凝固之后，以3 500 r/min離心20 min，再用相關儀器測定。

172乳腺癌組織中磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（PI3K/ Akt）信號通路標志性蛋白測定將術后的乳腺癌組織標本通過采取DAB方法，提取癌組織的蛋白液，測定其他水平后以100 μL蛋白液中加入25 μL的上樣緩沖液，置于100 ℃的蛋白中變性，然后提取上量，120 V，50 mA，15 h，電泳后，用4%濃縮膠進行1次12%分離后提取凝膠，轉印聚偏氟乙烯（PVDF）膜，遵循膠在負極，膜在正極的原則，50 V，100 mA，2 h，用磷酸鹽緩沖液（TBS）洗脫15 min，共3次，分別加入5%脫脂奶粉按1∶1 000稀釋的抗PI3K、pAkt、B淋巴細胞瘤2（Bcl2）、細胞凋亡促進基因（Bax）和βactin抗體（1∶1 000），4 ℃孵育過夜，TBS再如上述所為，加入堿性磷酸酶標記山羊抗兔IgG（1∶2 000）室溫2 h，重復操作TBS洗脫。圖片處理，由美國BDIENGDEIGN公司提供的Model BDEDENGJ 200進行處理。

注：治療前為T0，治療后5 d、8 d、10 d及14 d分別為：T1、T2、T3及T4。

18療效判定標準全面的療效判定標準需參照由視覺模擬評分法（VAS）進行評價的止痛效果標準，即評價治療前后疼痛緩解情況[9]：癌痛痊愈：乳表22組癌痛止痛效果比較組別癌痛痊愈（例）顯效（例）有效（例）無效（例）有效率（%）觀察組（n=45）9141578623對照組（n=45）81012156811χ2428P0022

腺癌腫的癌痛完全消失，VAS評定為完全緩解（CR），大小便、睡覺、飲食等生活均正常；有效：疼痛程度較前有較大程度的緩解，VAS評定為部分緩解（PR），大小便、睡覺、飲食等生活均有明顯好轉；顯效：VAS評分定位輕度緩解（MR），癌腫的癌痛稍有減輕但減輕程度不明顯，大小便、睡覺、飲食等生活均僅是稍微改善；無效：乳腺癌癌痛一點也未改善甚至較前加重，VAS評分定無效（NR），大小便、睡覺、飲食等生活均無改善甚至加重[10]。

19統計學方法應用SPSS 230統計軟件分析本研究的數據，計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩樣本均數采用t檢驗，等級資料進行秩和檢驗，計數資料進行χ2檢驗，以P<00為差異有統計意義。

2結果

212組臨床療效（癌痛止痛效果）比較治療后2組臨床有效率觀察組和對照組分別為8623%，6811%，差異有統計學意義（P<005）。見表2。

222組免疫功能比較治療前2組免疫功能比較，差異無統計學意義（P>005），治療后觀察組免疫功能指標提高，差異有統計學意義（P<005），但對照組無明顯改變，差異無統計學意義（P>005）。見表3。

232組臨床受益情況比較觀察組臨床受益情況（KPS和體重變化的穩定率和改善情況）均明顯比對照組優，差異有統計學意義（P<005）。見表4、表5。

242組PI3K/AKT信號通路標志性蛋白比較與治療前比較，2組治療后各時間PI3K、pAKT、bcl水平均下降（P<005），而bax水平則升高（P<005），各時間PI3K/AKT信號通路標志性蛋白變化對照組比觀察組更明顯，差異有統計學意義（P<005）。見圖1及表6。

3討論

乳腺癌在當今競爭日益劇烈、生活壓力越來越大的社會中，發病率與日俱增，常是由容易受到忽視的乳腺小葉增生或者囊性纖維化逐步演變和發展而來，到發現乳腺癌的時候，已經是不可治療之時，多數采取乳腺切除，這對女性患者，尤其是仍有生育要求的年輕女性患者而言，無疑是沉痛打擊。因此，近年來，研究中致力于探索一種不良反應小但有一定抑制癌細胞作用的藥物，以期為乳腺癌患者帶來福音，人們發現中成藥可以滿足以要求。本研究探索的康艾注射液，其方劑包括：黃芪、人參、苦參素。雖然其成分只有3種，但這3種中藥是通過生化儀器提取出來的藥液，有研究發現，其藥液提取物有一定抗癌作用，但對于其機制，目前仍不明確，總體功效為增強機體免疫功能，益氣復脈[11]。現代藥理研究表明，人參對補充人體的元氣，恢復精力，大有裨益，生津止喝，補腎益脾，可對神經系統產生一定興奮作用，從而抑制腫瘤發展[12]。黃芪和人參對自然殺傷（NK）細胞有一定刺激作用，此外，能夠增強巨噬細胞的作用，強化其吞噬及殺傷作用，對骨髓的代謝有一定促進和激發，可間接刺激白細胞生成，提高免疫力和抗癌能力，若與化療藥同時使用，可以揚長避短，緩解化療藥降白細胞的不良反應，從而降低化療藥物的不良反應[13]。苦參具有堿性的作用，清肺熱除肝火，對機體的免疫功能具有一定調節作用，從而抑制癌細胞。因此，康艾注射液對乳腺癌患者的免疫功能有一定的提高作用，同時有一定抑制癌細胞的抗癌作用。

PI3K/Akt信號轉導通路是抵抗細胞凋亡的，它對其下游的凋亡蛋白產生一定作用，并對細胞周期調節蛋白有一定介導作用，激發其效應，對細胞的凋亡、抑制增殖、細胞的惡變和細胞泡泡膜的轉變有一定介導作用，故該信號轉導通路是目前研究惡性腫瘤的重點。本研究采取該通路研究乳腺癌，大有裨益[14]。T淋巴細胞及其亞群等相關指標的水平是反映人體自身免疫力的最好的血清學指標，T細胞是機體最大免疫細胞亞群之一，其對維持體內內環境的穩定作用顯著[15]。NK細胞可抗腫瘤，對腫瘤細胞直接損傷，此外可誘導白細胞介素2（IL2）、白細胞介素（IL6）、白細胞介素（IL10）和腫瘤壞死因子TNFα的產生，進而增加T淋巴細胞活性，故本研究對白細胞介素、腫瘤壞死因子等炎性反應指標，以及免疫指標進行探討，探索康艾注射液對乳腺癌患者的免疫相關療效[16]。

本研究發現，其臨床療效顯著，對癌痛有一定緩解作用，提高患者生命質量，探索其作用是通過提高患者機體的免疫因子而實現。此外，本研究還發現，采用康艾注射液治療，或對PI3k/akt信號轉導通路有一定作用，并通過改變通路的作用起到抗癌效果。

由于本研究研究時間較短，納入例數也不夠多，仍不具有很強說服力，希望未來能通過大鼠實驗，驗證康艾注射液在PI3k/akt通路上的抗癌機制，以期為臨床提供幫助，進一步提高乳腺癌或者其他惡性腫瘤患者的生命質量和免疫力。

參考文獻

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