小柴胡湯不同煎煮方式對黃岑有效化學成分的影響

陳露露 林汝秀 李瑞明

摘要 目的：探析不同煎煮方式對小柴胡湯中黃岑有效化學成分的影響。方法：選取高效液相色譜法測定小柴胡湯用去滓再煎法與不去滓煎法2種煎煮后的黃岑有效化學成分（黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素）的含量。對照品溶液包括黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素，檢測開始前先進行對照品溶液的線性關系考察及精密度試驗、穩定性試驗、回收率試驗。結果：黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對照品溶液的標準曲線方程分別為Y=4 345 730.98X-8 888.11（r=0.999 8）、Y=2 478 268.68X911.05（r=0.999 5）、Y=771 988 9.74X2 449.03（r=0.999 9）。黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對照品溶液的精密度試驗、穩定性試驗與回收率試驗的RSD均低于2%，平均回收率均高于95%。供試品溶液A中所測得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量分別為（0.364 2±0.027 1）g/L、（10.192 3±0.387 5）g/L、（18.082 2±0.746 5）μg/mL，高于供試品溶液B的（0.282 4±0.047 8）g/L、（8.215 0±0.354 1）g/L、（12.698 2±0.642 9）μg/mL（P<0.05）。結論：去滓再煎法較之傳統不去滓煎法更利于小柴胡湯中黃岑有效化學成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的溶出。

關鍵詞 小柴胡湯;煎煮;方式;黃岑;有效;化學成分

Effects of Different Decoction Methods of Xiaochaihu Decoction on Active

Chemical Constituents of Scutellaria Baicalensis Georgi

Chen Lulu1， Lin Ruxiu1， Li Ruiming2

（1 Department of Pharmacy， Nanfang Hospital of Southern Medical University， Guangzhou 510515， China;

2 Department of Pharmacy， Seventh Affiliated Hospital of Zhongshan University， Shenzhen 518107， China）

Abstract Objective：To study the effects of different decoction methods on the effective chemical composition of Scutellaria baicalensis Georgi in Xiaochaihu Decoction. Methods：The contents of effective chemical composition （Baicalin， Baicalein， Wogonin） in Xiaochaihu decoction boiled by deslagging and non-deslagging and then decocting were determined by high performance liquid chromatography. The comparison solution included the Baicalin， Baicalein and Wogonin. The linear relationship of the comparison solution and the precision test， the stability test and the recovery rate test were carried out before the start of the test. Results：The standard curve equation of Baicalin， Baicalein and Wogonin comparison solution were Y=4 345 730.98X888 8.11 （r=0.999 8）， Y=247 826 8.68X911.05 （r=0.999 5） and Y=771 988 9.74X244 9.03 （r=0.999 9）. The RSD of Baicalin， Baicalein， Wogonin reference solution in the precision test， stability test and the recovery test were all lower than 2% and the average recoveries were all higher than 95%. The contents of Baicalin， Baicalein and Wogonin in test solution A were （0.364 2±0.027 1）mg/mL， （10.192 3±0.387 5）mg/mL and （18.082 2±0.746 5）μg/mL， which were higher than （0.282 4±0.047 8）mg/mL， （8.215 0±0.354 1）mg/mL and （12.698 2±0.642 9）μg/mL in test solution B （P<0.05）. Conclusion：The deslagging and then decocting were more beneficial to the dissolution of Baicalin， Baicalein， Wogonin in Xiaochaihu decoction compared to the non-deslagging and then decocting.

Key Words Xiaochaihu decoction; Decoction method; Scutellaria baicalensis Georgi; Effective chemical composition

中圖分類號：R289.5;R284文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.03.050

小柴胡湯為臨床經典方劑，在各種發熱性疾病的治療中應用廣泛。“去滓再煎”是藥物的一種特殊煎煮方式，即于藥物煎煮一定時間后將藥渣濾去再次煎煮使藥液濃縮。有中醫研究認為，去滓再煎可使藥液濃縮，減少藥液量，減輕患者胃腸負擔;另外藥汁再煎后藥液濃度大，適用于水液運化、轉輸障礙的患者[1]。已有研究顯示，去滓再煎法在半夏瀉心湯、小柴胡湯等方劑中較為多用，且以上湯方均為臨床常用方劑[2]。但有專家提出[3-4]，煎煮方式、藥物配伍比例、炮制等因素均會對中藥方劑中有效成分的溶出造成影響，但有關去滓再煎、不去滓再煎后有效成分含量變化的研究較少，故本研究采用高效液相色譜法測定小柴胡湯用去滓再煎法與不去滓煎法2種煎煮后的黃岑有效化學成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的含量，以探析不同煎煮方式對小柴胡湯中黃岑有效化學成分的影響，以期為臨床中藥煎煮方式的合理應用提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（型號LC-20AT，購自日本島津公司）;分析天平（型號AEL-200，購自湘儀天平儀器廠）;超聲波清洗器（型號KQ3200E，購自昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對照品;甲醇（購自北京普天同創生物科技有限公司，純度≥98%）作為對照品。

1.3 分析樣品

小柴胡湯配方：生柴胡120 g，黃芩（枯芩）、人參、生姜、半夏、大棗各45 g，甘草30 g。組方中所涉及藥材均購自同仁堂藥店。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱溫6 ℃，流動相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（5%～12% A，0～5 min;12%～24% A，5～15 min;24%～27% A，15～20 min;27% A，20～30 min;27%～70% A，20～30 min;70%～100% A，40～50 min;100%～5% A，50～55 min），流速1.0 mL/min，進樣量20 μL，黃芩苷檢測波長在200～400 nm之間掃描，最終供試品在278 nm處有吸收峰而對照品溶液無，確定在278 nm處測定波長。按照以上色譜條件將不同梯度濃度的對照品溶液分別進樣6次，測定峰面積值。并以對照品A、B、C的進樣量作為衡坐標（X）、峰面積值作為縱坐標（Y）進行線性回歸，得到標準曲線方程。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素，置于量瓶中，加甲醇（購自天津市光復科技發展有限公司）溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到對照品溶液A、B、C。取20 μL甲醇作為空白溶劑，注入液相色譜儀進行測定，證實空白試劑對實驗結果無影響后開始測定。

2.3 供試品溶液的制備

分別用2種方法煎煮小柴胡湯：去滓再煎法：按組方劑量稱量藥材，稱量誤差需控制在±0.01 g。稱好后將藥材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超純水浸泡0.5 h。后大火煎煮，水沸后調至小火維持微沸狀態，至藥汁濃縮為1 200 mL時關火，將藥渣濾去，微沸狀態下繼續煎煮藥汁至600 mL，再次關火。得到供試品溶液A。不去滓煎法：按組方劑量稱量藥材，稱好后將藥材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超純水浸泡0.5 h。大火煎煮至水沸，調至小火維持微沸狀態，至藥汁濃縮為600 mL，關火。得到供試品溶液B。

2.4 專屬性試驗

取甲醇20 μL為空白對照試劑，加入液相色譜儀內，在2.1色譜條件下測定，顯示空白溶劑<5 min出峰且較小，無干擾，另取混合對照組溶液、供試品溶液C 20 μL注入液相色譜儀，2.1色譜條件下測定，顯示有效成分和相鄰峰分離均>1.5。

2.5 線性關系考察

取對照品溶液A、B、C，3種溶液均平均分為6份，分別稀釋為6個梯度濃度。見表1。

表1 3種對照品溶液的線性回歸方程

2.6 中間精密度試驗

精密量取對照品溶液A、B、C各6份，測定278 nm處的吸收度，計算精密度試驗的相對標準差（RSD），結果精密度試驗RSD低于2%。見表2。

表2 中間精密度試驗結果

2.7 對照品溶液穩定性試驗

再次精密量取對照品溶液A、B、C各6份，分別于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h時測定278 nm處的吸收度，計算穩定性試驗的RSD。結果：穩定性試驗RSD低于2%。見表3。

表3 對照品溶液穩定性試驗

2.8 回收率試驗

精密量取6份供試品溶液B，每份9 mL，分別置于10 mL的量瓶中，然后加入1 mL的對照品溶液A、B、C各2份進行超聲混合。之后加入甲醇至刻度線進行定容。按照2.3中色譜條件分別進樣，計算黃岑苷的平均回收率及相對標準差（RSD）。結果：回收率試驗RSD低于2，平均回收率高于95%。見表4。

表4 回收率試驗

2.9 樣品測定結果

分別取供試品溶液A、B各6份，按2.3中色譜條件每次進樣20 μL測定樣品中黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的含量。應用SPSS 19.0處理數據，計量資料采用（±s）表示，比較采取獨立樣本t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。供試品溶液A中所測得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量均高于供試品溶液B（P<0.05）。見表5。

表5 2種煎煮方法的黃岑有效化學成分含量比較

（±s，n=6）

3 討論

目前，黃岑藥材內主要主要化學成分的測量方法有電化學法、分光光度法、高效液相色譜法等。其中電化學法、分光光度法檢測的選擇性差，含量的測定結果易受雜質的干擾，為提高研究結果的精度，故本研究選擇高效液相色譜法進行測定。

黃岑的主要成分為黃酮類，包括黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素等。有藥理學研究顯示[5-6]，黃岑苷具有消炎、抗菌等作用;黃岑素可抗菌、利尿并抗變態反應;漢黃岑素可利尿、解痙，故本研究選擇黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素作為對照品。液相色譜法測定過程中，為防止色譜柱出現堵塞導致柱壓升高，研究中的對照品溶液及供試品溶液均經微孔濾膜濾過后進樣。另外，臨床以往多于黃酮類成分顯色后在510 nm處測定其含量[7]，但本研究中的供試品溶液A與B在510 nm處均未見吸收，推測與本研究中的供試品溶液中成分復雜有關。經多次試驗，最終在278 nm處進行測定，且效果滿意。結果顯示黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對照品溶液均具有良好的線性關系，精密度試驗、穩定性試驗與回收率試驗結果也表明，RSD均在2%以上，平均回收率均達95%以上，故本研究的科學性與準確性基本滿意。

中藥的藥療是多組分的協同作用這一觀點已基本達成共識[8]。有研究稱，小柴胡湯為復方制劑，不同成分之間會相互影響[9]。有研究認為，小柴胡湯中的柴胡、人參等藥材中含蛋白、皂苷等表面活性物質，可促使黃酮類成分進入蛋白、皂苷等“膠團”中而使黃岑主要成分的溶解度獲得提高[10]。也有專家指出，人參與柴胡的極性較大，皂化能力強，因而黃岑與柴胡及人參等中藥材配伍后溶出效果更佳，有利于提高方劑療效[12]。有研究提出，中藥方劑在相同配伍的前提下，煎煮方式對有效成分的溶出也會造成不同影響[13]。全方水煎煮是中藥方劑中藥材的傳統提取方法，隨著單味配方顆粒及根據藥味“有效成分”理化性質確定提取方法等新觀點的提出[14-16]，中藥復方制劑的提取方法也逐漸發生變化。在此現狀下明確不同提取工藝對中藥方劑療效的影響非常重要。由于不去滓煎法是臨床最常見的中藥煎煮方式，故本研究設置了去滓煎法與不去滓煎法的2種供試品溶液。結果顯示，供試品溶液A中所測得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量均高于供試品溶液B，證實小柴胡湯采取去滓煎法更利于黃岑主要化學成分的溶出，從而發揮該方劑的藥理學作用[17-18]。姜俠等[19]的研究也證實，不去滓煎法所測得的黃岑苷含量低于去滓再煎法，與本研究結論一致，但2組煎煮方法導致黃岑主要有效化學成分含量差異的具體原因尚不明確。有研究在探討煎藥器具、煎藥時間及火候等因素對中藥方劑主要成分的影響時發現，煎藥時間的影響系數最大[20]。而不去滓煎法與去滓再煎法的煎藥時間理論上會存在差異，推測可能是造成黃岑有效化學成分含量差異的因素之一，有待進一步深入研究。另外，本研究仍存在一定局限性，如尚未觀察其他藥材化學有效成分含量的變化，因此本研究雖初步認為去滓再煎法可提高黃岑類成分的溶出，但方中皂苷類等成分的變化還需完善研究。

綜上所述，小柴胡湯采取去滓再煎法更利于黃岑有效化學成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的溶出。

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