蒙藥肉豆蔻—8散對實驗動物心臟的保護作用研究

肖云峰 李文妍 王玉華

摘 要 目的：研究蒙藥肉豆蔻-8散對實驗動物心臟的保護作用，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。方法：以復方丹參滴丸為陽性對照（0.10 g/kg），采用呼吸耗氧法考察低、中、高劑量肉豆蔻-8散（0.75、1.50、3.00 g/kg）連續(xù)灌胃給藥10 d（每天給藥1次）對正常小鼠和鹽酸異丙腎上腺素致急性心肌缺血缺氧模型小鼠存活時間的影響。以復方丹參滴丸為陽性對照（0.04 g/kg），考察低、中、高劑量肉豆蔻-8散（0.28、0.56、1.12 g/kg）連續(xù)灌胃給藥10 d（每天給藥1次）對氯仿-腎上腺素致急性心律失常模型兔心律失常潛伏期、心律失常持續(xù)期的影響，以及對垂體后葉素致急性心肌損傷模型兔心臟的T波波幅、S-T段波幅和血清中內源性物質[乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和肌酸激酶（CK）]水平的影響。各實驗均設置相應的空白對照和模型對照（均給予0.5%羧甲基纖維素鈉）。結果：復方丹參滴丸和中、高劑量肉豆蔻-8散均能顯著延長正常小鼠和急性心肌缺血缺氧模型小鼠的存活時間（P<0.05或P<0.01）。復方丹參滴丸和高劑量肉豆蔻-8散均能顯著延長兔的心律失常潛伏時間（P<0.05），顯著縮短兔的心律失常持續(xù)時間（P<0.05）。復方丹參滴丸和中劑量肉豆蔻-8散均能顯著降低急性心肌損傷模型兔心臟的ΣT波增幅（P<0.05或P<0.01），復方丹參滴丸和中、高劑量肉豆蔻-8散均能顯著降低急性心肌損傷模型兔心臟的ΣS-T段波幅（P<0.05或P<0.01）；復方丹參滴丸和低、高劑量肉豆蔻-8散均能顯著降低急性心肌損傷模型兔血清中LDH水平（P<0.05），中、高劑量肉豆蔻-8散分別能顯著降低急性心肌損傷模型兔血清中MDA、CK水平（P<0.05），中、高劑量肉豆蔻-8散均能顯著升高急性心肌損傷模型兔血清中SOD水平（P<0.05）。結論：蒙藥肉豆蔻-8散對實驗動物的心臟有保護作用。

關鍵詞 蒙藥；肉豆蔻-8散；耐缺氧；急性心律失常；急性心肌缺血缺氧；小鼠；兔

中圖分類號 R285.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）21-2944-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.21.15

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the protective effect of Mongolian medicine Roudoukou-8 powder on cardiac tissue of experimental animals. METHODS： Using Compound danshen dripping pill as positive control （0.10 g/kg）， the experimental animals were given low-dose， medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder （0.75， 1.50， 3.00 g/kg） intragastrically for 10 d once a day， and respiratory oxygen consumption method was used to investigate its effects on survival time of normal mice and isoproterenol hydrochloride-induced acute myocardial ischemia and hypoxia model mice. Using Compound danshen dripping pills as positive control （0.04 g/kg）， the experimental animals were given low-dose， medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder （0.28， 0.56， 1.12 g/kg） intragastrically for 10 d once a day， and its effects on arrhythmia latency and arrhythmia duration of chloroform-epinephrine induced arrhythmia model rabbits was investigated as well as its effects on T wave amplitude， S-T amplitude and serum endogenous substance （LDH， SOD， MDA， CK） levels of cardiac tissue in pituitrin-induced acute myocardial injury model rabbits. The corresponding blank control and model control were provided in all experiments. RESULTS： Compound danshen dripping pill， medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly prolong survival time of normal mice， acute myocardial ischemia and hypoxia model mice （P<0.05 or P<0.01）. Compound danshen dripping pill and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly prolong arrhythmia latency of rabbits （P<0.05）， and also significantly shortened arrhythmia duration （P<0.05）. Compound danshen dripping pill and medium-dose of Roudoukou-8 powder could significantly decrease the increase of ΣT wave amplitude in cardiac tissue of acute myocardial injury model rabbits （P<0.05 or P<0.01）. Compound danshen dripping pill， medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly decrease the increase of ΣT wave amplitudein cardiac tissue of acute myocardial ischemia model rabbits （P<0.05 or P<0.01）. Compound danshen dripping pill， low-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly decrease the serum level of LDH in acute myocardial ischemia model rabbits （P<0.05）. Medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly decrease the serum levels of MDA and CK in acute myocardial ischemia model rabbits （P<0.05）. Medium-dose and high-dose of Roudoukou-8 powder could significantly increase the serum levels of SOD in rabbits （P<0.05）. CONCLUSIONS： Mongolian medicine Roudoukou-8 powder can improve the myocardial oxygen supply， protect the injured cardiomyocytes， prolong the arrhythmia latency and shorten the duration of arrhythmia in experimental animals， and have a protective effect on the heart of experimental animals.

KEYWORDS Mongolian medicine； Roudoukou-8 powder； Hypoxia tolerance； Acute arrhythmia； Acute myocardial ischemia and hypoxia； Mice； Rabbit

心腦血管疾病是當今世界上病死率最高的疾病，具有較高的發(fā)病率、致殘率和復發(fā)率，且并發(fā)癥多。目前，我國心腦血管疾病患者已經(jīng)超過2.7億人，每年近300萬人死于此類疾病，占我國每年總死亡病因的51%[1]。心腦血管疾病是全身性血管病變或系統(tǒng)性血管病變在心臟和腦部的表現(xiàn)，其中心臟血管疾病主要包括心律失常、心絞痛、心肌梗死等[2]。心律失常是由于心房或者心室律動異常，使心電信號阻滯傳導或異常傳導所致；心絞痛大多是由冠狀動脈前降支或回旋支梗死、供血不足誘發(fā)，使心肌缺血、缺氧所致。當前臨床用于心血管疾病的藥物很多，但大多具有明顯的副作用。

蒙藥肉豆蔻-8散由肉豆蔻、沉香、丁香、廣棗、木香、旋覆花、阿魏、牦牛心臟等八味蒙藥材組成，最早收載于《金色柯子花蕾》（后更名為《普濟方集》）中[3]，目前該方被《內蒙古蒙藥制劑規(guī)范》第二部收錄，作為經(jīng)典傳統(tǒng)經(jīng)驗方，在蒙藥臨床有兩百多年的延用歷史，主要用于治療心律失常、冠心病、心絞痛等疾病誘發(fā)的心悸、氣短、胸悶、心區(qū)疼痛等“心赫依”病（心絞痛、心律失常、冠心病等心肌缺血缺氧類疾病心臟疾病）[4]，但缺少實驗研究基礎。鑒于此，本研究采用常壓耐缺氧模型、鹽酸異丙腎上腺素致急性心肌缺血缺氧模型、氯仿-腎上腺素致急性心律失常模型和垂體后葉素致急性心肌損傷模型，對肉豆蔻-8散實驗動物心臟的保護作用進行初步探討，為其臨床應用提供實驗參考。

1 材料

1.1 儀器

MP150數(shù)字式多導生理信號記錄儀（美國 Biopac公司）；3K15低溫冷凍離心機（美國Sigma公司）；BS2202S電子天平（北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2 藥品與試劑

肉豆蔻-8散（內蒙古醫(yī)科大學藥學院參考《普濟方集》[3]中記載的方法制備，批號：20121207，規(guī)格：每袋3 g）；復方丹參滴丸（天津天士力制藥集團股份有限公司，批號：130407，規(guī)格：25 mg/丸）；鹽酸異丙腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號：140722，規(guī)格：1 mg ∶ 2 mL）；鹽酸腎上腺素注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號：1406231，規(guī)格：1 mg ∶ 1 mL）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心，批號：20121030）；垂體后葉素注射液（天津君安生物制藥有限公司，批號：20131005，規(guī)格：10 U/mL）；戊巴比妥鈉（中國醫(yī)藥上海化學試劑公司，批號：F20120625，化學純）；超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）、丙二醛（MDA）、肌酸激酶（CK）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20131107、20140119、20140228、20140113）。

1.3 動物

清潔級KM小鼠132 只，♂，體質量（20.0±2.0） g，由內蒙古大學實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蒙）2012-0001。小鼠購入后，每5只飼養(yǎng)于1個飼養(yǎng)盒中，喂以北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供的大小鼠維持飼料，飼養(yǎng)期間自由攝水，并控制飼養(yǎng)環(huán)境室溫為19～25 ℃、濕度為40%～60%。適應性飼養(yǎng)1周后開始實驗。

普通級日本大耳白兔88只，♀♂各半，體質量（2.1±0.2） kg，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2010-0002。兔購入后，采用干養(yǎng)法飼養(yǎng)于普通環(huán)境中，單只單籠飼養(yǎng)，喂以北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供的兔維持飼料，飼養(yǎng)期間自由攝水，并控制飼養(yǎng)環(huán)境室溫為19～25 ℃、濕度為40%～60%。適應性飼養(yǎng)1周后開始實驗。

2 方法

2.1 肉豆蔻-8散對正常小鼠常壓耐缺氧能力的影響

取小鼠60只，隨機分為5組，即空白對照組、陽性對照組和肉豆蔻-8散低、中、高劑量組，每組12 只。空白對照組小鼠灌胃0.5%CMC-Na溶液20 mL/kg；肉豆蔻-8散低、中、高劑量組小鼠分別灌胃肉豆蔻-8散0.5%CMC-Na混懸液0.75、1.50、3.00 g/kg（以生藥量計，分別為臨床用藥等效劑量的1、2、4倍）；陽性對照組小鼠灌胃復方丹參滴丸0.5%CMC-Na混懸液0.10 g/kg（臨床用藥的等效劑量）。每天給藥1次，連續(xù)給藥10 d。末次給藥30 min后，將小鼠置于含15 g鈉石灰和0.2 g吸水紙的250 mL廣口瓶中，每瓶1只，用凡士林涂抹廣口瓶瓶口并蓋緊瓶蓋，防止漏氣，用秒表記錄各組小鼠的存活時間，并計算給藥后小鼠的存活時間延長率[存活時間延長率（%）=（給藥組存活時間-空白對照組存活時間）/空白對照組存活時間×100%]。

2.2 肉豆蔻-8散對急性心肌缺血缺氧模型小鼠常壓耐缺氧能力的影響

取小鼠72只，隨機分為6組，即空白對照組、模型對照組、陽性對照組和肉豆蔻-8散低、中、高劑量組，每組12 只。空白對照組和模型對照組小鼠灌胃0.5%CMC-Na溶液20 mL/kg，其余各組小鼠按“2.1”項下劑量和方式給藥，每天給藥1次，連續(xù)給藥10 d。末次給藥30 min后，除空白對照組小鼠皮下注射生理鹽水10 mL/kg外，其余5組小鼠均皮下注射鹽酸異丙腎上腺素注射液10 mg/kg[5]，復制急性心肌缺血缺氧模型。皮下注射15 min后，按“2.1”項下方法測定小鼠的存活時間并計算存活時間延長率。

2.3 肉豆蔻-8散對正常兔急性心律失常的影響

取40只兔（♀♂各半），隨機分為5組，即空白對照組、陽性對照組和肉豆蔻-8散低、中、高劑量組，每組8 只。空白對照組兔灌胃5%CMC-Na溶液5 mL/kg；陽性對照組兔灌胃復方丹參滴丸5%CMC-Na溶液0.04 g/kg（臨床用藥的等效量）；肉豆蔻-8散低、中、高劑量組兔分別灌胃肉豆蔻-8散0.28、0.56、1.12 g/kg（以生藥量計，分別為臨床用藥等效劑量的1、2、4倍）。每天給藥1次，連續(xù)給藥10 d。末次給藥1 h后，采取仰臥位將兔固定于37 ℃的恒溫固定臺上，將四根數(shù)字式多導生理信號記錄儀針式電極按對應標記插入四肢遠端皮下，吸入氯仿，麻醉兔，采用Biopac AcqKnowledge 4.3軟件記錄正常心電圖，待完全麻醉后，耳緣靜脈注射0.025%鹽酸腎上腺素75 ?g/kg，持續(xù)觀察心電圖波動情況至其心律波動完全恢復正常，比較各組兔心律失常潛伏時間和心律失常持續(xù)時間。

2.4 肉豆蔻-8散對急性心肌損傷模型兔心肌損傷的影響

取兔48只（♀♂各半），隨機分為6組，即空白對照組、模型對照組、陽性對照組和肉豆蔻-8散低、中、高劑量組，每組8只。空白對照組和模型對照組兔灌胃5%CMC-Na溶液5 mL/kg；其余各組兔的給藥方式和劑量同“2.3”項下。每天給藥1次，連續(xù)給藥10 d。末次給藥1 h后，兔耳緣靜脈注射2.5 %戊巴比妥鈉1 mL/kg，待麻醉后股動脈取血5 mL并仰臥固定于37 ℃的恒溫臺上，分別用紅、黃、綠、白四根心電導聯(lián)線與數(shù)字式多導生理信號記錄儀和兔四肢內側近心端和胸部連接，記錄正常心電圖。5 min后，除空白對照組兔耳緣靜脈注射生理鹽水5 mL/kg外，其余5組兔耳緣靜脈注射垂體后葉素2.0 U/kg[6-7]，復制急性心肌損傷模型，觀察并記錄之后15 min內心電圖的變化，缺血前后各組兔T波波幅、S-T段波幅變化，計算T波波幅增長率和S-T段波幅增長率。T波波幅增長率（%）=（模型對照組ΣT波增幅-給藥組ΣT波增幅）/（模型對照組ΣT波增幅-空白對照組ΣT波增幅）×100%，S-T段波幅增長率（%）=（模型對照組ΣS-T段波幅-給藥組ΣS-T段波幅）/（模型對照組ΣS-T段波幅-空白對照組ΣS-T段波幅）×100%，式中ΣT波增幅為缺血后各期T波增幅的總和，ΣS-T段波幅為缺血后各期S-T波增幅的總和。將血液以3 500 r/min離心10 min，分離血清，按相應試劑盒方法檢測血清中LDH、SOD、MDA、CK水平。

2.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，采用單因素方差分析進行組間比較，方差齊時組間兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊時采用Games-Howell檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 肉豆蔻-8散對正常小鼠常壓耐缺氧能力的影響結果

與空白對照組比較，陽性對照組和肉豆蔻-8散中、高劑量組小鼠的存活時間顯著延長（P<0.05或P<0.01），肉豆蔻-8散低劑量組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），結果見表1。

3.2 肉豆蔻-8散對急性心肌缺血缺氧模型小鼠常壓耐氧能力的影響結果

與空白對照組比較，模型對照組小鼠的存活時間顯著縮短（P<0.01）；與模型對照組比較，陽性對照組和肉豆蔻-8散中、高劑量組小鼠的存活時間均顯著延長（P<0.05或P<0.01），肉豆蔻-8散低劑量組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），結果見表2。

3.3 肉豆蔻-8散對正常兔急性心律失常的影響結果

與空白對照組比較，陽性對照組和肉豆蔻-8散高劑量組小鼠的心律失常潛伏時間顯著延長（P<0.05），陽性對照組和肉豆蔻-8散中劑量組小鼠心律失常持續(xù)時間顯著縮短（P<0.05），結果見表3。

3.4 肉豆蔻-8散對急性心肌損傷模型兔心電圖和血清內源性物質的影響結果

3.4.1 心電圖變化 與空白對照組比較，模型對照組兔ΣT波增幅、ΣS-T段波幅顯著升高（P<0.01）；與模型對照組比較，陽性對照組、肉豆蔻-8散中劑量組兔ΣT波增幅顯著升高（P<0.05或P<0.01），陽性對照組和肉豆蔻-8散中、高劑量組兔ΣS-T段波幅顯著升高（P<0.05或P<0.01），結果見表4。

3.4.2 血清內源性物質水平變化 與空白對照組比較，模型對照組兔血清中LDH、MDA、CK水平顯著升高（P<0.05或P <0.01），SOD水平顯著降低（P<0.05）；與模型對照組比較，陽性對照組和肉豆蔻-8散低、高劑量組兔血清中LDH水平均顯著降低（P<0.05），肉豆蔻-8散中劑量組兔血清中MDA水平和肉豆蔻-8散高劑量組兔血清中CK水平均顯著降低（P<0.05），肉豆蔻-8散中、高劑量組兔血清中SOD水平顯著升高（P<0.05），結果見表5。

4 討論

心肌細胞缺血缺氧是心血管疾病發(fā)病的主要原因，心血管疾病發(fā)病后的主要癥狀表現(xiàn)為心肌組織缺血、缺氧、埂塞、心律失常、心肌損傷。復方丹參滴丸作為活血化瘀、理氣止痛的中藥，臨床常用于氣滯血瘀所致的胸悶、心前區(qū)刺痛、冠心病、心絞痛等疾病的治療，故本研究將其作為陽性對照藥物使用。肉豆蔻-8散組方中君藥為肉豆蔻，可以緩解心臟刺痛、心慌等癥狀[8-9]；臣藥為牦牛心和沉香，可緩解心臟血管平滑肌痙攣，使血液重新灌注缺血的心肌組織，改善心臟缺血缺氧癥狀[10-13]；佐藥為木香、丁香、阿魏和旋覆花。其中，木香和丁香可以理氣止痛，阿魏、旋覆花可以清熱涼血，四佐藥共用可以輔助肉豆蔻活血止痛、行氣化瘀[14-16]；使藥為廣棗，可以活血行氣、寧神、養(yǎng)心[17]。組方中八味蒙藥材共同配伍，可以治療心律失常、心絞痛、冠心病等心血管疾病。

心臟組織缺血后會誘發(fā)心肌損傷、心律不齊或心肌梗死，疾病在發(fā)展過程中，心電圖會發(fā)生ΣT波波幅和ΣS-T段波幅延長、T波倒置。分子生物學表現(xiàn)為消除體內新陳代謝過程中產(chǎn)生有害物質的抗氧化酶SOD能力下降，心肌細胞損傷釋放出的大量的內源性物質（如LDH、MDA、CK等）。心肌缺血患者的臨床表現(xiàn)主要為心悸、心前區(qū)不適、有時心前區(qū)疼痛或呈放射痛、周身無力，嚴重時甚至發(fā)生休克。本研究采用常壓耐缺氧模型實驗、鹽酸異丙腎上腺素致急性心肌缺血缺氧模型實驗、氯仿-腎上腺素致急性心律失常模型實驗和垂體后葉素致急性心肌損傷模型實驗，來評價肉豆蔻-8散對律失常、心絞痛、冠心病、心肌損傷等心血管疾病的治療作用。實驗結果表明，肉豆蔻-8散可以明顯提高正常小鼠和急性心肌缺血缺氧模型小鼠的常壓耐缺氧能力，顯著延長兔急性心律失常的心律失常潛伏時間，縮短其心律失常持續(xù)時間。由此可知，肉豆蔻-8散可延緩心律失常的發(fā)病時間，并縮短心律失常的病程。本研究還證實了肉豆蔻-8散可顯著降低急性心肌損傷模型兔心電圖的ΣT波增幅和ΣS-T段波幅，與此同時，升高血清中SOD水平和降低血清中LDH、MDA、CK水平。

綜上所述，本研究通過動物實驗，證實了肉豆蔻-8散的心臟保護作用，但本研究仍處于初級階段，其對心臟保護作用的機制還需進一步研究。

參考文獻

[ 1 ] 章激.氯吡格雷聯(lián)合阿司匹林治療心腦血管疾病的研究進展[J].中國藥房，2016，27（36）：5182-5184.

[ 2 ] 韓貞愛，汪娜，薛迪. 黃芩有效成分治療心腦血管疾病藥理作用的研究進展[J].中國藥房，2015，26（21）：3015- 3017.

[ 3 ] 阿克旺·羅布桑·丹必扎拉申.普濟方集：蒙文版[M].赤峰：內蒙古科學技術出版社，1986：27.

[ 4 ] 伊希巴拉吉爾.甘露四部[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社，1998：153.

[ 5 ] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]. 3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1052.

[ 6 ] 張均田，杜冠華.現(xiàn)代藥理實驗方法[M]. 2版.北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社，2014：3271.

[ 7 ] 肖云峰，李文妍，王玉華.肉豆蔻八味膠囊對實驗動物心臟的保護作用[J].中成藥，2016，38（4）：898-902.

[ 8 ] 韓蕾，馬穎芳，袁子民.肉豆蔻揮發(fā)油的藥理毒理研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2007，7（5）：900-902.

[ 9 ] 朱小玲，董玉，孫國園. HPLC法同時測定蒙藥復方肉豆蔻五味中2種木脂素類成分的含量[J].中國藥房，2015，26（18）：2538-2541.

[10] 《中華本草》編委會.中華本草：蒙藥卷[M].上海：上海科技出版社，2004：351.

[11] 李文妍，王玉華，劉小雷，等.動物心臟在蒙藥八味沉香散中對組方藥效學作用的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（4）：1331-1336.

[12] 李紅念，梅全喜，林煥澤.沉香的化學成分、藥理作用和臨床應用研究進展[J].中國藥房，2011，22（35）：3349-3351.

[13] GUO XY，LIU CP，WANG L. Rolling deformation characteristics of Chinese eaglewood leaf during drying and rehydration[J]. Applied Thermal Engineering，2017，37（2）：340-346.

[14] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：4、62、190、325.

[15] 王圓，高兵，陳華，等.救必應酸的單體制備及RP-HPLC法測定救必應藥材及精制品中3種活性成分的含量[J].中國藥房，2018，29（3）：326-329.

[16] 馬立滿，劉震，尚明英，等. HPLC法測定旋覆花藥材中旋覆花素和去乙酰旋覆花素的含量[J].中國藥房，2016，27（3）：369-371.

[17] 王曉琴，王力偉，趙巖，等.廣棗的化學成分和藥理活性研究進展[J].食品科學，2014，6（13）：281-285.

（收稿日期：2018-04-17 修回日期：2018-09-11）

（編輯：林 靜）