莪紅片對急性血瘀證模型大鼠血液流變學及血栓形成相關指標的影響

郝少君 謝國旗 李重先 李軍 劉曉斌 李文俊 張正臣

中圖分類號 R364.1+5；R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）18-2488-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.18.10

摘 要 目的：觀察莪紅片對急性血瘀證模型大鼠血液流變學及血栓形成相關指標的影響。方法：將72只雄性SD大鼠隨機分為空白組、模型組、腦心通膠囊組（0.8 g/kg）和莪紅片低、中、高劑量組（0.375、0.75、1.5 g/kg），每組12只。各給藥組大鼠均灌胃相應藥物，空白組和模型組大鼠灌胃等容生理鹽水，每天1次，連續7 d。除空白組外，其余各組大鼠均于末次給藥1 h后皮下注射鹽酸腎上腺素（0.06 mg/kg），2 h后用冷水刺激3 min，并于2 h后再次皮下注射同等劑量的鹽酸腎上腺素以復制急性血瘀證模型。禁食、不禁水20 h后，觀察各組大鼠行為，并檢測其全血黏度（高、中、低切）和血清血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1a（6-k-PGF1a）含量。結果：空白組大鼠飲食正常，精神和活動狀態良好；模型組大鼠出現食欲不振、精神萎靡、活動減少等癥狀，其全血黏度（高、中、低切）和血清TXB2含量均較空白組顯著升高，6-k-PGF1a含量較空白組顯著降低，差異均有統計學意義（P<0.01）；各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度改善，且腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）和血清TXB2含量均較模型組顯著降低，6-k-PGF1a含量均較模型組顯著升高，差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）。結論：莪紅片可一定程度地降低全血黏度、改善血瘀癥狀，這種作用可能與其下調血清TXB2、上調6-k-PGF1a含量有關。

關鍵詞 莪紅片；大鼠；急性血瘀證模型；全血黏度；血栓素B2；6-酮-前列腺素F1a

ABSTRACT OBJECTIVE： To observe the effects of Ehong tablets on hemorheology and related indexes of thrombosis in acute blood stasis model rats. METHODS： Totally 72 male SD rats were randomly divided into blank group， model group， Naoxintong capsules group （0.8 g/kg） and Ehong tablets low-dose， medium-dose and high-dose groups （0.375， 0.75， 1.5 g/kg）， with 12 rats in each group. Administration groups were given relevant medicine intragastrically； blank group and model group were given constant volume of normal saline intragastrically， once a day， for consecutive 7 d. Except for blank group， other groups were given adrenaline hydrochloride （0.06 mg/kg） subcutaneously 1 h after last medication， 2 h later were irritated with cold water for 3 min， and then given same dose of adrenaline hydrochloride subcutaneously again 2 h later to induce acute blood stasis model. Twenty hours after fasting without water fasting， the behaviors of rats were observed， whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 and 6-k-PGF1a were detected. RESULTS： The rats in the normal group had normal diet， good mental and active state. The model group suffered from loss of appetite， depression and activity decreasing， etc.； whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 were increased significantly， while serum content of 6-k-PGF1a was decreased significantly， compared with blank group， with statistical significance （P<0.01）. Compared with model group， above symptoms of rats were improved to different extents in administration groups. The whole blood viscosity （high， medium and low shear） and serum contents of TXB2 were decreased significantly in Naoxintong capsules group， Ehong tablets medium-dose and high-dose groups， while serum contents of 6-k-PGF1a was increased significantly， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Ehong tablets can reduce blood viscosity and improve blood stasis symptoms to certain extent， the effects of which may be associated with down-regulating serum content of TXB2 and up-regulating serum content of 6-k-PGF1a.

KEYWORDS Ehong tablets； Rats； Acute blood stasis model； Blood viscosity； TXB2； 6-k-PGF1a

血瘀證是中醫臨床常見的一種證型，是由機體內氣機逆亂、氣血運行不暢所致的瘀積凝滯，或者血液離開經脈且無法及時消散以致在體內停留所致的多種病癥的總稱，主要表現為疼痛、腫塊、出血、舌紫、脈澀等[1-3]。目前，相關研究通常根據血瘀證的病因病機（如寒邪、外傷、郁怒、氣虛等）復制動物模型，急性血瘀證模型便是其中的一種[4-5]。該模型采用的造模方法為皮下注射鹽酸腎上腺素，并同時復合4 ℃冷水浴，可很好地印證中醫關于血瘀證“寒則凝，凝則成瘀”的認識[6]。急性血瘀證模型可使實驗動物外周血管強烈收縮、心肌耗氧量增加、心功能減退，從而引起血流運行障礙；此外，該模型還能引起其血液流變學的改變，使血液呈“黏、濃、凝、聚”狀態，最終堵塞血管引發心血管疾病[7]。

莪紅片是根據臨床經驗自擬的院內制劑，由莪術、紅花組成，具活血化瘀之功效，可用于治療缺血性心腦血管疾病，且療效較好[8-10]。本課題組前期采用高效液相色譜法對莪紅片中所含的主要有效成分進行了分析[11]。在此基礎上，本研究進一步探討了莪紅片對急性血瘀證模型大鼠血液流變學及血栓形成相關指標的影響，以期為闡明其臨床治療血瘀證的作用機制提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

N6C型全自動血液流變儀（北京普利生儀器有限公司）；680型酶標儀（美國Bio-Rad公司）；H2050R型臺式高速大容量冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）；JA1103N型電子分析天平（河南中良科學儀器有限公司）；JX5001型電子分析天平（上海浦春計量儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

莪紅片[解放軍第371醫院制劑室，批準文號：濟聯字（2001）FP10013（21）號，批號：20151022，規格：0.3 g]；腦心通膠囊（陜西步長制藥有限公司，批準文號：國藥準字Z20025001，批號：170566，規格：每粒裝0.4 g）；鹽酸腎上腺素注射液[遠大醫藥（中國）有限公司，批準文號：國藥準字H42021700，規格：1 mL ∶ 1 mg]；血栓素B2（TXB2）試劑盒、6-酮-前列腺素F1a（6-k-PGF1a）試劑盒均由蘇州卡爾文生物科技有限公司提供；其余試劑均為分析純。

1.3 動物

SPF級雄性SD大鼠72只，體質量180～200 g，由山東省實驗動物中心提供[動物使用許可證號：SYXK（豫）2015-0005]。

2 方法

2.1 分組、給藥與造模[12-15]

取SPF級雄性SD大鼠72只，隨機分為6組，即空白組、模型組、腦心通膠囊組（陽性對照，0.8 g/kg，根據成人臨床劑量的10倍換算而得；給藥體積為1 mL/100 g，溶劑為生理鹽水）和莪紅片低、中、高劑量組（0.375、0.75、1.5 g/kg，根據成人臨床劑量的5、10、20倍換算而得；給藥體積為1 mL/100 g，溶劑為生理鹽水），每組12只。各給藥組大鼠灌胃相應藥物，空白組和模型組大鼠灌胃等容生理鹽水，每天1次，連續7 d。除空白組外，其余各組大鼠均于末次給藥1 h后皮下注射鹽酸腎上腺素（0.06 mg/kg），2 h后將其放入4 ℃冷水浴中刺激3 min，撈出，擦干，2 h后再次皮下注射同等劑量的鹽酸腎上腺素以復制急性血瘀證模型。

2.2 指標檢測

造模后，所有大鼠均禁食、不禁水20 h，觀察其行為。以10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）進行麻醉后，于大鼠腹主動脈取血兩管。一管采用全自動血液流變儀檢測血液流變學指標[全血黏度（高、中、低切）]；另一管經3 000 r/min離心10 min后，取上層血清，采用酶聯免疫吸附測定法以酶標儀檢測血栓形成相關指標（TXB2、6-k-PGF1a）的含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。

2.3 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以x±s表示；采用單因素方差分析檢查其方差齊性，方差齊者組間比較采用最小顯著差數（LSD）法，方差不齊者則采用Games-Howell檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 莪紅片對急性血瘀證模型大鼠行為的影響

空白組大鼠飲食正常，精神與活動狀態良好；模型組大鼠食欲不振，精神萎靡，活動減少，皮毛無光澤，對外界刺激反應遲鈍，且體質量降低；各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度的改善，其中以莪紅片高劑量組大鼠的狀態較好。

3.2 莪紅片對急性血瘀證模型大鼠全血黏度的影響

與空白組比較，模型組大鼠全血黏度（高、中、低切）均顯著升高（P<0.01），提示模型復制成功。與模型組比較，腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）均顯著降低，差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）；而莪紅片低劑量組大鼠全血黏度（高、中、低切）與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），詳見表1。

3.3 莪紅片對急性血瘀證模型大鼠血清TXB2和6-k- PGF1a含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清TXB2含量顯著升高，6-k-PGF1a含量顯著降低（P<0.01），提示模型復制成功。與模型組比較，腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠血清TXB2含量均顯著降低，6-k-PGF1a含量均顯著升高，差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）；而莪紅片低劑量組大鼠血清TXB2、6-k-PGF1a含量與模型組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），詳見表2。

4 討論

腦心通膠囊由丹參、當歸、川芎、紅花、水蛭等多種中藥組成，具有益氣活血、化瘀通絡之功效，可用于治療氣虛血滯、脈絡瘀阻所致的中風、腦梗死等癥[16]。臨床研究表明，該藥可顯著降低血瘀證患者的全血黏度（高、中、低切）、血漿黏度和血小板黏附率，可抑制腺苷二磷酸（ADP）誘導的血小板聚集，顯著抑制血栓的形成；同時，其還可顯著增加腦血流量，降低腦血管阻力，延長凝血時間，增加心肌供血，有效改善患者的心功能[17]。因此，本研究選擇腦心通膠囊作為陽性對照藥物。

有研究認為，血瘀證主要表現為血液流變學異常及體內微循環障礙，是一種因血液流動性和黏性異常而引發的血流紊亂癥[18-19]。相關研究表明，血瘀證伴有全血黏度升高及血小板聚集性增強等現象[20]。全血黏度不僅能反映血液的黏滯程度，還能反映血液流變學的基本特征[19]。因此，全血黏度是診斷血瘀證的重要指標之一。正常情況下，人體體內凝血系統、抗凝血系統以及纖溶系統處于動態平衡狀態，相互制約；發生血瘀后，血液運行受阻，血流不暢，血液凝滯，內外源凝血途徑均被激活，血小板黏附聚集，血栓形成[21]。TXB2由血小板產生并釋放，能夠收縮血管、促進血小板聚集；6-k-PGF1a是TXB2的抑制物，能夠舒張血管、抑制血小板聚集，兩者對血栓的形成具有重要的作用[21]。

莪術是較為常用的破血行氣中藥，對血瘀證具有很好的治療效果；紅花為活血之王，性辛、溫，歸心、肝經，具有活血祛瘀的功效[22]。《本草匯言》中記載，“紅花，破血、行血、和血、調血之藥也”。現代研究發現，紅花黃色素能夠降低血漿黏度，抑制血小板聚集，阻礙血栓形成。本課題組根據臨床經驗以莪術、紅花配伍（莪術為主，紅花為佐）制成莪紅片，并在有效成分分析的基礎上，初步探討了其對急性血瘀證模型大鼠血液流變學及血栓形成相關指標的影響，結果顯示，模型組大鼠出現食欲不振、精神萎靡、活動減少等癥狀；與空白組比較，模型組大鼠全血黏度和血清TXB2含量均顯著升高，6-k-PGF1a含量顯著降低，提示造模成功；與模型組比較，各給藥組大鼠上述癥狀均有不同程度的改善，且腦心通膠囊組和莪紅片中、高劑量組大鼠全血黏度和血清TXB2含量均顯著下降，6-k-PGF1a含量均顯著升高。這提示，莪紅片可以降低急性血瘀證模型大鼠的全血黏度和血清TXB2含量，升高血清6-k-PGF1a含量，從而有效改善了大鼠血瘀癥狀。

綜上所述，莪紅片可一定程度地降低全血黏度、改善血瘀癥狀，這種作用可能與其下調血清TXB2、上調6-k-PGF1a含量有關。但本研究未對血小板聚集的相關指標進行檢測，且尚未評估莪紅片對血瘀證模型大鼠血小板功能的影響，故仍有待后續研究深入探討。

參考文獻

[ 1 ] 唐宗海. 血證論[M].2版. 北京：人民衛生出版社，2016：23、97.

[ 2 ] 陳可冀，史載祥. 實用血瘀證學[M].2版. 北京：人民衛生出版社，2011：29-30.

[ 3 ] 何浩強，高嘉良，陳光，等. 治療氣虛血瘀證中成藥的組方規律分析[J]. 中國藥房，2017，28（35）：4910-4914.

[ 4 ] 何嬋，羅華麗，季暉. 基于TNF-α的腦缺血再灌注損傷機制及相關藥物研究進展[J].中國藥房，2016，27（28）：4016-4020.

[ 5 ] 張允嶺，張錦，扈新剛，等. 制作缺血性中風氣虛血瘀證大鼠模型的實驗研究[J]. 中國中西醫結合雜志，2009，29（4）：343-346.

[ 6 ] 賈梅， 鄭傳柱， 張麗，等. 四物湯對急性血瘀模型大鼠活血祛瘀有效部位篩選[J]. 中國實驗方劑學雜志，2015，21（16）：119-123.

[ 7 ] 方洋，楊明，賴瓊. 梔子提取物對急性血瘀模型的影響[J]. 江西中醫藥，2016，47（2）：45-46.

[ 8 ] 張三林，岳榮喜，衛世強，等. 莪紅片治療不同證型不穩定型心絞痛100例臨床研究[J]. 中國中醫急癥，2009，18（12）：1935-1937.

[ 9 ] 張三林，岳榮喜，衛世強，等. 莪紅片對不同證型不穩定型心絞痛患者血清白細胞介素-6、18和C反應蛋白的影響[J]. 中國中醫藥信息雜志，2010，17（2）：15-17.

[10] 朱改針，張三林，衛世強，等. 莪紅片對不同證型不穩定型心絞痛患者血清IL-8影響的研究[J]. 醫學信息，2011，24（2）：769.

[11] 郝少君，李軍，李獻玉. 高效液相色譜法測定莪紅片制劑中羥基紅花黃色素A的含量[J]. 解放軍藥學學報，2010，26（6）：531-532、535.

[12] 郭子華. 補陽還五湯治療缺血性腦中風的效果及對血液流變學指標的影響[J]. 中醫藥臨床，2017，29（12）：2090-2092.

[13] 謝國旗，李文俊，郝少君，等. 清腦片對急性血瘀模型大鼠血液黏度及血液流變學的實驗研究[J]. 中華中醫藥學刊，2017，35（4）：971-974.

[14] 章麗，趙冰潔，袁嘉瑞，等. 牡丹皮、赤芍與白芍對急性血瘀模型大鼠活血功效的比較研究[J]. 中草藥，2016，47（15）：2676-2683.

[15] 李莎，王芳，馬蘭，等. 丹紅注射液對冠心病心絞痛患者血液流變學影響的系統評價[J]. 中國藥房，2015，26（30）：4236-4239.

[16] 黃斌，李耿，郭宇飛，等. 腦心通膠囊中4個成分腸吸收研究[J]. 中國中藥雜志，2013，38（6）：889-893.

[17] 培峰，張三印，焦晨莉. 腦心通膠囊對大鼠急性“血瘀”證的血液流變性的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2003，1（8）：463-465.

[18] 李廣新. 血液流變學指標在首發精神分裂癥診斷中的臨床價值[J]. 中國醫藥指南，2018，16（1）：77-78.

[19] 吳建峰. 中西醫結合治療缺血性腦中風的療效及對血液流變學指標的影響[J]. 現代中西醫結合雜志，2014，23（34）：3833-3834.

[20] 劉軍蓮，宋劍南. 中醫血瘀證本質研究概況[J]. 遼寧中醫雜志，2006，33（9）：1091-1093.

[21] 王海麗，肖林焱，陳毅，等. 茜草炭不同提取物對急性血瘀模型大鼠的影響比較研究[J].中草藥，2016，47（8）：1351-1356.

[22] 蔡淑彬. 紅花黃色素治療出血性中風血瘀證的臨床觀察[D]. 福州：福建中醫藥大學，2017.

（收稿日期：2018-03-02 修回日期：2018-07-11）

（編輯：張元媛）