血液分析儀散點圖法檢測異型淋巴細胞的價值探討

丁 飛，楊 洋，熊 林，唐詩鳳，王曉珊，朱 歡

(遵義市第一人民醫院檢驗科,貴州 遵義 563000)

近年研究表明，異型淋巴細胞(以下簡稱異淋)是由藥物或病毒等刺激導致應激反應而產生幼稚細胞化或原始細胞化等形態變異的一類非典型淋巴細胞。已有研究證實[1]，EBV感染引起的傳染性單核細胞增多癥(IM)患者，其外周血異型淋巴細胞顯著升高，甚至超過20.0%。異型淋巴細胞的大量出現對診斷IM有重要意義[2]，對于篩查病毒感染性疾病類型有輔助意義。 異淋檢測的傳統方法是顯微鏡檢查(鏡檢)，其準確率高，但隨著檢驗標本量的不斷增多，若僅憑鏡檢，準確性雖高，但耗費人力、物力，且檢測時限長。全自動血液分析儀通過復檢規則部分減少了血液標本涂片的鏡檢率，大大減輕了檢驗人員的工作量。但血液分析儀不能對相關異淋細胞形態進行有效識別，極易造成漏診和誤診。本研究對232例作異淋檢測的血常規標本進行儀器法檢測和血液標本涂片復檢的同時，作血液分析儀散點圖分析，現將結果分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：2016年6月～2016年12月我院收治的、已行儀器檢測、血液分析儀散點圖分析和血液標本涂片鏡檢以檢測異淋的發熱患兒共232例，其中男109例,女124例，年齡2～14歲。

1.2材料：①儀器設備：顯微鏡(型號：OLYMPUS CX31，日本奧林巴斯株式會社)；全血細胞分析儀(型號：Sysmex 800i，日本森美康株式會社)。②試劑：瑞氏染液(珠海貝索生物技術有限公司)。

1.3方法：選擇232例要求作異淋檢測的血常規標本，均以血液標本涂片瑞氏-姬姆薩染色后鏡檢為標準。同時，用血液分析儀散點圖法與復檢規則法檢測異淋結果，復檢規則法異淋陽性報警見圖1。

圖1 含異淋的復檢規則報警

1.3.1儀器檢測：取患者EDTA-K2抗凝血，用Sysmex 800i血液分析儀于1 h內檢測，通過觀察是否出現Lymph%-1 /Atypical Variant lymphs(-)報警而提示異淋的有無。

1.3.2血液分析儀散點圖分析：通過觀察在單核細胞散點圖的上方是否出現異常均勻分布的、呈橢圓形或近似長方形的典型散點圖，或在淋巴細胞和單核細胞所在區域融合成灰白色并且向上延升的典型散點圖，從而判斷異淋的有無。

1.3.3血液分析儀涂片鏡檢：取EDTA-K2抗凝血制成涂片進行瑞氏染色，在顯微鏡下用油鏡做WBC分類計數，觀察異淋的有無并計算其陽性率。

1.4統計學方法：采用SPSS13.5統計軟件對數據進行處理，計數資料用百分比(%)表示，采用四格表，行χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

散點圖法和復檢規則法檢測異淋結果比較：散點圖法檢出真陽性83例，假陽性7例，假陰性2例，真陰性140例，該方法靈敏度為97.65%，特異度為95.24%，陽性預測值為92.22%，陰性預測值98.59%; 樣本總符合率96.12%，陽性提示復檢89例，復檢率為38.79%；血液分析儀復檢規則法檢出真陽性84例，假陽性48例，假陰性1例，真陰性99例，該方法靈敏度為98.82%，特異度為67.35%，陽性預測值為 63.63%，陰性預測值99.00%; 樣本總符合率78.88%，陽性提示復檢132例，復檢率為56.90%。經統計學處理，散點圖法與復檢規則法比較，其特異度、陽性預測值、樣本正確率、復檢率結果差異有統計學意義(P<0．05)，其靈敏度 、陰性預測值結果相比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1散點圖法與復檢規則法與直接鏡檢法檢測結果比較(例)

鏡檢結果例數散點圖法 陽性 陰性 復檢規則法 陽性 陰性 真陽性85832841真陰性14771404899合計23290142132100

表2散點圖法與復檢規則法檢測效能比較(%)

方法SNSPPPVNPVRETCR散點圖法97.6595.242.2298.5938.7996.12復檢規則法98.8267.3563.6399.0056.9078.88

注：SN:靈敏度；SP：特異度；PPV:陽性預測值；NPV:陰性預測值；RE：復檢率；TCR:總符合率

3 討論

異型淋巴細胞根據形態不同,分為幼稚型異型淋巴細胞、漿細胞型異型淋巴細胞和單核細胞型異型淋巴細胞[3]，其多見于病毒感染的外周血中，其中以傳染性單核細胞增多癥、流行性出血熱、病毒性肝炎、流行性上呼吸道感染、帶狀皰疹、流行性腮腺炎、風疹等較多見，正常人偶可見到。顯微鏡檢查法作為異淋檢測的傳統方法，要求檢驗人員能夠熟練掌握血片的制作和染色,并能掌握鏡下正常及病理狀態的不同細胞形態,能綜合運用血液分析、顯微鏡檢查、其他實驗室檢查與臨床表現等才能對相關疾病作出明確的判斷。因此，該法準確率雖高，但對檢驗人員的形態學知識和經驗要求較高，且費人力物力，對所有待檢血常規標本均行鏡檢將無法實現。

全自動血液分析儀運用復檢規則部分減少了血液標本涂片的鏡檢率，減輕了人員的工作量,但血液分析儀不能有效識別相關異淋細胞形態。近年來，隨著全自動血液分析儀的不斷升級運用，血涂片復檢率的降低，導致異淋的檢出率明顯下降，特別是臨床醫師未申請檢查異淋的標本，其檢出率更低，造成較多誤診和漏診。Sysmex血液分析儀由日本希森美康公司采用4-DIFF和WBC/BASO兩個通道進行白細胞計數和分類。4-DIFF通道采用流式細胞術、核酸熒光染色技術，使用專一溶血劑溶解紅細胞，用聚次甲基核酸熒光染料與白細胞內的DNA和RNA結合，從而使之著色。當細胞通過激光束被照射時，細胞因其體積大小、染色程度、細胞質成分濃度或細胞核密度等不同，而產生與其特征相應的各種散射光和熒光，以側向散射光(SSC)作為橫坐標來反映細胞內容物的多少；以側向熒光(SFL)作為縱坐標來反映細胞內核酸的含量，并得到白細胞4-DIFF散點圖[4]。

從表1可見，散點圖法與復檢規則法比較，其方法特異度(95.9%)、陽性預測值(92.1%)、樣本正確率(96.6%)、復檢率(38.4%)與復檢規則法的特異度(67.3%)、陽性預測值(63.6%)、樣本正確率(78.9%)、復檢率(56.9%)比較，結果均差異有統計學意義(P<0.05)。提示血液分析儀散點圖法更為準確；其復檢率較復檢規則法低，可明顯縮短檢測時限。兩種方法比較，散點圖法的靈敏度(97.6%)、陰性預測值(98.6%)與復檢規則法的靈敏度(98.9%)、陰性預測值(99.0%)結果相比較，差異無統計學意義(P>0.05)。因此，對于采用儀器法的復檢規則和散點圖法同時判定為陰性的病例，可結合臨床資料初步篩查有無異淋細胞，從而大大減低了異淋檢驗的復檢率，達到了快速篩檢,提高工作效率的目的。

本研究中，對于儀器法復檢規則132例異型淋巴細胞陽性病例，采用散點圖法觀察，僅89例陽性，鏡檢的真陽性為85例,散點圖法的識別率與鏡檢法較為接近。工作中，對于儀器法復檢規則陽性病例，應結合散點圖觀察，后者陽性再進一步結合顯微鏡復檢。儀器法和血細胞形態學檢查聯合應用，不但保證了檢驗結果的準確性，還有效降低了異淋檢驗的漏診和誤診率，為相關疾病的診斷提供準確的依據。