T淋巴細胞亞群檢測在老年腫瘤患者中的臨床意義

徐婷娟，沈國棟，程民，胡世蓮

[中國科學技術大學附屬第一醫院(安徽省立醫院)老年醫學研究所，腫瘤免疫與營養治療安徽省重點實驗室，合肥 230001]

我國是目前世界上唯一一個老年人口超過1億的國家，而且正在以每年3%以上的速度快速增長，我國已經出現第一個老年人口增長高峰。據第6次全國人口普查顯示，我國60歲及以上老年人口已達1.78億，老年人口比重由總人口數的13.3%增加至16%。隨著中國人口老齡化進展以及癌癥發病率的不斷攀升，老年腫瘤患者數量日益增長。老年人免疫功能低下，而惡性腫瘤患者又通常伴有免疫功能障礙，機體的免疫狀態與腫瘤的進展及預后密切相關。因此，檢測老年腫瘤患者外周血中T淋巴細胞，對患者的臨床治療及預后判斷等具有重要的參考價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2014年1月至2017年8月中國科學技術大學附屬第一醫院收治的115例老年惡性腫瘤患者作為研究組，男87例，女28例；年齡(73.4±10.0)歲；其中消化道腫瘤55例，肺癌44例，其他腫瘤16例。入選標準：年齡≥60歲，無其他惡性腫瘤史，不伴有自身免疫性疾病，未服用激素類藥物或接受免疫抑制劑治療。所有病例均經病理確診。

健康對照組：選取在我院進行體檢的48例健康者，男38例，女10例；年齡(76.1±10.1)歲。排除近期有感染情況和其他疾病。

1.2 試劑與儀器 CD系列(CD3/4/8)細胞檢測玻片及自動計數儀由上海匯中細胞生物科技有限公司提供。

1.3 標本采集與檢測 采集入選對象的外周靜脈血2 mL加入乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)的抗凝管中，充分混勻后待測。配置磷酸鹽緩沖液，取20 μL血樣加至380 μL磷酸鹽緩沖液中，充分混勻。吸取5 μL稀釋血，加入玻片方框區域中央。濕盒內加入室溫水，水平放置，孵育40 min。將玻片插入染色架，將染色架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉提拉至玻片呈無色透明。將染色架即刻放入過氧化酶染色液中，靜置1 min。將稍加瀝干的染色架放入新鮮過氧化氫工作液中，靜置4 min。將染色架放入75%乙醇染液缸中，旋轉提拉直至玻片呈無色透明，再置于干燥儀下干燥6 min。將染色架放入復染液，靜置1 min后，轉入純水染液缸，靜置30 s，提拉數次后提出。染色架鎖扣打開，用干燥儀干燥后，用自動計數儀計數。

2 結果

多數指標整體差異有統計學意義(P<0.05)。多重比較并結合主要數據分析：老年腫瘤患者組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+低于健康對照組(P<0.05)，CD8+比老年健康對照組略高，但差異無統計學意義。消化道腫瘤組、肺癌組與其他腫瘤組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+均低于健康對照組(P<0.05)，CD8+比老年健康對照組略高，但差異無統計學意義。各腫瘤組之間比較，CD3+、CD4+、CD8+與CD4+/CD8+均差異無統計學意義，見表1。

3 討論

腫瘤是在各種內外致癌因素共同作用下，機體自身細胞發生惡變轉化而成。腫瘤的發生、發展與人體的免疫功能密切相關，尤其是T細胞介導的細胞免疫，在腫瘤免疫中占重要地位[1]。隨著對腫瘤免疫機制的了解和腫瘤免疫治療的應用，越來越多的細胞免疫檢測指標被用來監測腫瘤的發生、發展和判斷治療效果及預后，目前應用最多的是T淋巴細胞亞群的測定[2-4]。

惡性腫瘤的發生和轉移過程中，患者的免疫功能，尤其是抗腫瘤免疫功能減退具有重要作用。在機體抗腫瘤免疫中細胞免疫又是關鍵，特別是T細胞的數量和功能發生異常時，可使腫瘤細胞逃逸宿主的免疫監控。血液中T淋巴細胞亞群的檢測是觀察機體細胞免疫水平的重要方法，對惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系統疾病的診斷、治療及預后判斷有重要作用。成熟的T淋巴細胞表面均可表達CD3分子，而CD4、CD8不能同時表達于成熟的T淋巴細胞表面，故可將成熟的T淋巴細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞二個亞群。CD4+細胞可識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，協助B細胞分泌抗體和調節其他T細胞的免疫應答，進而發揮抗瘤作用；另外，CD4+細胞還可釋放多種細胞因子參與抗瘤效應。CD8+細胞常表現出細胞毒活性，抑制免疫應答活化階段，其作用的靶細胞是抗原特異性的Th和B細胞[5-7]。

在腫瘤患者的CD3、CD4、CD8表達的多項研究中均可發現淋巴細胞的功能紊亂，實驗顯示，淋巴細胞亞群活性是反映腫瘤患者的機體免疫功能狀態常用指標[8]。有研究顯示，無論是小細胞還是非小細胞肺癌晚期的患者CD3+、CD4+數值明顯低于健康人群[9]。黨連生等[10]對CD3、CD4、CD8在肺癌、消化道腫瘤及乳腺癌患者中的表達進行分析，發現CD4+數值及CD4+/CD8+比值在腫瘤患者中均明顯低于健康對照組。嚴健等測定了100例腫瘤患者及90名健康對照組外周血淋巴細胞亞群，結果顯示腫瘤患者組T淋巴細胞外周血絕對計數CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值與健康組比較明顯下降，提示腫瘤患者存在免疫功能異常，T淋巴細胞亞群絕對技術的變化對腫瘤患者病情監測及預后判斷具有重要意義[11]。

表1 腫瘤患者組與健康對照組外周血T淋巴細胞亞群檢測結果比較

注：與健康對照組比較,aP<0.05

本研究結果顯示：老年腫瘤患者組CD3+、CD4+與CD4+/CD8+明顯低于老年健康對照組，CD8+在兩組之間差異無統計學意義，與文獻[12]的結果一致。提示老年惡性腫瘤患者的細胞免疫功能處于免疫抑制狀態。CD4+細胞介導的抗瘤效應明顯降低，機體對識別和殺傷突變細胞的能力下降，形成了腫瘤的生長轉移。有研究發現非小細胞肺癌患者化療后CD3+、CD4+/CD8+比值、NK細胞數顯著升高，患者的免疫功能也有不同程度地恢復[13]。CD8+屬于抑制性T淋巴細胞，CD8+越高，免疫抑制越強，患者的抵抗力越弱。本研究中老年腫瘤組CD8+較健康對照組相比略高，但差異無統計學意義。本研究中消化道腫瘤組、肺癌組與其他腫瘤組之間比較，CD3+、CD4+、CD8+與CD4+/CD8+均差異無統計學意義。

綜上所述，對老年惡性腫瘤患者的外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+絕對計數與CD4+/CD8+比值進行檢測，觀察各個指標的變化情況可以了解老年腫瘤患者的免疫狀態，對確定其相應的治療方案，觀察療效及評估預后具有重要意義。