不同種大黃中土大黃苷檢查方法的研究

陳峰

【摘 要】 目的：探究不同種大黃中土大黃苷檢測方法。方法：采取HPLC和TLC測定不同種大黃中土大黃苷的含量。色譜柱C18柱（AglientTC-C18 analytical，4.6mm×250mm，5μm），流動相乙腈-水（27∶75），柱溫30.0℃，檢測波長323nm，流速0.80mL/min，用DAD檢測器對對照品和供試品溶液進行光譜掃描。結果：藥用大黃中沒有出現土大黃苷特征性色譜峰，河套大黃和華北大黃均出現土大黃苷特征性色譜峰（土大黃苷僅出現于偽品大黃中）；土大黃苷對照品和供試品中出現了相同的土大黃苷特征性色譜峰，并且兩色譜峰在DAD檢測器下掃描得到的光譜圖一致。結論：采取HPLC法及TLC法鑒別大黃藥材有簡單、快捷、準確等優勢，可作為檢測不同種大黃中土大黃苷的推薦方法。

【關鍵詞】 大黃；土大黃苷；高效液相色譜法；薄層色譜法；檢測方法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）05-0014-03

Abstract：Objective To explore the detection methods of rhubarb glycosides in different rhubarb. Methods HPLC （high performance liquid chromatography） and TLC （thin layer chromatography） determination of the rehmannia glycosides is different rhubarb. The mobile phase consisted of acetonitrile-water （27∶75） with a column temperature of 30.0℃ and a detection wavelength of 323nm at a flow rate of 0.80 mL / min on a C18 column （Aglient TC-C18 analytical， 4.6mm×250mm， 5μm） Product and the test solution for spectral scanning. Results Rhubarb Medicinal Rhubarb did not appear characteristic chromatographic peaks， Rhododendron and Datong Rhubarb are featured Indoloine peak characteristic chromatin （emodin appears only in the pseudo-rhubarb）. Soil emodin glycosides reference substance and the test sample appeared the same euphorbia glycosides characteristic peaks， and the two peaks were scanned under the DAD detector obtained spectrogram consistent. Conclusion The HPLC method and TLC method to identify Rhubarb is simple， fast and accurate and can be used as a method to detect the different Rhubarb.

Keywords：Rhubarb； Rehmannia Glycosides； High Performance Liquid Chromatography； Thin Layer Chromatography； Detection Method

大黃為蓼科大黃屬生植物藥用大黃、掌葉大黃及唐古特大黃的合稱，作為中藥材具有較好的瀉下、涼血解毒功效。近年來，大黃的藥材資源無法滿足日益增長的市場需求，使得市場商品中出現使用同屬不同種其他植物的根部冒充大黃的現象，這類偽品大黃來源廣、價格低廉，但藥物副作用大，甚至會引發不良反應。一般情況下，偽品大黃中均含土大黃苷，其結構為二苯乙烯苷類成分，但無瀉下作用或瀉下作用極其微弱。1990年版中國藥典將土大黃苷收錄在大黃檢查項，檢測方法為紙層析色譜法，但其不足在于未進行薄層色譜斑點的分離；2000年版藥典將三黃片收錄在土大黃苷檢查項，但缺少土大黃苷對照品進行薄層隨行對照；實驗中發現，現有檢測方法弊端較大、專屬性不夠強，使得結果判定極為不準確；建立高質量的不同種大黃中土大黃苷含量的檢測方法，為相關成藥提供質量監控依據十分重要。隨著藥物的監管力度也逐漸加大，陸續頒發了多種土大黃苷檢查項的中成藥檢驗方法。目前常用的方法為薄層色譜法，并且必要時還可采用高效液相色譜法及液質聯合法進行進一步驗證[1-2]。本實驗研究不同種大黃中土大黃苷含量的檢測，以期提供專屬性更強、簡單易行、準確的薄層色譜方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Aglient1100液相色譜儀（美國安捷倫有限公司），SartoriusBS21S電子式天平（德國賽多利斯公司），UV-2550高靈敏分光光度計（日本Shimadzu公司）、DAD檢測器（美國安捷倫有限公司）。

1.2 材料 正品大黃藥材（產自四川，購自北京白塔寺藥店）、河套大黃、華北大黃均由中國藥品生物制品檢定所標本館鑒定，土大黃苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱C18柱（AglientTC-C18，4.6mm×250mm，5μm），流動相乙腈-水（25∶75），柱溫30.0℃，檢測波長323nm，流速0.80mL/min。紫外檢測在190～400nm波長處檢測。

2.2 試液制備 在100mL瓶內加4.30mg土大黃苷對照品，加適量甲醇溶液溶解、稀釋，搖勻，以此作為對照品溶液。各取0.5mg華北大黃粉及河套大黃粉于不同量瓶中，搖勻，以此為供試液。將5.0g藥用大黃置于超聲處理后濾過，取5mL續濾液與瓶內，加適量甲醇溶液溶解、稀釋，搖勻，以此為藥用大黃供試液。

取兩份藥用大黃細粉各0.5g，第1份加10mL甲醇溶液，靜置常溫后離心，取上層清液，得大黃供試液；第2份藥用大黃細粉中加入土大黃苷對照品溶液，同第1份操作，得藥用大黃+土大黃苷對照品的供試液。取上述兩溶液各10.0μL，用液相色譜儀進行檢測，記錄相關色譜圖。

2.3 特征性色譜圖 土大黃苷色譜、藥用大黃色譜及藥用大黃+土大黃苷色譜分別如圖1所示。對比圖1和圖2，發現土大黃苷色譜中出現特征性色譜峰，并且在同一時間段藥用大黃色譜中沒有檢出相對應的色譜峰，說明藥用大黃中不含土大黃苷。

2.4 液相色譜測定 藥用大黃中未出現土大黃苷特征性色譜峰，而在河套大黃和華北大黃的檢測中發現了土大黃苷色譜峰，這顯示出河套大黃和華北大黃并非正品大黃。如圖2所示。用DAD檢測器對相應色譜進行光譜掃描，得到色譜峰相同的掃描圖。如圖3所示。

3 討論

大黃在我國古代文獻中就有記載，主要做藥用，在秋季最后或次年春季初挖出，去細根，脫皮，繩穿干燥，其清熱、解毒、涼血、化痰等功效顯著。我國上等大黃常產于四川西部和甘肅地區。通常情況下，正品大黃不含土大黃苷。近年來，隨著中醫藥事業蓬勃發展，藥類品種也逐漸增多，而且由于許多人為因素，野生大黃越來越少，無法滿足逐漸增長的市場需求，導致河套大黃或華北大黃等偽品大黃的出現，土大黃苷是偽品大黃中的特征性成分，瀉下作用極其微弱。本次試驗主要對同屬不同種大黃中土大黃苷的檢測方法進行研究，以確保藥品的療效，保證用藥安全。

高效液相色譜法（HPLC）作為色譜法的重要分支，在近幾年得到迅速發展，由于其有高靈敏度、高效率、簡單、快捷、準確等優勢，被廣泛應用于醫學臨床研究中。高效液相色譜法以高壓輸液為系統，將液體作為流動相，將不同的比例的緩沖液等流動相裝入特定的色譜柱柱內分離各成分后進入檢測器，從而實現式樣分析。本次研究中就采取HPLC法，得到土大黃苷色譜圖（圖1）、藥用大黃色譜圖（圖2）及藥用大黃+土大黃苷色譜圖（圖3）。由圖1可見在10.0～11.0min間出現了很明顯的色譜峰；圖2正品大黃色譜圖，發現在2.5min左右開始至5min左右結束出現了兩組明顯的色譜峰，而5min以后色譜波動較為平緩，并且在10.0～11.0min時沒有發現圖1中明顯的色譜峰；且圖3的色譜變化包含圖1和圖2中所有明顯的色譜峰，說明藥用大黃中不含土大黃苷成分。為了得到更為精確的實驗結果，通過DAD檢測器對二色譜峰進行光譜掃描，結果得到一致的光譜掃描圖，這顯示出二色譜峰的保留時間一致。通過觀察對比三張色譜圖，可以直觀地發現藥用大黃中不含有土大黃苷，也證明這種方法在檢測同屬不同種大黃及含大黃制劑中土大黃苷方便、準確、直觀的優勢[6-9]。

綜上所述，本次研究采取HPLC法和TLC法鑒別同屬不同種大黃及含大黃制劑中土大黃苷的含量，得到較為客觀的實驗結果；該方法有操作簡單、高準確度、高靈敏度等優勢，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2018-01-06 編輯：程鵬飛）