無錫地區(qū)CIN患者HPV基因型分布特點初步分析

盛小花

(無錫市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，江蘇 無錫 214100)

0 引言

人乳頭狀瘤病毒（HPV）是一種已被證明在子宮頸形成增生性病變的病毒，類似于皮膚鱗狀上皮內(nèi)濕疣或粘膜組織的乳頭狀瘤，是宮頸癌最重要的致病因素[1]。大約180種的人乳頭狀瘤病毒基因型已被確定，其中超過40種屬于感染粘膜或皮膚的α屬的基因型，該屬中有15種屬于高危型基因 型， 包 括 HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59 和 82，68，73[2]。HPV 基 因分型聯(lián)合宮頸細胞學(xué)檢查，能更及時地發(fā)現(xiàn)高危宮頸病變，無創(chuàng)性且漏診率低[3].

本部分臨床研究通過分析無錫婦女CIN患者HPV基因型分布特點，探討HPV分型與CIN的相關(guān)性，有助于子宮頸癌前病變的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療，降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率。

1 一般資料及方法

1.1 研究對象

2014年1月至2018年6月在江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院門診宮頸癌篩查婦女269例，年齡21～65歲(32.5±11.8歲)，其中20-30歲30例、31-40歲112例、41-50歲96例、大于50歲31例。進行婦科檢查、宮頸細胞學(xué)、HPV基因分型檢查，宮頸細胞學(xué)結(jié)果可疑或異常者再進一步行宮頸組織病理學(xué)診斷,均取得患者知情同意。

1.2 CIN分級方法

細胞改變程度和異型細胞范圍可將CIN分為三級。

1.3 HPV基因分型

HPV基 因 型 高 危 型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，53，56，58，59，66，68，73，82，83； HPV基因型低危型：HPV6，11，42，43，81。

1.4 儀器和試劑

ThinPrep新柏氏全自動超薄液基細胞檢測系統(tǒng)（美國Hologic豪洛捷公司），SLAN基因擴增儀,分子雜交爐(YN-H16)，深圳亞能生物科技有限公司人乳頭瘤病毒基因分型（23型）檢測試劑盒(PCR-反向點雜交法)。

1.5 實驗方法

1.5.1 TCT標(biāo)本采集

采集宮頸脫落細胞立即放入迪艾細胞保存液，充分漂洗。采用2001年國際癌癥協(xié)會婦科細胞病理學(xué)所用的The Bethesda System(TBS)診斷方法進行檢測。

1.5.2 HPV標(biāo)本采集方法

取宮頸脫落細胞將宮頸刷浸入細胞保存液中，采集的標(biāo)本4℃冰箱保存，1周內(nèi)檢測。

1.5.3 HPV基因分型檢測方法

采用PCR-反向點雜交法。

1.5.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 11.5軟件，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異采用單因素方差分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗(P＜0.05)顯示具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡組CIN患者HPV基因分型分布情況

共有269例接受宮頸細胞學(xué)聯(lián)合HPV基因型檢查的婦女，按每10歲1個年齡段分組，由于50歲以上人數(shù)偏少，故將此年齡段合并為大于50歲組。結(jié)果顯示：31-40歲組HR-HPV構(gòu)成比高于其他各年齡組，但各年齡組HR-HPV構(gòu)成百分?jǐn)?shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義( P＞0.05) 見表1。

表1 不同年齡組CIN患者HPV基因型分布構(gòu)成比

但是CIN患者HPV16患病構(gòu)成比有顯著性，發(fā)現(xiàn)大于50歲患者，HPV16構(gòu)成比為8.3%（表2），其分別與31-40歲組及41-50歲組比較，構(gòu)成比顯著下降，差異具有顯著性(P＜0.05)，30-50歲是HPV16感染的高峰期。

表2 不同年齡組CIN患者HPV16基因型分布構(gòu)成比

2.2 按CIN不同分級分析HPV基因分型分布

在本次調(diào)查中宮頸正常組HR-HPV構(gòu)成比為16.7%，而有宮頸病變(CINⅠ及以上病變)組HR-HPV構(gòu)成比為77.0%，其中CINⅠ、CINⅡ與CINⅢ組宮頸HR-HPV感染率分別為80.8%、73.2%和77.1%，宮頸正常組與CIN各組HR-HPV感染率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.005)。HR-HPV感染與CIN患者顯著相關(guān)，優(yōu)勢比為16.69，HR-HPV感染是CIN患者一個重要的危險因素。

在本次調(diào)查中，在CINⅡ與CINⅢ組宮頸HPV16型感染率分別為51.7%和42.9%，CINⅠ病變與CINⅡ與CINⅢ組的各組間HPV16基因型感染率比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。HPV16基因型感染與CINⅡ及以上病變顯著相關(guān)。

4 討論

子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ）是子宮頸鱗狀細胞癌和腺癌的直接癌前病變[4]。Wright等報道HPV在診斷CINⅢ+病變的靈敏度為84%[5]。我們通過臨床資料統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)在所收集的宮頸炎患者資料中CINⅡ和Ⅲ患病率從50歲以上年齡段開始增加，表明隨著年齡的增長，CIN病程越長，宮頸癌的發(fā)病率也會增加。CIN的清除取決于婦女的年齡，隨年齡增長CIN清除率降低。婦女的年齡和癌前病變的持續(xù)時間，增加癌變的風(fēng)險[6-7]。江蘇無錫地區(qū)HPV感染在CIN患者中比正常宮頸組織高，以高危基因型感染者為主，在所有CIN HPV感染患者中HPV16,HPV52，HPV18，HPV33均有檢出率,說明HR-HPV感染是CIN患者一個重要的危險因素。夏巧凡等采用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)(凱普公司)對皖南地區(qū)婦女HPV感染狀況研究中發(fā)現(xiàn)，常見HR-HPV基因型構(gòu)成由高到低分別HPV16,HPV52,HPV18，HPV33，此結(jié)果與我們研究結(jié)果相一致[8]，與王洪珍等有關(guān)江蘇鎮(zhèn)江婦女宮頸病變HR-HPV感染常見基因型相同[9]。蔡靜芬等有關(guān)無錫HPV流行情況的調(diào)查認(rèn)為HPV52，HPV16,HPV58,HPV68，HPV18基因型常見[10]，相關(guān)研究認(rèn)為，在亞洲國家宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變婦女HPV感染率達93.8%-97%，其中以HPV16,HPV18,HPV52等高危型為主[11]。而在我們本次研究中也證實，HPV16基因型感染與CINⅡ及以上病變顯著相關(guān)，HPV-16感染和CIN病變進展率與婦女的年齡和感染的持續(xù)時間相關(guān)。