結核感染T細胞斑點試驗及結核抗體檢測對肺外結核病的診斷價值*

謝剛強，唐 甦，李 潔,甘昭平

1.陜西省安康市中醫醫院呼吸科(安康 725000),2.陜西省結核病防治院(西安710000)

主題詞 結核, 肺/診斷 @結核感染T細胞斑點試驗 @結核抗體

結核病主要是結核分歧桿菌引發的一類慢性傳染病，其可累及患者全身的各個系統和器官，對患者的健康產生嚴重危害。近幾年來發現，我國肺外結核患者的比例有增加趨勢，這就對早期診斷肺外結核提出了更高的要求[1]。當前結核病的診斷依舊主要依靠細菌學檢測結果判定，但此種診斷方式的涂片敏感性較差，且平均檢出率甚至只有30%左右，較難區分是否是死菌、活菌還是非結核分歧桿菌。有報道指出[2]，結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)及結核抗體實驗也可對肺外結核進行診斷，但兩者之間何種方式更具應用價值，臨床報道較少。鑒于此，本文通過比較分析T-SPOT.TB實驗以及結核抗體實驗這兩種診斷方式針對肺外結核的臨床診斷價值，旨在為臨床診斷治療提供數據支持。

資料和方法

1 一般資料 選擇從2014年3月到2016年3月在醫院就診的疑似肺外結核病患者50例納入本次研究。男28例，女22例；年齡21～62歲，平均(33.67±1.83)歲。所有患者均在入院之后接受痰抗酸桿菌的涂片檢查1～3次和PPD實驗，以及胸部X線和CT檢查，并給予血結核抗體的膠體金法以及實驗室檢查，確診非結核患者7例，年齡21～60歲，平均(32.96±1.99)歲。肺外結核患者43例，年齡22～62歲，平均(33.02±2.01)歲。其中結核型腦膜炎10例，結核型腹膜炎23例，結核型胸膜炎10例。本次研究已獲得患者的簽字知情同意，并報送醫院的倫理委員會審批通過。

2 研究方法 分別對所有患者進行結核抗體實驗以及T-SPOT.TB實驗檢查。①結核抗體實驗：測定血清標本內38kD-IgG。利用產自上海奧普生物醫藥公司的結核分歧桿菌的抗體膠體金法試劑盒進行操作。通過斑點免疫膠體金有關滲濾法對結核分歧桿菌的特異型膜蛋白抗原實施分離純化，操作時需點樣固定于硝酸纖維膜中，此膜上的抗原可捕獲抗體，而被捕獲的IgG抗體能夠通過葡萄球菌A蛋白的膠體金綴合物產生標記呈色反應，按照是否出現紅色斑點即可判斷出結核分歧桿菌的抗體。②T-SPOT.TB實驗檢查：測定外周血抗凝全血內的由抗原刺激而活化的有關效應T細胞，通過T-SPOT.TB試劑盒實施操作。利用肝素抗凝管為患者采集5ml的外周靜脈血，經密度梯度離心法將外周血中的單個核細胞進行分離，為已經包被抗體的相應微量板中4個孔依次加進進陽性對照的植物血凝素和陰性對照的細胞培養液，以及A抗原早期分泌型靶抗原-6和B抗原的濾液培養蛋白-10。再為每個孔加進單個核細胞，共同放置在培養箱內給予溫孵育約16～20 h。經PBS脫洗，加進由堿性磷酸酶所標記的相關抗干擾素抗體行2 h孵育，經PBS洗脫和顯色，終止。最后人工對斑點數進行計數，陰性對照斑點數是0～5個，而抗原A/B斑點數超過陰性對照的斑點數6個記作陰性。陰性對照斑點數超過6個，而抗原A/B斑點數超過2倍的陰性對照斑點數記作陽性。

3 觀察指標 分析T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗的檢測結果，對比T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗對于肺外結核病的檢測價值。

4 統計學方法 通過SPSS20.0統計軟件分析，數據的比較采用確切概率法進行評價，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 T-SPOT.TB實驗的檢測結果分析 T-SPOT.TB實驗的檢測結果顯示，陽性患者42例，占84.00%；陰性8例，占16.00%，見表1。

表1 T-SPOT.TB實驗的檢測結果分析(例)

2 結核抗體實驗的檢測結果分析 結核抗體實驗的檢測結果顯示，陽性患者40例，占80.00%，陰性患者10例，占20.00%，見表2。

表2 結核抗體實驗的檢測結果分析(例)

3 T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗對于肺外結核病的檢測價值對比 T-SPOT.TB實驗對于肺外結合病的診斷靈敏度為88.37%，特異度為42.86%，準確度為82.00%，均分別明顯高于結核抗體實驗的81.40%、28.57%、78.00%，見表3。

表3 T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗對于 肺外結核病的檢測價值對比[%(例/n)]

討 論

結核病作為可長期危害人類身體健康的一類慢性型傳染病，患者在遭受結核分歧桿菌的感染之后會影響其機體的細胞免疫及體液免疫功能。當前針對結核病的臨床診斷主要依靠患者的胸部X線以及痰細菌學檢測，然而盡管細菌學檢測可作為結核病的一個金標準，但操作較為繁瑣，常需多次反復地送檢，較難在早期時即得到確診[3]。加之肺外結核通常起病隱匿，且臨床癥狀并不典型，較易引起疾病誤診，尋找更具診斷價值的臨床診斷方式對于早期確診肺外結核病患者而言意義重大。

本文通過分析T-SPOT.TB實驗以及結核抗體實驗這兩種診斷方式針對肺外結核的臨床診斷價值，結果發現，T-SPOT.TB實驗對于肺外結合病的診斷靈敏度為88.37%，特異度為42.86%，準確度為82.00%，均分別明顯高于結核抗體實驗的81.40%、28.57%、78.00%，這提示T-SPOT.TB實驗較結核抗體實驗對于肺外結核的診斷價值相對更高。分析原因，筆者認為這可能是因為T-SPOT.TB與結核抗體依次反映了患者機體對于結核產生的體液免疫及細胞免疫情況。結核患者的不同病情或相同患者的疾病階段存在差異時，其自身含有的體液免疫以及細胞免疫平衡被打破，如處于活動性結核的時期常會致使免疫功能降低，抗體滴度上升，而在恢復期和穩定期時患者的細胞免疫功能上升，抗體滴度降低[4-5]。而T-SPOT.TB實驗能在結核感染早期亦或是既往存在感染的患者體內檢出效應T細胞，不僅敏感度較高，同時還還具有檢測時間短的優點，通常在24 h即可得到檢測結果。T-SPOT.TB實驗主要是通過ELISA技術包含的基本原理自單細胞水平測定細胞因子的細胞免疫學手段，其通常利用ESAT-6及CFP-10兩種優化結核分歧桿菌具有的特異抗原混合多肽對機體中T淋巴細胞產生刺激后形成的IFN-γ以診斷結核感染的存在情況[6-8]。結核抗體則常于結核病中晚期時產生，在發病早期進行檢測可能會存在結果的假陰性癥狀。其檢測原理是通過純化的結核分歧桿菌的胞壁蛋白38kD抗原測定血清內對應的IgG抗體[9-13]。其中38kD蛋白抗原屬于脂蛋白的一種，可定位于質膜中，能夠刺激B細胞形成相應的抗體。

需要說明的是，肺外結核患者機體中T細胞淋巴因子常具有復雜的分型，且細胞環境還可能對細胞因子反應產生影響，部分經T-SPOT.TB實驗檢查結果發現的改變也可能是因為患者的體內環境發生變化而導致。國外有報道指出[14-15]，伴隨抗結核治療過程的進行，利用T-SPOT.TB實驗檢測的陽性率呈現出迅速下降的趨勢，甚至可能直接轉為陰性。因此，臨床診斷時可嘗試將T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗聯合進行診斷，這將更有利于提升診斷的正確率。

綜上所述，T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗相比，在診斷肺外結核患者的價值上具有更好的作用，但為進一步提升診斷準確率，應考慮將T-SPOT.TB實驗與結核抗體實驗聯合進行診斷，值得臨床重視。