同一廠家兩種胱抑素C檢測試劑盒的性能驗(yàn)證及其檢測結(jié)果的一致性

熊武芳 楊娜 肖光軍 劉艷婷 曹丹 李祥坤

摘 要：目的 對同一廠家生產(chǎn)的膠體金增強(qiáng)免疫法（標(biāo)為A）和膠乳免疫比濁法（標(biāo)為B）胱抑素C測定試劑盒在日立7600全自動分析儀上的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，并通過方法比對評估兩試劑盒檢測結(jié)果的一致性。方法 參照我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T420-2013對兩試劑盒的精密度、正確度及線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證，其結(jié)果與廠家聲稱的性能指標(biāo)進(jìn)行比較；并參照EP9-A2文件對兩試劑盒進(jìn)行方法比對，評估其檢測結(jié)果的一致性。結(jié)果 兩試劑盒的批內(nèi)不精密度均≤3.15%，總不精密度均≤4.81%；5份室間質(zhì)評樣本的檢測結(jié)果與靶值的偏倚≤10.07%；線性范圍內(nèi)其斜率（b）均在0.97～1.03范圍內(nèi)，截距（a）接近于0，相關(guān)系數(shù)R2均>0.995，回收率均在理論值±10%的范圍內(nèi)；兩試劑盒的以上性能指標(biāo)均滿足YY/T1230-2014行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及試劑廠家聲明的性能和質(zhì)量指標(biāo)的要求。兩試劑盒方法比對結(jié)果顯示，回歸方程為Y=1.03X+0.0181，相關(guān)系數(shù)R2為0.9956，不同醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚均小于我國室間質(zhì)評要求的1/5。結(jié)論 某公司生產(chǎn)的兩種Cys-C檢測試劑盒的分析性能均滿意，且兩方法間檢測結(jié)果一致，均能滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求。

關(guān)鍵詞：胱抑素C；性能驗(yàn)證；一致性

中圖分類號：R446.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.15.018

文章編號：1006-1959（2018）15-0055-04

Performance Verification of Two Cystatin C Test Kits and Consistency of Test Results from the Same Manufacturer

XIONG Wu-fang，YANG Na，XIAO Guang-jun，LIU Yan-ting，CAO Dan，LI Xiang-kun

（Department of Clinical Laboratory，Suining Central Hospital，Suining 629000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To verify the analytical performance of colloidal gold enhanced immunoassay（marked as A）and latex immunoturbidimetric assay（marked as B）cystatin C kit produced by the same manufacturer on Hitachi 7600 automatic analyzer. The consistency of the test results of the two kits was evaluated by comparing the methods.Methods The precision，accuracy and linear range of the two kits were verified by referring to the health industry standard WS/T420-2013 of China， and the results were compared with the performance indexes claimed by the manufacturers，and the two kits were compared with the EP9-A2 documents. Evaluate the consistency of the test results.Results The intraspecific inaccuracies of the two kits were≤3.15%，the total inaccuracies were≤4.81%.The bias between the measured results and the target values of 5 samples was≤10.07%.In the linear range，the slope（b） is in the range of 0.97～1.03， the intercept（a）is close to 0，the correlation coefficient R2 is>0.995，and the recoveries are within the range of theoretical value ±10%.The above performance indexes of both kits meet the requirements of YY/T1230-2014 industry standards and the performance and quality indicators declared by reagent manufacturers.Two kits method comparison result showed that the regression equation was Y=1.03X+0.0181 and the correlation coefficient R2 was 0.9956.The expected bias of different medical decision levels was less than 1/5 of the requirement of our country.Conclusion The analytical performance of the two Cys-C test kits produced by a certain company is satisfactory，and the results of the two methods are consistent，which can meet the requirements of clinical laboratory.

Key words：Cystatin C；Performance verification；Consistency

從2017年開始，衛(wèi)生部臨檢中心常規(guī)生化項(xiàng)目室間質(zhì)量評價(jià)（EQA）活動均按照相同試劑生產(chǎn)廠家進(jìn)行分組，以ISO13528方法計(jì)算各組的穩(wěn)健均值作為靶值，并以靶值±總允許誤差（TEa）為評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算EQA成績。若同一生產(chǎn)廠家有幾種不同檢測方法的試劑盒檢測同一項(xiàng)目時，這些方法將歸為同一組內(nèi)，其檢測結(jié)果不一致則可能會影響靶值的大小，從而影響此組實(shí)驗(yàn)室的EQA成績。故本文參照衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T420-2013[1]，對同一廠家生產(chǎn)的兩種胱抑素C（Cys-C）檢測試劑盒在日立7600全自動生化分析儀上的精密度、正確度及線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證和評價(jià)，并通過美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）頒布的EP9-A2文件[2]對其進(jìn)行方法比對和一致性評估，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑 日立7600全自動生化分析儀；試驗(yàn)用水由成都水之純有限公司反滲透純水機(jī)生產(chǎn)，有機(jī)物、無機(jī)物及微生物定期監(jiān)測均合格；膠體金增強(qiáng)免疫法（標(biāo)為A）和膠乳免疫比濁法（標(biāo)為B）Cys-C測定試劑盒及其配套校準(zhǔn)品均由四川邁克生產(chǎn)，批號分別為1017081、0917041；高、低值Cys-C質(zhì)控品由四川邁克生產(chǎn)，批號分別為1017021、0317011。兩種Cys-C試劑均安裝于同一檢測模塊中，其檢測參數(shù)均嚴(yán)格按照試劑說明書的要求設(shè)置。

1.2標(biāo)本來源 精密度驗(yàn)證、線性范圍驗(yàn)證及方法比對所使用的新鮮血液樣本均來自于2018年4月2日～4月13日本院門診患者，樣本使用無添加劑的紅色真空采血管采集，放置30 min后采用4000 r/min的參數(shù)離心5 min以分離血清待用，外觀正常，無溶血、黃疸及脂濁等。樣本Cys-C的濃度均在兩種試劑盒的線性范圍內(nèi)[1，3]。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T420-2013[1]的方法，分別對兩試劑盒進(jìn)行精密度驗(yàn)證。選擇參考區(qū)間下限±10%、上限±10%和病理高值三個濃度的混合新鮮血清作為驗(yàn)證樣本。樣本制備后分裝保存于-70 ℃冰箱中，使用時從冰箱中各取出1支樣本恢復(fù)至室溫并充分混勻，每天分析1個批次，每一批次對3個濃度的新鮮血清分別重復(fù)測量3次，連續(xù)測量5 d，分別獲得15個檢測數(shù)據(jù)[4，5]，并通過以下公式計(jì)算兩種方法的批內(nèi)不精密度和總不精密度。評價(jià)試驗(yàn)結(jié)果：批內(nèi)不精密度和總不精密度滿足生產(chǎn)廠家所聲明的質(zhì)量指標(biāo)，即驗(yàn)證通過。批內(nèi)不精密度以重復(fù)變異系數(shù)（CVr，%）表示，總不精密度則以期間變異系數(shù)（CVI，%）表示

其中：Sr表示重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)差，Sl表示期間標(biāo)準(zhǔn)差， 為所有結(jié)果的均值， D表示總天數(shù)或總批次，n表示每天重復(fù)的總次數(shù)，Xdi表示第d天重復(fù)第i次的結(jié)果， xd表示第d天所有結(jié)果的平均值，Sb2表示批間方差[3，4]。

1.3.2正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 利用衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心2018年Cys-C第1次EQA的5個樣本進(jìn)行正確度驗(yàn)證。使用這兩種試劑分別對5個EQA樣本各檢測1次，并計(jì)算其檢測值與靶值的相對偏倚（bias）。5個EQA樣本的相對偏倚均同時≤1/2 TEa即該試劑盒的正確度驗(yàn)證通過[4]。Cys-C的TEa為靶值±25%。

1.3.3線性范圍驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 收集足量濃度位于測量區(qū)間兩端的高（H）、低（L）濃度的Cys-C血清樣本，然后按H、8H+1L、7H+2L、6H+3L、5H+4L、4H+5L、3H+6L、2H+7L、H+8L、L的比例混合成9個樣本。項(xiàng)目校準(zhǔn)及室內(nèi)質(zhì)控在控后對每份樣本重復(fù)測量3次，以3次檢測結(jié)果的均值為Y軸、預(yù)期值為X軸進(jìn)行線性回歸分析[1，4，5]，得到直線回歸方程Y=bX+a。若相關(guān)系數(shù)R2≥0.995，b在0.97～1.03范圍內(nèi)，a接近于0，則呈直線，符合廠家要求，線性驗(yàn)證通過[4，5]。

1.3.4兩試劑盒Cys-C檢測結(jié)果的比較及偏倚圖 參照EP9-A2文件[2]要求使用患者新鮮血清樣本進(jìn)行方法比對及偏評倚估。每天使用試劑盒配套校準(zhǔn)品對兩種方法校準(zhǔn)和室內(nèi)質(zhì)控在控后按1～8、8～1的順序檢測8份樣本，連續(xù)5 d，共檢測40份樣本，所有樣本均在采樣后2 h內(nèi)完成測試。經(jīng)方法內(nèi)及方法間的離群值檢驗(yàn)后，以A試劑兩次檢測結(jié)果的均值為X軸，B試劑兩次檢測結(jié)果的均值為Y軸進(jìn)行線性回歸分析，并以每個樣本兩種方法檢測結(jié)果的均值為X軸、每個樣本兩種方法檢測結(jié)果的均值的差異為Y軸繪制偏倚圖。

1.3.5兩試劑盒Cys-C檢測結(jié)果的一致性評估 根據(jù)回歸方程計(jì)算兩種Cys-C檢測試劑盒在0.96 mg/L、2.50 mg/L、6.00 mg/L三個醫(yī)學(xué)決定水平（Xc）處的預(yù)期偏倚[SE%，SE%=（Yc-Xc）×100/Xc={（b-1）×Xc+a}×100/Xc]，若SE%均≤1/2TEa，則表示兩方法間的檢測結(jié)果具有一致性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)線性回歸分析及偏倚圖均使用Excel 2007處理。

2結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表1可見，兩種試劑盒在參考區(qū)間上下限和病理高值3個濃度水平處的CVr和CVI均小于試劑盒生產(chǎn)廠家所聲稱的性能指標(biāo)，說明廠家所聲稱的精密度可靠，兩試劑盒精密度驗(yàn)證通過。

2.2正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表2可見，兩種試劑盒分別檢測5個EQA樣本時，其與靶值的偏倚均<1/2TEa，正確度驗(yàn)證通過。

2.3線性范圍驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由表3可見，兩種試劑盒線性范圍驗(yàn)證其b值均在0.97～1.03范圍內(nèi)，a接近于 0，R2均>0.995，回收率均在理論值±10%的范圍內(nèi)，測定線性范圍與廠家線性范圍基本一致，線性驗(yàn)證通過。

2.4兩試劑盒Cys-C檢測結(jié)果的比較及偏倚圖 經(jīng)方法內(nèi)及方法間的離群值檢驗(yàn)，均為發(fā)現(xiàn)離群值。對兩試劑盒的檢測結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，其回歸方程為Y=1.03X+0.0181，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.9956，說明X取值范圍合適，可使用回歸方程估計(jì)斜率、截距及SE。見圖1和圖2。

2.5兩試劑盒Cys-C檢測結(jié)果的一致性評估 兩試劑盒在0.96 mg/L、2.50 mg/L、6.00 mg/L這3個Xc處的SE%分別為4.89、3.72、3.30，其值均<1/5TEa，表明兩試劑盒間檢測結(jié)果的SE%臨床可接受，具有一致性。

3討論

Cys-C是半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族的成員之一，人體內(nèi)所有的有核細(xì)胞中均能產(chǎn)生，且產(chǎn)生率恒定，不受年齡、性別、飲食、肌肉量及運(yùn)動量的影響，僅在甲狀腺功能異常或大劑量糖皮質(zhì)激素治療時影響其生成[6-8]。由于Cys-C相對分子量小，僅13.3 KD，腎臟是Cys-C唯一的清除器官，可經(jīng)腎小球自由濾過，幾乎全部在近曲小管重吸收和降解，因此，Cys-C被認(rèn)為是目前反映腎小球?yàn)V過功能的最佳、最有效的標(biāo)志物[6-8]。

本文參考行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T420-2013[1]進(jìn)行性能驗(yàn)證，結(jié)果顯示，A試劑在參考區(qū)間下限、上限及病理高值處的CVr分別為2.59%、2.40%、1.21%，CVI分別為3.15%、2.50%、1.91%；而B試劑的CVr則分別為2.50%、2.02%、1.42%，CVI為4.81%、3.65%、3.13%；兩試劑盒的CVr和CVI均小于試劑廠家聲稱的質(zhì)量指標(biāo)，同時廠家給出的CVr和CVI質(zhì)量指標(biāo)也滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T1230-2014[3]的質(zhì)量要求，說明這兩種試劑盒檢測Cys-C的重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定。正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示，A試劑檢測5個EQA樣品的bias在1.31%～4.88%范圍內(nèi)，而B試劑的bias在4.18%～10.07%范圍內(nèi)，兩種試劑盒的bias均<1/2TEa，正確度驗(yàn)證通過。線性范圍驗(yàn)證結(jié)果顯示，兩試劑盒的線性范圍與廠家給定的線性范圍相近，且R2、b值、a值及回收率均符合相關(guān)文件的要求[1，4，5]，線性驗(yàn)證通過。

同時，本文參照EP9-A2文件，以A為參比方法，B為待評方法，使用新鮮血清進(jìn)行方法比對。研究結(jié)果顯示，其線性回歸方程為Y=1.03X+0.0181，相關(guān)系數(shù)R2為0.9956，說明B試劑的檢測結(jié)果高于A試劑的檢測結(jié)果，因目前使用A試劑的實(shí)驗(yàn)室數(shù)遠(yuǎn)大于新上市的B試劑，EQA時兩者屬于同一試劑組，其靶值受A試劑檢測結(jié)果的影響較大，將人為導(dǎo)致B試劑的bias偏大，因此，試劑廠家需加強(qiáng)溯源性及一致性工作，EQA組織方也需使用更加合理的分組方法來評估實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的bias。但從圖1可知，偏倚點(diǎn)隨兩試劑盒檢測結(jié)果的均值呈隨機(jī)分布，但有傾斜的趨勢，其斜率為0.0318，截距為0.0116。在0.96 mg/L、2.50 mg/L、6.00 mg/L這3個Xc處的SE%分別為4.89、3.72、3.30，均<1/2TEa，說明兩試劑盒的檢測結(jié)果具有一致性，能被臨床所接受，檢測結(jié)果可靠。

綜上所述，四川邁克生產(chǎn)的A和B這兩種Cys-C檢測試劑盒的精密度、正確度和線性范圍均能滿足廠家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的性能要求，且兩試劑盒的檢測結(jié)果具有良好的一致性，能滿足臨床的診療需求。

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收稿日期：2018-5-17；修回日期：2018-5-27

編輯/楊倩