豫南楊樹黑斑病病原菌鑒定、影響發(fā)病因子調(diào)查及田間防治試驗(yàn)方案

李娟

摘要：介紹了駐馬店市楊樹黑斑病的危害現(xiàn)狀，提出病原菌鑒定、影響發(fā)病因子調(diào)查及田間防治試驗(yàn)以期控制該病的發(fā)生，為楊樹黑斑病的防治提供參考。

關(guān)鍵詞：楊樹黑斑病；發(fā)病規(guī)律；分離鑒定；田間防治

一、駐馬店概況

駐馬店市位于河南省中南部，北亞熱帶向暖溫帶過渡區(qū)，屬亞熱帶季風(fēng)性氣候類型，四季分明，夏熱冬冷，雨熱同季，光、熱、降水資源豐富，年均氣溫15℃左右，年均降水800-1000mm，年均日照數(shù)2000-2200h，無霜期217-230d，氣候溫和，雨量充沛，光照充足，植物種類繁多，生物資源豐富。

近年來，駐馬店市楊樹純林面積迅速擴(kuò)大，隨著中齡林的不斷增加，楊樹有害生物加大危害，尤其是楊樹黑斑病肆意蔓延，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。楊樹黑斑病又稱楊樹褐斑病，是楊樹上危害最嚴(yán)重的病害之一，危害多種楊樹，苗木、幼樹、大樹都可受感染。該病可危害葉片、葉柄、幼莖，以危害葉片為主，自下而上蔓延，使病葉提早1-2個月脫落，僅留梢部少許葉片，嚴(yán)重影響樹木生長，是影響駐馬店市楊樹生長的最主要病蟲害之一。為此我們針對楊樹黑斑病做出了鑒定和防治方案，以期為楊樹黑斑病的鑒定和防治提供參考。

二、楊樹黑斑病菌的分離和鑒定

（一）樣本的采集和分離

野外采集楊樹黑斑病標(biāo)樣，記錄發(fā)病癥狀、采集時間、地點(diǎn)、樹種、樹齡、胸徑、危害程度，在標(biāo)本上系上標(biāo)簽裝進(jìn)塑料袋，帶回實(shí)驗(yàn)室4℃冰箱保存。室內(nèi)PDA培養(yǎng)皿培養(yǎng)并純化，將純化后菌株轉(zhuǎn)入試管置于4 ℃的冰箱中保存，以便于下一步的研究。

（二）菌株的致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則，以中林46作為接種對象，檢測分離出病原菌的致病性。方法如下：選取直徑約2cm的兩年生枝條，截成30cm段，表面75%酒精消毒處理后晾干，用一端已經(jīng)燒熱的直徑6mm的打孔器刺入葉片，造成一個燙傷傷口，再用打孔器在已培養(yǎng)好的菌落上切取菌餅，每個孔中放一個菌餅，然后用保鮮膜密封，對照用PDA餅處理。將枝條上端用保鮮膜密封后插入盛有水的燒杯，放入培養(yǎng)箱中25℃培養(yǎng)，每天進(jìn)行觀察，記錄是否發(fā)病和發(fā)病特征。

（三）基因組DNA提取和ITS測序

將供試菌株轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，提取基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增后進(jìn)行ITS測序，對測得的楊樹黑斑病菌株ITS序列進(jìn)行拼接整理，并把拼接后序列在GenBank上利用BLAST比對，確定楊樹黑斑病病原菌種類。

三、影響發(fā)病因子調(diào)查

選取不同楊樹品種、造林密度、立地條件和胸徑調(diào)查與楊樹黑斑病的相關(guān)性，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算楊樹黑斑病感病指數(shù)。（見表1）

（一）病害發(fā)生與品種關(guān)系調(diào)查

選取本地栽植量大的107、中林46、I-69、2025四個楊樹品種，每個品種選取2個小班，每個小班設(shè)置2塊標(biāo)準(zhǔn)地，每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為3畝，每塊標(biāo)準(zhǔn)地隨機(jī)選取30棵楊樹，7月中旬和8月中旬分別調(diào)查、統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每塊標(biāo)準(zhǔn)地的楊樹黑斑病感病指數(shù)。

（二）病害發(fā)生與林分密度調(diào)查

選擇立地條件相同的6m×6m、3m× 4m、2m×3m三種不同栽植密度林地，每個密度選取2個小班，每個小班設(shè)置2塊標(biāo)準(zhǔn)地，每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為3畝，每塊標(biāo)準(zhǔn)地隨機(jī)選取30棵楊樹，調(diào)查、統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每塊標(biāo)準(zhǔn)地的楊樹黑斑病感病指數(shù)。

（三）病害發(fā)生與立地條件的調(diào)查

分別選取片林、路林、溝河渠旁、圍村林，每個選取2個小班，每個小班設(shè)置2塊標(biāo)準(zhǔn)地，每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為3畝，每塊標(biāo)準(zhǔn)地隨機(jī)選取30棵楊樹，調(diào)查、統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每塊標(biāo)準(zhǔn)地的楊樹黑斑病感病指數(shù)。

（四）病害發(fā)生與林分胸徑關(guān)系調(diào)查

分別選取胸徑0-10cm、11-20cm、21-30cm、31-40cm、41cm以上林分進(jìn)行調(diào)查，每個小班設(shè)置2塊標(biāo)準(zhǔn)地，每塊標(biāo)準(zhǔn)地面積為3畝，每塊標(biāo)準(zhǔn)地隨機(jī)選取30棵楊樹，調(diào)查、統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每塊標(biāo)準(zhǔn)地的楊樹黑斑病感病指數(shù)。

（五）不同防治藥劑田間防治效果試驗(yàn)

選取易感病的中林46片林進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)6個處理：①清水對照（CK）；②多菌靈；③嘧菌酯；④戊唑醇；⑤氟硅唑；⑥波爾多液；⑦石硫合劑，每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)10棵樹，在發(fā)病初期5月下旬開始噴霧防治，每隔15天噴施1次，連噴5次，每次施藥10天后調(diào)查記錄發(fā)病情況，計(jì)算感病指數(shù)和防治效果，并進(jìn)行方差分析。

四、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過本試驗(yàn)，首先分離鑒定出本地楊樹黑斑病病原菌，其次通過調(diào)查當(dāng)?shù)爻Ｔ詶顦淦贩N對楊樹黑斑病的抗性，篩選出適合本地栽植的楊樹品種，最后通過田間防治試驗(yàn)，優(yōu)選出對楊樹黑斑病防治效果較好的藥劑，為駐馬店市楊樹黑斑病防治提供理論依據(jù)。

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