尿液有形成分分析儀低顆粒濃度結(jié)果比對簡易判斷標準

范基農(nóng)

（上海市臨床檢驗中心，上海 200126）

目前，尿液有形成分分析儀結(jié)果比對主要參考儀器說明書中的判斷標準，然而說明書中的判斷標準一般是用高水平質(zhì)控品建立的[1]。當顆粒濃度較低時，說明書中的判斷標準就不適用了。本研究根據(jù)WS/T 407—2012（簡稱407標準）[2]提供的方法，建立多臺尿液有形成分分析儀不同顆粒濃度（尤其是低顆粒濃度）檢測的結(jié)果比對判斷標準，并嘗試通過一種簡易的統(tǒng)計學工具找到合適的判斷標準。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院、同濟大學附屬同濟醫(yī)院、第二軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院和復(fù)旦大學附屬中山醫(yī)院門診常規(guī)新鮮尿液樣本，所有樣本＞8 mL，均無“刻度異常”報警信息，可用UF-1000i全自動尿液有形成分分析儀（簡稱UF-1000i）重復(fù)檢測10次左右。各參數(shù)[紅細胞（red blood cell，RBC）、白細胞（white blood cell，WBC）、管型（cast，CAST）、上皮細胞（epithelial cell，EC）、細菌（bacterium，BACT）]顆粒濃度分布為＜10、11～20、21～50、51～200、＞200個/μL，每一顆粒濃度至少檢測3例樣本。

1.2 儀器與試劑

采用UF-1000i（日本Sysmex公司）及原裝配套試劑、質(zhì)控品和校準品。同濟大學附屬同濟醫(yī)院、第二軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院和復(fù)旦大學附屬中山醫(yī)院使用試劑、質(zhì)控品、校準品為UFⅡSHEATH （UTS-900A，批號：G2006）、UFⅡSEARCH-SED （USS-800A，批號：A1031）、UFⅡSEARCH-BAC （USB-800A，批號：A1035）、UFⅡPACK-SED （UPS-300A，批號：A1074）、UFⅡPACK-BAC （UPB-300A，批號：A1038）、UFⅡCONTROL（UTC-900A，批號：YS2019）、UF ⅡCALIBRATOR（批號：S2014）。上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院使用的試劑、質(zhì)控品、校準品與上述3家醫(yī)院相同，但批號分別為A7004、A7014、A7013、A7009、A7009、YS7035、S7016。

1.3 精密度評價

選取5個顆粒濃度新鮮尿液樣本（RBC 35例、WBC 33例、CAST 25例、EC 27例、BACT 17例），每例樣本重復(fù)檢測10次，計算均值和變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。

1.4 顆粒濃度與精密度相關(guān)方程和比對判斷標準的建立

1.4.1 曲線方程的建立 按美國臨床實驗室標準化協(xié)會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）C51-A文件[3]要求，檢測不同顆粒濃度樣本各10次，得到不同顆粒濃度樣本的CV，顆粒濃度接近的樣本則計算CV合并（CV合并的計算是由各儀器檢測結(jié)果CV平方和開根所得[2]）。根據(jù)顆粒濃度和其精密度（CV合并），運用EXCEL 2010軟件制作散點圖并進行分析，得到擬合曲線方程。選擇r值最接近1的曲線方程作為最佳擬合曲線方程。根據(jù)407標準，推算尿液有形成分分析儀不同顆粒濃度的比對判斷標準。

1.4.2 比對判斷標準的建立 考慮到本研究擬合曲線方程所使用的原始數(shù)據(jù)源自多個臨床實驗室的多臺儀器，因此本研究得到的CV接近單臺儀器平均CV。2臺儀器平均CV合并≈1.414×單臺儀器平均CV。根據(jù)平均CV合并與2臺儀器結(jié)果比對（每臺儀器檢測2次）的擬合曲線方程，可得到任意顆粒濃度下2臺儀器的比對判斷標準。

1.4.3 多臺儀器間的結(jié)果比對 當多臺儀器進行結(jié)果比對時，通常采用1臺儀器作為靶機，將其他儀器的檢測結(jié)果與其進行比較。雖然是多臺儀器之間進行的比較，但實際上是2臺儀器之間的兩兩比較，故只需考慮2臺儀器之間結(jié)果比對的判斷標準即可。采用EXCEL 2010軟件制作2臺儀器CV合并與2臺儀器（每臺儀器檢測2次）結(jié)果比對判斷標準的擬合曲線方程，根據(jù)擬合曲線方程，得出任意CV合并所對應(yīng)的比對判斷標準。

1.5 407標準和泊松標準比對判斷標準的比較

顆粒濃度符合泊松分布規(guī)律，50個/μL以下不同顆粒濃度所對應(yīng)的95%可信區(qū)間可作為2臺儀器結(jié)果比對的判斷標準，即泊松標準[4-5]。收集尿液顆粒濃度在0～50個/μL的樣本，分別在2臺儀器上進行檢測，采用407標準和泊松標準進行評價，得出符合率。使用靶機檢測結(jié)果作為顆粒濃度，以比對儀器檢測結(jié)果是否落在靶機顆粒濃度預(yù)期范圍內(nèi)作為評價標準。

2 結(jié)果

2.1 顆粒濃度和精密度的相關(guān)性

RBC、WBC、CAST、EC、BACT顆粒濃度和精密度之間的曲線方程分別為Y=48.561X-0.570 0（r=0.980 7）、Y=29.273X-0.452 0（r=0.982 6）、Y=34.787X-0.546 0（r=0.982 5）、Y=31.542X-0.461 0（r=0.984 7）、Y=157.760X-0.598 0（r=0.993 1），見圖1。2臺儀器CV合并與2臺儀器（每臺儀器檢測2次）結(jié)果比對判斷標準的擬合曲線方程為Y=4.299X+0.000 7（r=1.000 0），見圖2。

圖1 不同顆粒濃度和精密度的擬合曲線

圖2 2臺儀器CV合并與2臺儀器（每臺儀器檢測2次）結(jié)果比對判斷標準的擬合曲線

2.2 407標準和泊松標準比對結(jié)果判斷標準的比較

根據(jù)擬合曲線方程，計算各顆粒濃度下顆粒成分的95%可信區(qū)間，同時根據(jù)泊松分布表查得相應(yīng)顆粒濃度下的95%可信區(qū)間，具體結(jié)果見表1。

根據(jù)表1中的比對判斷標準，對低濃度RBC、WBC、CAST、EC、BACT顆粒成分的2臺儀器比對結(jié)果進行驗證。見表2。

表1 407標準與泊松標準比對判斷標準的比較 （個/μL）

表2 2臺儀器檢測結(jié)果與407標準和泊松標準的符合率比較

3 討論

尿液有形成分分析儀檢測結(jié)果的比對判斷標準一直是一個難題。按廠家說明書提供的判斷標準，很難對低顆粒濃度樣本進行評價，然而在實際工作中，低顆粒濃度卻對臨床疾病的判斷有著重要的意義。臨床實驗室常因找不到適合的低顆粒濃度檢測結(jié)果比對判斷標準而感到困惑，如能找到一種方法來建立合理的比對判斷標準，對大多數(shù)臨床實驗室來說有較大的實用價值。

本研究根據(jù)C51-A文件和407標準建立了低顆粒濃度分析的擬合曲線方程和判斷標準。當2臺儀器CV合并增大時，相應(yīng)的比對判斷標準也隨之變大，通過分析CV合并與比對判斷標準之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)二者呈線性關(guān)系（r=1.000 0），因此二者的擬合曲線方程可用于CV合并與比對判斷標準之間的推導(dǎo)。基于此原則，本研究在不同顆粒濃度和精密度之間建立曲線方程，獲得最優(yōu)擬合曲線方程以及任意顆粒濃度對應(yīng)的CV。因該CV是擬合方程所得出的理論CV，故進一步得到2臺儀器平均CV合并，再利用CV合并與結(jié)果比對的方程關(guān)系得到比對判斷標準。本研究建立的擬合曲線方程和比對判斷標準適用于所有顆粒的檢測，包括尿液、腦脊液、漿膜腔積液等體液的自動顆粒計數(shù)儀結(jié)果之間的比對。然而，該方法推導(dǎo)過程復(fù)雜，且需在不同儀器上做不同顆粒濃度樣本的重復(fù)性實驗，成本消耗較大。另外，本研究所用精密度存在一定的抽樣誤差，從推導(dǎo)方程準確性方面來說，該方法推薦使用的CV為日間精密度，而實際工作中，顆粒濃度樣本無法處于穩(wěn)定狀態(tài)數(shù)日得到日間精密度，故本研究只能對低顆粒濃度樣本連續(xù)檢測多次，使用批內(nèi)精密度。這也使得本研究推導(dǎo)的部分檢驗項目比對判斷標準略顯嚴格，這一點在實際數(shù)據(jù)驗證中也得到了體現(xiàn)，如CAST比對結(jié)果符合率略低于可接受符合率下限。

泊松標準的95%可信區(qū)間與按407標準推導(dǎo)的WBC、RBC、CAST和EC比對判斷標準幾乎一致。只有BACT的比對判斷標準偏大，其主要原因可能是尿液中BACT常有黏附、聚集現(xiàn)象，在流式細胞鞘流的沖擊下可能被沖散，聚集成團的BACT不滿足泊松分布的條件所致。雖然泊松分布適用范圍有限，但其簡便、易行，只需通過查表就能得到判斷標準。

綜上所述，凡符合泊松分布的顆粒濃度檢驗參數(shù)，在作結(jié)果比對時，可先查泊松分布判斷標準表，若與比對結(jié)果一致，即完成比對實驗，若與比對結(jié)果不一致，則按407標準推導(dǎo)擬合曲線方程，計算判斷標準并進行比對，以判斷結(jié)果的一致性。