脂聯素聯合瘦素在結直腸癌高危人群中的診斷價值

彭偉如　馮奕習　梁晶晶

【摘要】 目的：探討脂聯素（Adiponectin，ADPN）聯合瘦素（Leptin，LP）在結直腸癌高危人群中的診斷價值。方法：選取2016年6月-2017年4月本院收治的結直腸癌患者50例作為A組，于同期另選取50例健康體檢者作為B組，測定兩組血清ADPN和LP水平，應用受試者工作特征（Receiver Operating Characteristic curve，ROC）曲線分析血清ADPN和LP對結直腸癌的診斷效能。結果：A組血清ADPN水平明顯低于B組，差異有統計學意義（P<0.05）；A組血清LP水平明顯高于B組，差異有統計學意義（P<0.05）；ROC曲線顯示，兩項聯合對結直腸癌的敏感度和特異度最高，約登指數和曲線下面積最大。結論：聯合檢測脂聯素聯合瘦素有助于提高結直腸癌的檢出率。

【關鍵詞】 脂聯素； 瘦素； 結直腸癌； 腫瘤標志物

【Abstract】 Objective：To discuss the diagnosis value of combining Adiponectin（ADPN） and Leptin（LP） in high risk population with colorectal cancer.Method：A total of 50 patients with colorectal cancer from June 2016 to April 2017 were selected as A group，and 50 cases of health examiner were selected as B group.The serum levels of ADPN and LP were detected.ROC curve was used to analyze the evaluate the diagnostic efficiency of ADPN combined with LP measured in the study subjects.Result：Serum levels of ADPN in A group was lower than that of B group（P<0.05）.Serum levels of LP in A group was higher than that of B group（P<0.05）.ROC curve showed：the sensitivity，specificity，Youden index and AUC of ADPN+LP was the highest.Conclusion：The combined screening of ADPN and LP can significantly improve the detection rate of colorectal cancer.

【Key words】 Adiponectin； Leptin； Colorectal cancer； Tumor marker

First-authors address：The Hospital of Traditional Chinese Medicine in Dongguan City，Dongguan 523000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.21.033

一項關于結直腸癌TNM分期的臨床研究顯示，結直腸癌是高度異質性的腫瘤，患者生存及預后與分期與所在臨床分期或病理分期密切相關[1]。早期結直腸癌往往能夠通過外科手術根治，而進展期或遠處轉移的結直腸癌一般預后較差[2-4]。由于結直腸癌起病隱匿、高危人群疾病預防知識不足等原因，有50%～70%的結直腸癌患者新診斷時已是進展期甚至晚期，錯過了最佳治療時間[5-7]。因此，一種適合用于結直腸癌早期篩查的診斷試驗或能降低結直腸癌的進展風險和減輕公共衛生負擔。現階段，內窺鏡檢查、影像學檢查、脫落細胞學檢查及CA199等血清腫瘤標志物檢查均不符合簡便、經濟、靈敏度高及早期診斷等要求[8-9]。為此，本院開展此項研究，旨在探討脂聯素（Adiponectin，ADPN）聯合瘦素（Leptin，LP）在結直腸癌高危人群中的診斷價值，為結直腸癌診斷提供科學依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月-2017年4月本院收治的結直腸癌患者50例作為A組，年齡37～75歲，平均（61.42±9.40）歲；體質指數（BMI）19～29 kg/m2，

平均（25.31±2.49）kg/m2；男27例，女23例。于同期另選取50例健康體檢者作為B組，其中年齡35～73歲，平均（57.28±9.76）歲；BMI 20～28 kg/m2，平均（24.50±1.92）kg/m2；男27例，女23例。

1.2 方法 采用真空釆血管抽取受試者早晨空腹肘靜脈血5 mL，全血靜置120 min后，真空離心濃縮儀（德國sigma公司）分離上清液，血清移至試管中，放置于-80 ℃冰箱冷凍保存。采用固相夾心ELISA法測定受試者血清中脂聯素和瘦素水平，脂聯素和瘦素的試劑盒均購自廣州邊金生物科技有限公司，操作方法嚴格按照試劑盒說明進行，并有相應的質量控制措施，具體如下：（1）試劑盒準備：試劑盒使用前30 min室溫下凍融；濃縮洗滌液用水浴加熱以溶解結晶；濃縮洗滌液沖兌蒸餾水（體積分數1︰1），調配成洗滌緩沖液備用；顯色液A沖兌顯色液B（體積分數1︰1），調配成顯色劑A、B備用。（2）操作程序：在酶標包被板的第1、2號孔中添加100 μL標準品，繼續添加50 μL稀釋液，混勻；在第1、2號孔中各取100 μL樣品稀釋液，添加到第3、4號孔中，繼續添加50 μL稀釋液，混勻；在第3、4號孔中各取100 μL樣品稀釋液，棄掉50 μL后，再添加到第5、6號孔中，繼續往第5、6號孔中添加50 μL稀釋液，混勻；在第5、6號孔中各取50 μL樣品稀釋液，添加到第7、8號孔中，繼續往第7、8號孔中添加50 μL稀釋液，混勻；在第7、8號孔中各取50 μL樣品稀釋液，添加到第9、10號孔中，繼續往第9、10號孔中添加50 μL稀釋液，混勻，之后棄掉50 μL樣品稀釋液；第11、12號孔分別設空白對照孔（不添加樣品和酶標試劑）；第13、14號孔分別待測樣品孔（添加50 μL樣品稀釋液）。封板后置溫育

30 min（37 ℃）。溫育后解除封板，每孔添加滿洗滌緩沖液，在靜置30 s 后棄掉，如此反復5次，拍干。標準孔中添加50 μL酶標試劑。再次溫育、洗滌，步驟同上。在37 ℃、避光環境下，每孔各添加50 μL顯色劑A、B，混勻，靜置15 min。每孔各添加50 μL終止液，混勻，靜置15 min。空白對照孔調零，450 mm波長讀板（OD值）。以標準物的質量濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在笛卡爾坐標系上繪出標準曲線，通過標準曲線計算樣品中脂聯素和瘦素質量濃度，乘以稀釋倍數，即為樣品的實際質量濃度。

1.3 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料若呈正態分布組間用（x±s）表示，比較采用配對資料t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以活體組織檢查結果為“金標準”，應用ROC曲線分析血清ADPN和LP對結直腸癌的診斷效能。檢驗水準α=0.05，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清ADPN和LP水平比較 A組血清ADPN水平明顯低于B組，差異有統計學意義（P<0.05）；A組血清LP水平明顯高于B組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 血清ADPN和LP對結直腸癌的診斷效能 以

7.6 mg/L為截點值，ADPN對結直腸癌的敏感度為82.0%、特異度為72.0%、AUC為76.61%、約登指數為0.54；以3.1 ng/mL為截點值，LP對結直腸癌的敏感度為68.0%、特異度為64.0%、AUC為65.84%、約登指數為0.32；ADPN聯合LP對結直腸癌的敏感度為88.0%、特異度為76.0%、AUC為81.28%、約登指數為0.64。見表2。

3 討論

ADPN是脂肪細胞分泌的一種內源性生物活性多肽或蛋白質，其通過多條路徑抑制結直腸癌細胞生長和增殖、誘導內皮細胞凋亡[10-11]。已有循證醫學證據表明，ADPN是結直腸癌的獨立保護因素[12]。LP是一種由脂肪組織分泌的蛋白質類激素，其通過多條信號通路參與細胞及細胞因子的調節，促進腫瘤細胞增殖、黏著、侵襲及癌組織新生血管形成[13-16]。已有基因組學證據表明，LP的基因多態性顯著影響結直腸癌發病風險[17]。本研究結果顯示，A組血清ADPN水平比B組低，A組血清LP水平比B組高，差異均有統計學意義（P<0.05）。提示，結直腸癌患者血清ADPN低表達，結直腸癌患者血清LP高表達。應用ROC曲線和整合區分指數評價血清標志物對疾病的診斷價值的研究先前已有報道。因此，血清ADPN和LP或可用于結直腸癌的鑒別診斷、早期診斷及預后判斷等方面。文獻[18-19]也得出過類似結果，不過受制于研究方法較為單一，故未能揭示血清ADPN和LP對結直腸癌的診斷價值。基于這一現況，本研究進一步應用ROC曲線分析血清ADPN和LP對結直腸癌的診斷效能。

以病理檢查結果為“金標準”，應用sigmaplot科學繪圖軟件繪制ROC曲線，求得ADPN對結直腸癌的最大約登指數（特異度+敏感度-1）為0.54，以最大約登指數為截點值，求得ADPN對結直腸癌的最佳截點值為7.6 mg/L，在上述截點值下，ADPN對結直腸癌的敏感度為82.0%、特異度為72.0%、AUC為76.61%。依照上述方法，求得LP對結直腸癌的最佳截點值為3.1 ng/mL，在上述截點值下，LP對結直腸癌的敏感度為68.0%、特異度為64.0%、AUC為65.84%、約登指數為0.32。靈敏度越高，代表該診斷試驗漏診概率越小；特異度越高，代表該診斷試驗誤診概率越小；AUC是一項能夠反映診斷試驗總體診斷效能的指標，不像敏感度、特異度有對應的臨床解釋，一般認為AUC越大表示診斷試驗的診斷效能約高；約登指數用于評價診斷試驗的真實性，理想的診斷試驗約登指數應為1[20]。由此可見，血清ADPN和LP均能夠用于診斷結直腸癌，可是特異度、敏感度、真實性、診斷效能均不甚理想。聯合試驗往往能夠提高診斷試驗的診斷效能，為此，筆者使用整合區分指數串聯血清ADPN和LP診斷結直腸癌。本研究結果顯示，兩項聯合對結直腸癌的敏感度為88.0%、特異度為76.0%、AUC為81.28%、約登指數為0.64。由此可見，兩項聯合診斷結直腸癌能夠提高特異度、敏感度、真實性、診斷效能。

綜上所述，聯合檢測脂聯素聯合瘦素有助于提高結直腸癌的檢出率。

參考文獻

[1]易呈浩，葛維挺，黃彥欽，等.1368例結直腸癌TNM分期及預后分析[J].中國腫瘤臨床，2012，39（9）：597-601.

[2]吳坤遠，黃祖東，劉美芳.Ⅱ、Ⅲ期結腸癌根治術后腫瘤復發轉移情況及其危險因素[J].國際老年醫學雜志，2017，38（1）：25-27.

[3]湯民，黃珠蘭，錢春華.局部進展期結腸癌患者經腹腔鏡結腸癌根治術治療的臨床效果觀察[J].中國社區醫師，2017，33（16）：69-70.

[4]楊偉強，鐘鳴.腹腔鏡下結直腸癌根治術危險因素及并發癥分析[J].實用癌癥雜志，2016，31（8）：1271-1273.

[5] Guittet L，Bouvier V，Mariotte N，et al.Comparison of a guaiac based and an immunochemical faecal occult blood test in screening for colorectal cancer in a general average risk population[J].Gut，2007，56（2）：210-214.

[6]吳揭，朱昌齡，高中元，等.4452例目標人群結直腸癌篩查結果分析[J].結直腸肛門外科，2012，18（6）：344-346.

[7] Power E，Miles A，Wagner C V，et al.Power E，Miles A，von Wagner C，Robb K，Wardle JUptake of colorectal cancer screening：system，provider and individual factors and strategies to improve participation[J].Future Oncol，2009，5（9）：1371-1388.

[8]歐陽方丹，郭勁霞，劉蓉.結直腸癌的分子生物學診斷進展研究[J].中國繼續醫學教育，2016，8（16）：25-27.

[9]徐斯佳，張勰義，黃鋼，等.結直腸癌影像學診斷的研究進展[J].上海交通大學學報（醫學版），2016，36（1）：124-127.

[10]張穎，馮全林，劉長明，等.脂聯素及其受體基因多態性與結直腸癌發生的相關性研究[J].江蘇大學學報（醫學版），2012，22（4）：336-341.

[11] Crawshaw B P，Augestad K M，Keller D S，et al.Multivisceral resection for advanced rectal cancer：outcomes and experience at a single institution[J].American Journal of Surgery，2015，209（3）：526-531.

[12] Sugiyama M，Takahashi H K，Endo H，et al.Adiponectin inhibits colorectal cancer cell growth through the AMPK/mTOR pathway[J].International Journal of Oncology，2009，34（2）：339-344.

[13] Li L，Gao Y，Zhang L L，et al.Concomitant activation of the JAK/STAT3 and ERK1/2 signaling is involved in leptin-mediated proliferation of renal cell carcinoma Caki-2 cells[J].Cancer Biology & Therapy，2008，7（11）：1787-1792.

[14]解寒冰，夏云展，薛建鋒，等.脂聯素在結直腸癌患者中的表達及其對結直腸癌細胞增殖和Caspase-3表達的影響[J].中國現代醫學雜志，2016，26（19）：47-51.

[15] Touvier M，Fezeu L，Ahluwalia N，et al.Pre-diagnostic levels of adiponectin and soluble vascular cell adhesion molecule-1 are associated with colorectal cancer risk[J].World Journal of Gastroenterology，2012，18（22）：2805-2812.

[16]陳維煜，叢麗.脂聯素及其受體抗腫瘤的研究進展[J].現代生物醫學進展，2012，12（17）：3374-3376.

[17] Fenton J I，Birmingham J M，Hursting S D，et al.Adiponectin blocks multiple signaling cascades associated with leptin-induced cell proliferation in Apc Min/+ colon epithelial cells[J].International Journal of Cancer，2008，122（11）：2437-2445.

[18]陳春生，叢進春，沈名揚，等.結直腸癌患者血清中瘦素表達的研究[J].中國普外基礎與臨床雜志，2009，16（5）：379-383.

[19]王順民，張曉燕，張惠琴，等.脂聯素在結直腸癌及轉移性結直腸癌中的表達及意義[J].衛生職業教育，2016，34（16）：111-113.

[20]劉潤幸.使用SPSS作多變量觀察值的ROC曲線分析[J].中國公共衛生，2003，19（9）：1151-1152.

（收稿日期：2018-04-24） （本文編輯：程旭然）