尾巨桉DH32—28組培快繁技術研究

楊衛(wèi)星

摘要 以尾巨桉DH32-28半木質化萌發(fā)莖段為組織培養(yǎng)外植體材料，在不同的誘導、增殖和生根培養(yǎng)基條件下誘導不定芽，確定了適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，為加快優(yōu)良無性系分化速度、縮短培養(yǎng)周期、降低生產成本奠定了理論基礎。

關鍵詞 尾巨桉DH32-28；外植體；組織培養(yǎng)

中圖分類號 Q94；S792.39 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）13-0138-02

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28

YANG Wei-xing

（Guangxi Paiyangshan State Forest Farm，Ningming Guangxi 532500）

Abstract The semi-lignified stem sections of Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28 were used as tissue culture explant materials.The adventitious buds were induced by different induction，proliferation and rooting conditions.The suitable medium and culture conditions were determined，which laid a theoretical foundation for speeding up the differentiation speed of fine clones，shortening the period of culture and reducing the cost of production.

Key words Eucalyptus grandis×E.urophylla DH32-28；explant；tissue culture

桉樹為桃金娘科（Myrtlefamily）桉屬（Eucalyptus）常綠高大喬木，原產地為澳大利亞[1]。桉樹耐炎熱干旱，不耐寒，抗病性強，生長速度快，生命力強，用途廣泛，栽培種植經濟效益可觀，在世界上多個國家和地區(qū)均有栽植，是世界上著名的三大速生樹種之一[2]。我國桉樹栽培歷史已逾100年，在林業(yè)經濟樹種中占有重要地位[3]。尾巨桉DH32-28是廣西國有東門林場從純種子代測試和雜交育種試驗中選育的優(yōu)良桉樹品種，具有年生長量高、抗逆性和適用性強且性狀穩(wěn)定的特點。目前，已通過國家林木良種審定，已在營林生產中大規(guī)模推廣應用，并產生了良好的經濟效應、社會效應及生態(tài)效應[3-6]。

近年來，組培擴繁技術應用于林木育種已越來越成熟，通過組培擴繁技術能夠快速獲得高質量、穩(wěn)定遺傳的種苗。據相關資料顯示，目前尚無關于尾巨桉DH32-28的組培技術資料和論文。因此，建立尾巨桉DH32-28組織培養(yǎng)與再生體系，一方面能夠突破商品化規(guī)模育苗瓶頸，另一方面又有利于轉基因體系的建立，為通過轉基因手段進行桉樹性狀改良奠定基礎。

1 材料與方法

外植體選用三年生尾巨桉DH32-28半木質化萌發(fā)莖段。雨后天氣晴朗3 d后，于10：00—15：00采集萌芽條；用飽和洗衣粉溶液刷洗干凈，再進行滅菌處理，切成1～2 cm長莖段，每段帶1個節(jié)；接種到培養(yǎng)基上，置于光強3 000 lx、溫度25 ℃條件下誘導不定芽。培養(yǎng)條件為溫度24～26 ℃、光照12～14 h/d、光強2 500～3 000 lx，試驗設計如表1所示。

2 結果與分析

2.1 外植體取材與滅菌

由表2可知，處理C為最佳方案，污染率較處理A、B、D分別高35.0%、54.5%、11.2%，但處理A、B的灼傷率分別是處理C的6.0、5.3倍，較處理D低27.1%；處理C成活率最高，達到53.7%，分別較處理A、B、D高46.3%、62.2%、17.0%；且滅菌后的外植體生長良好、萌芽較快。這說明酒精+氯化汞的消毒方法能夠有效降低外植體污染率，但會一定程度上傷害苗木，導致外植體褐化、灼傷甚至死亡。試驗還發(fā)現，將10%次氯酸鈉消毒過程分成2次，可在保證滅菌效果的同時，有效緩解黃化、白化、灼傷現象。

2.2 桉樹組織培養(yǎng)體系的建立

由表3可知，誘導培養(yǎng)基的激素濃度以處理C效果最佳，增殖倍數適宜，芽長勢及狀態(tài)良好，萌芽健壯，葉片舒展，速度快，長勢旺；處理A、B、D保存率分別較處理C低6.8%、6.0%、5.0%。試驗中發(fā)現，在激素不適宜時，容易出現褐化和玻璃化現象，生長緩慢，難以馴化。濃度過高時，芽生長速度快，但質量差、變異增多，易形成無效芽；濃度過低時，芽生長速度減緩、數量減少，延緩了育苗生產進度。

由表4可知，增殖培養(yǎng)階段以處理B效果最佳，增殖個數適宜，達到3.7個，芽分化良好。處理A激素濃度過高，增殖個數和莖芽伸長較處理B低37.8%和24.1%，長勢較弱，芽點過密，基部多見愈傷團塊；處理C、D激素濃度偏低，增殖個數和莖芽伸長分別較處理B低16.2%、48.6%和10.3%、31.0%，莖葉細長，長勢逐漸減弱。

由表5可知，生根培養(yǎng)階段以處理B效果最佳，根系發(fā)達，側根較多，根長達7.6 cm，長勢整齊旺盛，移栽成活率達98%。處理A激素濃度過高，苗高較處理B低22.2%，根長較處理B低22.4%，生根率較處理B低8.2%，培養(yǎng)過程中出現褐化、根基部膨大、部分不生根現象，長勢弱且不整齊，移栽成活率低。處理C、D激素濃度偏低，苗高較處理B低17.8%和35.6%，根長較處理B低18.4%和30.3%，生根率較處理B低6.1%和16.3%，根系不發(fā)達，側根少，生長緩慢，長勢弱且不整齊，移栽成活率低。

3 討論與結論

研究發(fā)現，尾巨桉DH32-28最佳外植體誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.4 mg/L，萌芽率為87.5%；最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.7 mg/L+NAA 0.35 mg/L，增殖個數為3.7個；最佳生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA 0.3 mg/L+ABT1 0.6 mg/L，生根率可達98%，根長7.6 cm。

外植體采集后，應立刻用飽和洗衣粉水刷洗干凈，并及時清洗消毒，接種到誘導培養(yǎng)基上，以最大程度地保持枝條活性，提高萌芽率，降低污染率。酒精+氯化汞外植體消毒法污染率低，但對外植體傷害較大，褐化現象嚴重；新潔爾滅+次氯酸鈉消毒法的污染率較高，但對外植體傷害較小，萌芽較快且成活率高[7]。

外植體誘導階段不同的激素濃度及配比對誘導結果影響較大，MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.4 mg/L誘導出芽效果最好。誘導階段激素濃度過高時，易發(fā)生畸形異變，且愈傷組織呈白色松散團狀；濃度過低時，芽分化延遲[8]。增殖培養(yǎng)階段激素濃度過高也會出現畸形、玻璃化等現象。此外，工廠化生產中還應注意調節(jié)好暗培養(yǎng)、弱光培養(yǎng)及自然光培養(yǎng)時間，才能夠獲得長勢旺盛、增殖適宜的無菌芽，建立有效的無菌繁殖體系[7]。桉樹根系發(fā)育階段以自然光照射，有利于生根培養(yǎng)過程的根系發(fā)育、莖葉生長以及植株形成木質化，同時也可提高移栽成活率。此外，工廠化生產中生根研究的關鍵是減輕莖段基部褐化現象[8-10]，適量加入抗壞血酸（0.01～0.02 mg/L）和活性炭（40 mg/L）可以有效抑制褐化。

建立無菌芽誘導和無菌體系是組培快繁的核心技術環(huán)節(jié)。隨著桉樹種植規(guī)模的不斷擴大，對桉樹組織培養(yǎng)技術的要求也不斷提高[11]，如何加快優(yōu)良無性系分化速度、縮短培養(yǎng)周期、降低生產成本，有待進一步的研究。

4 參考文獻

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