竹筒酒中總黃酮、總酸、總糖含量的測定

趙媛 陳洪國 陳濤

摘要：采用可見光光度法測定竹筒酒中總黃酮的含量，對樣品進行波長掃描，確定512nm為最大吸收波長，穩定性試驗表明，反應液在30min內吸光度較穩定。所測竹筒酒中總黃酮的含量為16.63mg/L，總糖含量為11.003g/L，總酸含量為0.303g/L， 檢測結果證實該白酒復合高度酒的一級標準，符合低度酒的優級標準。

關鍵詞：竹筒酒; 總黃酮; 總酸; 總糖

湖北咸寧是聞名的楠竹之鄉，楠竹中含有黃酮類化合物、多糖類，氨基酸類，礦質元素，茶多酚等多種營養成分，其中黃酮類，多糖類和有機酸類是主要的多功能成分[1]。竹筒酒通過特殊的方式將高粱酒漿注入楠竹活竹筍內，自然生長，制作機理圖如圖1所示。

白酒通過吸取天然竹汁、竹葉多糖、竹葉黃酮、竹葉抗氧化物、硒、鋅、鐵、鈣、鎂、多種維生素和氨基酸等活性成份，是一種比普通白酒更香、更純、更環保的原生態健康飲用酒。竹筒酒富含大量的黃酮類化合物，具有很高藥用價值。有抗癌，抗微生物，抗病毒，抑制脂肪酶，保護心腦血管等功效。竹筒酒吸取了竹葉中多糖類物質，有效改善了普通蒸餾白酒的口感和品質，深受消費者歡迎。酒中酸含量決定其風格和品質，因此，測定竹筒酒中總酸含量有助于控制其質量，保障飲用者健康。黃酮含量測定方法主要有可見分光光度法、熒光分光光度法、高效液相色譜法等[23]。本文采用亞硝酸鈉硝酸鋁可見分光光度法檢測竹筒酒中總黃酮含量。采用指示劑法測定竹筒酒中總酸的含量 [45]。

1 實驗部分

1.1 竹筒酒中總黃酮的測定

（1）蘆丁標準液的配制。

精密稱取120℃下干燥至恒重的蘆丁標準品100mg，加入42%的乙醇溶液溶解，并定容至1000ml得0.1mg/ml的蘆丁標準溶液。

（2）標準曲線的繪制。

精確的量取0.1mg/ml的蘆丁標準溶液0ml，0.5ml，1ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3ml置于10ml容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300微升，搖勻，靜置6分鐘后加入10%的硝酸鋁溶液300微升，搖勻，靜置6分鐘后加入4%的氫氧化鈉4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度，靜置30min，于分光光度計上，在510nm波長處測定其吸光度，空白不加人蘆丁對照品。以510nm處吸光度為縱坐標，以配制標準樣品的質量濃度（mg/ml）為橫坐標，繪制相應的標準曲線，如圖1所示：

1.2 竹筒酒中總糖的測定

（1）葡萄糖溶液的標定VNaOH。

斐林試劑參照相關文獻配制[6]，預備滴定：準確吸取斐林溶液甲、乙液各5ml于錐形瓶中，加入20ml蒸餾水，搖勻，電爐加熱至沸，在沸騰的狀態下用葡萄糖標準溶液進行滴定，當溶液的藍色消失呈紅色時，加入2滴次甲基藍指示劑，繼續滴定至藍色消失，記錄消耗葡萄糖標準溶液的體積，滴定五次，取數值接近的三次數據計算。正式滴定：加入比預備實驗少1ml的葡萄糖標液，加熱至沸，并保持2min，加2滴次甲基藍指示劑，在沸騰狀態下于1min內用葡萄糖標準液滴定至終點，記錄消耗葡萄糖標液的總體積（V），平行滴定五次，取接近的三次數據計算，結果取平均值。

濃度計算F=M/1000×V（F—斐林試劑甲、乙液各5ml相當于葡萄糖的克數，g; M—稱取葡萄糖的質量，g;V—正式滴定消耗的葡萄糖標準溶液的總體積，ml）

（2）樣品的制備及測定。

準確吸取100ml的竹筒酒加熱濃縮至30ml左右，將其轉移至100ml容量瓶中，加入6M的鹽酸溶液5ml。用1%的甲基紅的乙醇液為指示劑，滴加200g/L的氫氧化鈉溶液至中性，冷卻至室溫， 定容至100ml。

樣品總糖測定同標定葡萄糖溶液類似，以樣品溶液代替葡萄糖標液進行滴定即可。

1.3 竹筒酒中總酸的測定

（1）樣品的制備及測定。

竹筒酒中總酸的測定采用指示劑法，按照國標法進行測定。準確移取5.00ml酒樣于150ml的錐形瓶中，加入20ml的蒸餾水，用滴管滴加2滴酚酞指示劑，用一定濃度的氫氧化鈉標準溶液滴定至微紅色，記錄標準堿用量，計算酒樣中總酸的含量。

（2）氫氧化鈉濃度的確定。

分別使用1.0，0.1，0.01，0.005及0.001 mol/L的氫氧化鈉對未知酒樣進行滴定，實驗結果表明氫氧化鈉濃度為0.005 mol/L最佳。

2 實驗結果與分析

2.1 竹筒酒中總黃酮的測定

（1）穩定性和精密度測試結果。

測定竹筒酒中總黃酮在30min內的穩定性，每間隔5min取樣一次，測得吸光度分別為0.158，0.162，0.159，0.163，0.162， 0.164計算得RSD%為1.50%。說明使用該方法測定竹筒酒中總黃酮含量時穩定性良好。根據上述方法連6次測定同一樣品的總黃酮含量，測定結果顯示RSD為2.43%，表明該方法測定竹筒酒中總黃酮含量時精密度良好。

（2）竹筒酒中總黃酮含量測定。

準確量取3ml待測酒樣于10ml的容量瓶中，加入5%的NaNO2溶液300μL，搖勻，靜置6分鐘后加入10%的硝酸鋁溶液300μL，搖勻，靜置6分鐘后加入4%的氫氧化鈉4.0ml，再用42%的乙醇溶液定容至刻度。按照測蘆丁的標準吸光度的方法測酒樣的吸光度。最后通過蘆丁標準曲線確定線性回歸方程，計算總黃酮的含量為16.63mg/L。

2.2 竹筒酒中總糖的測定

按照國標法測定總糖含量。按照公式X=F/[100×V2/250]×1000（X：復制白酒中總糖含量

（以葡萄糖計），g/L; F：斐林試劑甲、乙液各5ml相當于葡萄糖的克數，g; V1樣品制備液滴定消耗的總體積。）

其中：F=M/100×V1（F：斐林試劑甲、乙液各5ml相當于葡糖糖的克數，g;m：稱取葡萄糖的質量，g;V：正式滴定消耗葡萄糖標準液的總體積，ml注：正式滴定35次）取接近的三次總體積數據計算，結果取平均值作為斐林試劑甲、乙液的濃度標定值。計算得F=0.5×14.7/100=0.0735g。

未知白酒中總糖的含量可按公式計算得：X=F/[100×V2/250] ×1000;計算得樣品酒中最終含量=11.003g/L。

2.3 竹筒酒中總酸的測定

本實驗測定采用國標指示劑法測定竹筒酒中總酸的含量。竹筒酒中的總酸（有機酸），以酚酞為指示劑，采用氫氧化鈉溶液進行中和滴定，以消耗的氫氧化鈉標準滴定溶液的量計算總酸的含量。

1%酚酞指示劑的配制：準確量取0.1g的酚酞溶于10ml的無水乙醇，使之完全溶解，備用。

樣品檢測：準確移取5.00ml酒樣于150ml的錐形瓶中，加入20ml的蒸餾水，用滴管滴加2滴酚酞指示劑，用0.005mol/L的氫氧化鈉標準溶液滴定至微紅色，記錄標準堿用量，計算酒樣中總酸的含量。

使用0.005mol/L的氫氧化鈉滴定酒樣，平行滴定四次取平均值，利用公式：X=[C×（V0.21）×0.0601]/5×1000計算得總酸含量為0.303g/L。（X：酒中總酸的含量 g/L;C：NaOH濃度，mol/L;V：滴定消耗NaOH溶液的體積，ml;V2：取酒樣體積，mL）

檢測結果證實該白酒復合高度酒的一級標準，符合低度酒的優級標準。

3 結論與展望

隨著社會的發展，人們對生活質量的要求越來越高，中國酒類行業正在從廣度和深度上健康發展，保健酒行業正蘊藏著巨大的發展潛力。健康意識和環保意識的提升也促進了酒類行業向天然型、營養型、功能型、保健型發展。竹筒酒作為近幾年發展起來的新興酒類，逐漸被大家熟悉，竹筒酒中蘊含豐富的黃酮類化合物、多糖類化合物，具有很好的營養價值和保健作用，其中黃酮類物質對清除DPPH自由基具有明顯的效果，并且高濃度的黃酮類化合物具有一定的抗氧化作用。

參考文獻：

[1]賴炘，陳其兵.竹葉提取物的化學成分及其生理功能研究進展[J].福建林業科技，2013，40（1）：214220.

[2]王金寶，王姣亮，李順利，等.楠竹葉中黃酮類化合物的超聲提取及抗氧性研究[J].湖南城市學院學報（自然科學版），2014，23（4）：5357.

[3]吳燦，夏延斌，唐鑫.分光光度法測定蓮子酒中的總黃酮[J].農產品加工·學刊：下，2013（8）：4850.

[4]黃曉東，程巢宣.白酒中總酸、總酯、總醛含量的常規連續測定[J].食品科技，2004（5）：7072.

[5]中華人民共和國國家標準 GBT 103452007 白酒分析方法.

[6]劉建宗，孔繁嶺.關于營養型復制白酒中總糖的測定[J].技術監督縱橫，2000（2）：8.

基金項目：湖北省自然科學基金（2016CFB209） ;湖北省教育廳青年基金（Q20172801）;湖北科技學院校內培育科研項目（201618X046）

作者簡介：趙媛（1988），女，河南信陽人，助教，研究方向：分析檢測。

*通訊作者：陳濤，講師。