天麻鉤藤藥膳對高血壓鼠的療效研究

時小艷

（江蘇食品藥品職業技術學院藥學院，江蘇淮安 223003）

高血壓作為一種嚴重威脅生命的疾病，它的治療當前以西藥為主，多采用利尿劑、β-受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉化酶抑制劑和血管緊張素受體阻滯劑等六大類藥物，雖有較好的降壓作用，但長期應用副作用較大。研究發現，自發性高血壓與血清中NO含量[1]，血漿中血管緊張素II（AngII）、 ET-1含量[2]、 主動脈血管eNOS含量[3]息息相關。尿液中mALB和β2-MG含量能反映自發性腎性高血壓的腎臟損傷[4-5]。傳統中藥材鉤藤和天麻對治療高血壓有著特殊療效[6]，試驗通過人為應用以鉤藤和天麻等中藥材為主的中藥藥膳，對人造大鼠高血壓模型進行人為干預，進一步探討獲取鉤藤和天麻等中藥藥膳對高血壓大鼠模型血壓的影響。對于腎性高血壓大鼠血漿中血管緊張素II（AngII）、內皮素（ET-1）、一氧化氮（NO）、尿液中尿微量白蛋白（M-ALB），尿β2-微球蛋白（β2-MG），以及動脈組織中內皮型一氧化氮合酶（eNOS） 含量差異產生影響[7-8]，討論天麻鉤藤藥膳緩解和抑制高血壓及其并發癥的抑制機制，為能夠找到治療高血壓提供新的途徑和理論依據。

1 材料與方法

正常成年大白雄鼠，每只190～210 g，購于南京市江寧區青龍山動物繁殖場。

注射用青霉素鈉、10%水合氯醛、生理鹽水、1%戊巴比妥納.

UV1900型紫外可見分光光度計，上海奧析科學儀器有限公司產品；大鼠固定器，北京哲成科技有限公司產品；無創型鼠尾血壓測量儀，埃德儀器國際貿易上海有限公司產品；醫用縫合針線，巢湖市賓雄醫療器械有限公司產品。

選75只60日齡，體重190～210 g健康雄鼠，分為空白試驗組、模型組、天麻鉤藤藥膳高劑量組、天麻鉤藤藥膳中劑量組、天麻鉤藤藥膳低劑量組共5組，每組15只。除空白組外，對所有試驗大鼠進行人工造高血壓病鼠模型。依據試驗大鼠體重進行灌胃，空白試驗組和模型組均灌以等量的生理鹽水，其余各試驗組均以對應劑量藥膳灌胃。對給藥前后大鼠血壓進行測量，并進行尿液收集與測定，對行為狀態進行觀測。在8周試驗結束后解剖大鼠，測定血管緊張素II、一氧化氮含量、一氧化氮合酶的含量，尿液中mALB，β2-MG含量分析試驗結果。

1.3.1 造模

將試驗大鼠手術前3 d測量血壓編號并貼上標簽，用1.5%的戊巴比妥納0.1 mL/20 g體重進行大鼠麻醉（一般可維持2 h）。將大鼠固定于鼠臺上，剔除腹毛，用碘伏消毒，消毒過后用酒精擦洗去除碘伏，在大鼠脊柱與腎臟平行方向切開大鼠皮膚2 cm左右。找到大鼠腎動脈，并將大鼠腎動脈分叉處放置預先準備好的小環，此時用小繩子將小環系緊，并用青霉素沖洗大鼠腹部與內腔，防止感染，并逐層對大鼠腹腔進行縫合。做完手術3 d內每天都對大鼠腹部注射青霉素，預防大鼠傷口感染細菌死亡。手術結束28 d，試驗大鼠的血壓比之前升高30 mmHg或達140 mmHg，說明高血壓的大鼠造模成功。模型組手術除不放置小環外，操作流程與之前相同。手術成功后每天正常喂養大鼠，并按計劃測量大鼠血壓并記錄。

1.3.2 藥膳制作

藥膳制作原料，天麻、鉤藤、黃芪、丹參，生藥使用前再次烘干，按5∶3∶3∶4的比例一起粉碎混勻后，在常溫下浸泡1 h，用小火煎煮3次，每次煎煮藥膳時刻為90 min。紗布過濾后得到的濾出液混合并蒸發精制，制備成每1 mL含原料藥2 g的濃縮液，并于-4 ℃醫用冰箱中貯藏。同法操作制備每毫升含生藥1.5，0.5 g的濃縮液。每1 mL含生藥0.5，1.5，2.0 g分別對應天麻鉤藤藥膳低劑量組、天麻鉤藤藥膳中劑量組、天麻鉤藤藥膳高劑量組。

1.3.3 給藥與喂養

取經人工造模成功的大白鼠，從造模起第28天以灌胃的方法對其給藥1次/ d，天麻鉤藤藥膳高、中、低組每日用藥膳灌胃，天麻鉤藤高劑量組給予18 g生藥/（kg·d），中劑量組給予12 g生藥/（kg·d），低劑量組給予6 g生藥/（kg·d），模型組和空白試驗組均以同量蒸餾水給予大鼠灌胃。在進行試驗階段，各組大鼠均以普通全價鼠糧正常喂養，允許自由飲水。

1.3.4 大鼠血壓測量

灌藥后于第2，4，6，8周的周日上午10時測定大鼠清醒狀態下的尾動脈收縮壓平均值和舒張壓平均值，連續測定3次，取平均值，做好相應記錄。

1.3.5 飲水量測定，尿液收集測定與一般狀態觀察

單獨飼養每只試驗鼠，每個鼠籠放置1個帶有刻度的飲水器，下部放1個便于收集尿液的容器，于造模前、試驗第2，4，6，8周的周六測量1 d的飲水量。

采集大鼠給藥前，第4周、第8周時的大鼠尿液，取樣期間允許自由飲水與進食。尿液中mALB、β2-MG含量測定送上海羽朵生物科技有限公司。一般狀態觀察包括毛色、神態及糞便形態與氣味。

1.3.6 NO、eNOS取材及含量測定

用10%水合氯醛，按照0.3 mL/100 g的劑量以10%水合氯醛對大鼠進行腹腔注射，使大鼠處于麻醉狀態，剔除腹毛，剖開大鼠腹部使大鼠主動脈完全暴露。利用一次性的醫用取血針管，取3 mL大鼠的主動脈血。迅速拔下針頭，在較低的溫度下操作，離心機以轉速2 000 r/min離心10min，取上清液，放-80 ℃超低溫保溫冰箱中貯藏，以備測定NO。打開大鼠胸腔，截取10 mm主動脈血管，以生理鹽水充分洗凈，置于-80 ℃超低溫冰箱中貯藏，以備測定eNOS。

采用硝酸還原酶的檢測方法。按照產品使用說明配制一定濃度，并按要求制備好顯色劑與100 μmol/L標準溶液；按操作規程向空白管、標準管、測定管中滴加試驗藥品，并進行相關操作；迅速振蕩60 s使其混勻，靜置15 min，離心機以轉速3 500 r/min離心15 min，取上清液0.5 mL；加指示劑0.6 mL，迅速混勻，室溫放置15 min；紫外分光光度計調零校正，通光口徑0.5 cm，于波長550 nm處測定各管OD值。eNOS含量測定，送轉北京方程生物實驗室化驗檢定。

NO的含量計算：

1.3.7 AngII與ET-1取樣

取樣前24 h對試驗鼠不予進食，但不禁水。按0.3 mL/100 g的劑量以10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，剔除腹毛，利用一次性采血針，取3 mL主動脈血。將1.5 mL主動脈血注入0.3 mol/L EDTA鈉鹽200 μL， 0.34 mol/L 8 - 羥基喹啉， 0.32 mol/L二巰基丙醇的血漿抗凝管中，充分振蕩搖勻，以轉速1 500 r/min離心3 min，取上清液，放-20 ℃低溫冰箱貯存以備測定AngII。剩余血液分別注入含10%EDTA鈉鹽20 μL和抑肽酶30 μL，振蕩搖勻，以轉速5 000 r/min離心6 min，取血漿放入-20 ℃低溫冰箱貯藏，以備測定ET-1。

2 結果與分析

造模前后血壓變化見表1，造模前后血壓變化見圖1。

由表1可知，各手術組大鼠模型在第1周內血壓開始升高，第2周高血壓已經形成且血壓趨于穩定，與空白試驗組有明顯差異。且處于高位水平大于140 mmHg說明造模成功（其中藥膳高劑量組傷口感染死亡1只）。

表1 造模前后血壓變化/ mmHg

圖1 造模前后血壓變化

藥膳對試驗鼠血壓的影響見表2，試驗治療前后血壓變化見圖2。

由圖2可知，試驗前2周試驗鼠的血壓明顯下降，且有趨于正常的趨勢，藥膳高劑量組的大鼠血壓恢復較快（其中模型對照組灌胃死亡1只） 說明天麻鉤藤藥膳對于高血壓鼠具有治療作用。

表2 藥膳對試驗鼠血壓的影響/ mmHg

圖2 試驗治療前后血壓變化

各分組大鼠24 h飲水量前后變化比較見表3，各分組大鼠24 h飲水量前后變化比較見圖3。

大鼠在造模6 周后，飲水量都較之前明顯增加，天麻鉤藤高劑量和天麻鉤藤低劑量治療后飲水明顯減少有恢復正常的趨勢。高血壓大鼠具有飲水量增加，經過天麻鉤藤藥膳治療大鼠飲水量減少。

經過8周的試驗治療，解剖大鼠獲取血清。

各試驗組大鼠血清中NO溶解量數據對照見表4，各試驗組大鼠血清中NO溶解量數據對照見圖4。

空白組與藥膳高劑量組含量相近，模型組處于低水平狀態，說明高血壓病會降低大鼠血清中NO溶解量。

表3 各分組大鼠24 h飲水量前后變化比較 / mL

圖3 各分組大鼠24 h飲水量前后變化比較

表4 各試驗組大鼠血清中NO溶解量數據對照

圖4 各試驗組大鼠血清中NO溶解量數據對照

經過8周的試驗治療，解剖大鼠獲取主動脈血，測eNOS含量。

表5 大鼠主動脈eNOS含量比較（±s）

表5 大鼠主動脈eNOS含量比較（±s）

組別 n eNOS / U·mL-1空白試驗組模型對照組藥膳高劑量組藥膳中劑量組藥膳低劑量組15 14 14 14 15 62.31 35.49 46.42 50.33 55.67

圖5 大鼠主動脈eNOS含量比較

由圖5可知，模型組的主動脈血管中eNOS含量與空白試驗組存在顯著差異，各組經過天麻鉤藤藥膳治療后，都明顯高于模型組除天麻鉤藤藥膳高劑量組與空白試驗組相近，天麻鉤藤藥膳低劑量組與天麻鉤藤中劑量組與空白試驗相差較為明顯，空白組與藥膳高劑量組含量相近，模型組處于低水平狀態，說明高血壓病會降低大鼠血清中eNOS溶解量。

經過8周的試驗治療，解剖大鼠獲取主動脈血，測大鼠血漿中AngII含量。

表6 大鼠血漿中AngII含量對比（±s）

表6 大鼠血漿中AngII含量對比（±s）

組別 n AngII / pg·mL-1空白試驗組模型對照組藥膳高劑量組藥膳中劑量組藥膳低劑量組15 14 14 14 15 103.44±10.73 180.49±20.43 160.36±16.88 160.36±18.47 160.36±20.41

空白試驗組與模型組大鼠的AngII含量相差較大，天麻鉤藤藥膳低劑量組、天麻鉤藤藥膳中劑量組、天麻鉤藤藥膳高劑量組的AngII含量，呈現遞減趨勢，且遞減幅度較大。說明天麻鉤藤藥膳高劑量組能夠更好地降低大鼠血漿中的血管緊張素II含量。

經過8周的試驗治療，解剖大鼠獲取主動脈血，測大鼠血漿中ET-1含量。

表7 大鼠血漿中ET-1含量測定（±s）

表7 大鼠血漿中ET-1含量測定（±s）

組別 n ET-1 / pg·mL-1空白試驗組模型對照組藥膳高劑量組藥膳中劑量組藥膳低劑量組15 14 14 14 15 170.45±14.69 260.32±37.42 210.46±18.42 199.58±24.39 185.32±30.66

模型組大鼠血漿中ET-1含量明顯高于空白試驗組，經過各組天麻鉤藤藥膳治療后ET-1含量相較于模型組均有所下降，其中高劑量組下降最為明顯。

在試驗預定階段分別收集大鼠尿液測定尿液中mALB含量。

圖7 大鼠血漿中ET-1含量測定

尿液中mALB含量測定見表8，尿液中mALB含量測定見圖8。

表8 尿液中mALB含量測定/ mg·mL-1

圖8 尿液中mALB含量測定

與空白試驗組對比模型組的大鼠尿液內mALB升高幅度較大，經過8周的時間還有升高的趨勢，天麻鉤藤藥膳低劑量組在給藥前后mALB含量變化不突出，天麻鉤藤藥膳高劑量組與天麻鉤藤藥膳中劑量組治療前后mALB含量變化差別明顯。

在試驗預定階段分別收集大鼠尿液測定尿液中β2-MG含量。

尿液中β2-MG含量測定見表9，尿液中β2-MG含量測定見圖9。

表9 尿液中β2-MG含量測定/ mg·mL-1

圖9 尿液中β2-MG含量測定

與空白試驗組相比模型組大鼠尿液中β2-MG顯著升高，經過8周的時間還有升高的趨勢，天麻鉤藤藥膳低劑量組給藥前后β2-MG含量變化不明顯，天麻鉤藤藥膳高劑量組與天麻鉤藤藥膳中劑量組治療前后β2-MG含量變化差異明顯具有統計學意義。

3 結論

研究經過連續4周造模期，造模第1周起除空白試驗組外各試驗組大鼠血壓急劇上升，于第3周開始趨于穩定，并保持高血壓水平（收縮壓≥140 mmHg，舒張壓≥90 mmHg） 說明高血壓病鼠模型建造成功。經過4周的天麻鉤藤藥膳治療后，高血壓大鼠血壓有一定緩解并有回落趨勢，試驗數據可以看出天麻鉤藤藥膳高劑量組血壓治療效果最為突出，經過8周的治療天麻鉤藤高劑量組治療的大鼠組血壓趨于穩定。天麻鉤藤藥膳中劑量組與天麻鉤藤藥膳低劑量組大鼠血壓也有所下降，試驗結果表明天麻鉤藤藥膳可以有效緩解高血壓，并具有降低血壓的作用。

經天麻鉤藤藥膳高中低劑量治療，高血壓大鼠血漿中AngII和ET-1，NO，eNOS含量變化的討論與空白試驗組相比模型組大鼠血漿中內皮素成分顯著升高，經天麻鉤藤喂養后內皮素成分水平有所降低，說明內皮素對于高血壓有一定關聯。

經天麻鉤藤藥膳治療，人造高血壓大鼠尿液中β2-MG，mALB含量變化的討論相較于模型組對比天麻鉤藤藥膳高劑量試驗組能夠顯著減少大鼠尿液中β2-MG，mALB含量。與空白試驗組相比，模型組大鼠尿液中mALB提高較突出，經過8周時間還有進一步提高的可能。經過天麻鉤藤藥膳治療的大鼠尿液中β2-MG，mALB含量明顯降低，以天麻鉤藤藥膳高劑量組效果較為明顯。由此可知天麻鉤藤藥膳高劑量組可以降低大鼠對β2-MG，mALB的排泄，緩解高血壓對身體帶來的損害，對人體具有保護作用。

分析經天麻鉤藤藥膳治療，各試驗組中高血壓病大鼠日常行為、毛色、糞便、飲水的變化模型組大鼠漸漸發現皮毛松散、灰暗無澤、食少、小便色清量多，握持時遺尿較為普遍，大便質軟并伴有惡臭。經天麻鉤藤藥膳高劑量及中劑量治療2周后，大鼠皮毛逐漸變得緊湊、有一定光澤，進食量有所增加，藥膳低劑量組經治療后，皮毛仍蓬松，沒有色澤，進食量減少，同時有昏睡現象。造模成功與空白試驗組對照神經處于較高度緊張狀態，容易被輕易激惹，共同生活在一籠的大鼠打斗行為經常發生，模型組大鼠毛皮無光澤、暗淡、毛糙且蓬松，并有局部脫落較多現象，尿液透明量大，握在手中有遺出尿液現象出現，糞便質地偏稀，氣味很大。經過天麻鉤藤藥膳治療后瞇眼、拱背消失或減輕，毛色逐漸恢復光澤，糞便氣味明顯減輕，高劑量組對于減輕瞇眼與拱背現象、毛色的恢復糞、便氣味的改善起效更早，經過天麻鉤藤藥膳喂養的人造高血壓的大鼠飲水量逐漸恢復到造模前水平，試驗現象不難看出天麻鉤藤藥膳對于改善高血壓大鼠對于高血壓引起的相關癥狀具有明顯的改善作用。

天麻鉤藤藥膳對于治療腎性高血壓大鼠的降壓機理大致為通過減少試驗大鼠血漿中血管緊張素II和內皮素含量，并通過提高血清中的NO含量及動脈血管中內皮型一氧化氮合酶的影響，以達到減少腎性高血壓大鼠血壓之目標，實現天麻鉤藤藥膳療效的作用。試驗治療結果顯示，天麻鉤藤藥膳能夠減少大鼠癥狀和減輕大鼠血高血壓，經過8周的試驗治療，天麻鉤藤藥膳治療的大鼠收縮壓下降接近正常水平，天麻和鉤藤藥膳高劑量組顯著使大鼠的血壓降低，并有恢復并達到正常大鼠狀態的趨勢。與天麻鉤藤中劑量組和低劑量組相比，高劑量組雖然見效較慢，但同樣緩解和治療高血壓的效果，天麻鉤藤藥膳屬于純天然中藥配方，無任何化學制劑，副作用顯著降低，天麻鉤藤藥膳前景廣闊。目前，已知含生藥2 g/mL的天麻鉤藤藥膳具有較好抑制血壓升高、明顯降低高血壓的作用，但更加合理的配方還有待進一步研究。