新生兒遺傳代謝病篩查室間質量評價5年回顧

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(昆明醫科大學第一附屬醫院新生兒遺傳代謝病篩查中心，云南 昆明 650032)

新生兒疾病篩查(neonatal screening)是指對新生兒群體通過簡易快速準確的實驗室檢測手段，在患兒臨床癥狀未出現之前發現某些危害嚴重的先天性遺傳代謝性疾病，避免出現智力、體格發育障礙甚至死亡[1-2]。為保證新生兒遺傳代謝病篩查結果的質量，應對篩查的全過程進行嚴格的質量控制并建立完善的質量保證體系。昆明醫科大學第一附屬醫院新生兒遺傳代謝病篩查中心2013年開始參加衛生部臨床檢驗中心(簡稱臨檢中心)組織的新生兒遺傳代謝病篩查實驗室室間質量評價(簡稱室間質評)活動，現對5年來的質評結果進行總結分析。

1資料與方法

1.1研究材料

每年接收衛生部臨檢中心分發的苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)、促甲狀腺激素(thyroid-stimulating hormone，TSH)3批次未知濃度的濾紙干血斑室間質評樣本，每批次5份，共計75份；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)在2013年、2014年只有2批次，后面每年3批次，每批次5份，共計65份。全部質評樣本塑料袋密封保存于-20℃冰箱待檢。

1.2儀器試劑

試劑為芬蘭Wallac公司原裝進口的Neo-TSH、Neo-Phe和Neo-G6PD測定試劑盒，Wallac 1420 VICTOR熒光分析儀、時間分辨熒光免疫分析(DELFIA)自動振動器、DELFIA Plate Wash 1296-026 型洗板機(以上均購自芬蘭Wallac公司)，3mm干血斑手動打孔器、DNP-9052型電熱恒溫培養箱(上海精宏實驗設備有限公司)。

1.3方法

1.3.1樣本檢測

衛生部臨檢中心每年發放3個批次的Phe和TSH質評樣本，G6PD樣本在2013年、2014年只有2批次，后面每年是3批次，按照要求分別于每年的5月、8月、10月對質評樣本進行檢測，Phe和G6PD用熒光法，TSH用DELFIA，所有質評樣本和待檢樣本無區別對待，同時同批次檢測，測定后按規定上報定量檢測和臨床判斷結果，質評結果及得分情況在1個月內反饋到新篩中心。

1.3.2室間質評判斷標準

按照衛生部臨檢中心的判斷標準，①定量判斷：所有項目質評樣本值允許范圍是靶值±30%，超過此范圍為失控[3]；②定性判斷：根據實驗定量結果，參照實驗室TSH、Phe和G6PD的陽性切值對每份室間質評樣本進行臨床評估[3]。本篩查中心各項目的定性判斷標準見表1。通過與衛生部臨檢中心反饋的定性結果進行比對，不符合者判斷為失控。

表1本篩查中心Phe、TSH、G6PD的定性判斷標準

Table 1 Qualitative criteria for Phe, TSH and G6PD in the screening center

1.3.3質評結果評分

按照衛生部臨檢中心的判斷標準，每次活動每一篩查項目未能達到至少80%得分則稱為該項目本次活動不滿意成績。總測試活動未達到至少80%得分稱為不滿意的成績。未參加測試活動定為不滿意的成績，該次得分為0[4]。對每一次室間質評，針對某一項目的得分計算公式為：該項目的可接受結果數/該項目總的測定樣本數×100%。對調查的全部項目，其得分計算公式為：全部項目的可接受結果數/全部項目總的測定樣本數×100%[4]。

2結果

2.1室間質評樣本偏倚情況

5年內共接受Phe和TSH 15批次共計75份質評樣本，G6PD 13批次共計65份質評樣本。Phe偏移范圍：-30.00%～45.00%，TSH偏移范圍：-21.41%～34.92%，G6PD偏移范圍：-23.33%～45.83%，各項目測定結果偏倚分布見圖1、圖2、圖3。

Phe相對偏倚平均值14.00%，TSH相對偏倚平均值11.56%，G6PD相對偏倚平均值9.53%，各項目每年相對偏倚的平均值見表2、表3。

圖1 Phe質評樣本濃度偏倚分布

圖2 TSH質評樣本濃度偏倚分布

2.2定量結果

75份Phe和TSH質評樣本中，分別有70份Phe和73份TSH樣本測定結果通過，符合率分別為93.33%(70/75)和97.33%(73/75)；65份G6PD質評樣本中，60份樣本測定結果通過，符合率為92.31%(60/65)，失控樣本、失控結果及原因分析見表4。

表2 2013—2017年度Phe、TSH相對偏倚情況

Table 2 Relative bias of Phe and TSH during 2013-2017

年份批次樣本量(份)Phe相對偏倚平均值(%)TSH相對偏倚平均值(%)2013年31510.949.562014年31514.0011.122015年31513.8119.812016年31515.928.652017年31515.368.64合計157514.0011.56

表3 2013—2017年度G6PD相對偏倚情況

Table 3 Relative bias of G6PD during 2013-2017

年份批次樣本量(份)G6PD相對偏倚平均值(%)2013年2108.232014年2108.132015年3154.152016年31513.362017年31513.82合計13659.53

表4 12份定量結果失控質評樣本及原因分析

2.3定性結果

75份Phe和TSH質評樣本、65份G6PD質評樣本中，各有1份Phe、TSH和G6PD樣本定性判斷未通過，符合率分別是Phe 98.67%(74/75)、TSH 98.67%(74/75)、G6PD 98.46%(64/65)。

2.4質評結果評分

所有項目的質評樣本定量和定性判斷總評分結果均≥80%，見表5。

表5各項目定量和定性結果總評分[%(n/N)]

Table 5 Total score of quantitative and qualitative results for each item[%(n/N)]

3討論

3.1室間質評結果分析

衛生部臨床檢驗中心的Phe和TSH新生兒遺傳代謝病篩查實驗室質量評價工作始于1998年[4]，G6PD檢測的室間質評工作從2008年開始。昆明醫科大學第一附屬醫院新生兒遺傳代謝病篩查中心成立于2012年，2013—2017年連續5年參加全國新生兒疾病篩查實驗室質量評價，共接收Phe和TSH 15批次共75份質評樣本，首次在全國范圍內對參加G6PD室間質評結果進行分析和總結，5年接收G6PD 13批次共65份樣本，Phe相對偏倚平均值14.00%，TSH相對偏倚平均值11.56%，G6PD相對偏倚平均值9.53%，基于同樣的測定方法，我中心的Phe和TSH的相對偏移平均值比其他實驗室小[5-6]，說明實驗室的檢測操作相對穩定，結果均一性較好。Phe、TSH和G6PD定量和定性單項評分和總評分均≥80%，達到衛生部臨檢中心的質評要求，說明本篩查中心實驗室檢測結果是可信的。

3.2質評樣本失控原因分析及對策

所有質評樣本中有5份Phe標本、2份TSH標本、5份G6PD標本定量結果偏移均≥靶值±30%，判斷為失控。分析原因：2份Phe樣本是隨機誤差和系統誤差，3份Phe樣本是新搬遷實驗室溫度過高導致失控；2份TSH樣本是由于沒有定期清洗消毒洗板機導致失控；2份G6PD樣本是試劑混合不均勻，3份G6PD樣本是因為實驗人員更換，沒有做好交接人為用錯實驗板導致失控。3個項目各有1份樣本定性判斷未通過，Phe和TSH未通過均是因為人為上報錯誤導致，G6PD未通過是因為測定值剛好為本室的可疑陽性切值2.2IU/gHb，故上報可疑陽性，而質評判斷標準是陰性，所以未通過。患兒確診或漏診都是定性判斷決定的，理論上其質量的好壞更為重要[7]，特別是針對G6PD定性判斷失控的情況，要考慮后續對我中心的G6PD檢測數據進行全面分析，制定符合我中心實驗室的G6PD陽性切值。此外還要加強實驗室人員操作規范培訓，減少因人為操作失誤而導致的失控。

3.3展望

新生兒疾病篩查工作的最重要特點是疾病的早期診斷和治療，而診斷的唯一依據是實驗室的檢測結果[8]，假陰性和假陽性結果都會對患兒、患兒家庭及社會造成不可逆的巨大精神負擔和經濟損失[9]，所以加強對篩查實驗室的檢測質量管理和控制必不可少。我篩查中心成立較晚(2012年)，但是實驗室每年的篩查量在15萬左右，如此大的檢測量更加應該重視實驗室的質量控制，其檢測質量是否合格就需要進行客觀驗證和評價。室間質評是臨床實驗室全面質量管理的重要組成部分，也是實驗室認可的重要依據[6]，新篩實驗室通過參加全國新生兒疾病篩查實驗室室間質量評價活動及嚴格的實驗室室內質控制度，能起到自查、自檢、自省的作用，為遺傳代謝病的診斷治療提供準確可靠的檢測信息[10]。我院新篩實驗室2017年開展了先天性腎上腺皮質增生癥的檢測，并成功申請參加衛生部臨檢中心2018年的17α-羥化酶室間質評檢測活動，希望能及時接受專業測評，為檢測質量保駕護航。