HPLC法測定沖和顆粒中橙皮苷的含量

★ 王靜 張若良（贛州市食品藥品檢驗檢測中心 江西 贛州 341000）

沖和顆粒由山楂、陳皮、法半夏等多味藥組成，是贛州市中醫(yī)院根據(jù)幾十年臨床使用歷史積累下的經(jīng)驗方研發(fā)而成的制劑。具有消食、導(dǎo)滯、和胃的功效，用于積食停滯，脘腹脹滿，噯腐吞酸，不欲飲食，也適用于消化性潰瘍。陳皮中所含有的有效成分是橙皮苷［1］（Hesperidin）。橙皮苷是一種黃酮類化合物，廣泛存在于蕓香科柑橘屬植物中［2］，具有抑菌、抗炎、抗病毒等多種生物活性作用，是維生素類藥［3］，可用于臨床上心血管系統(tǒng)疾病的輔助治療。為了有效控制沖和顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，本試驗研究了該制劑中橙皮苷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Aglient1260高效液相色譜儀；紫外檢測器；Chemstation色譜工作站；電子分析天平。

1.2 試劑 橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110721-200616）；沖和顆粒（市售，批號：20151211，規(guī)格：9g）；乙腈為色譜純，水為一級水，甲酸為優(yōu)級純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil Plus C18-A（250mm×4.6mm，5μm）；流 動 相：乙 腈 -0.1%甲酸（20∶80）；流速：1.0mL/min；檢測波長：283nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液 精密稱定橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇制成每1mL含橙皮苷20μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱定裝量差異項下的本品約4g，混勻，研細(xì)，置150mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，取出，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

2.2.3 陽性對照溶液 取生產(chǎn)用陳皮藥材，同供試品溶液制備方法制成陽性對照溶液。

2.2.4 陰性對照溶液 按制劑制備工藝取不含陳皮的藥材制成陰性樣品。

2.3 專屬性試驗 分別取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品、供試品、陽性和陰性對照品，在3.1色譜條件下測定。圖1為各溶液測得的色譜圖，表明橙皮苷峰的相似性在供試品中與標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對照品中一致。陰性對照在橙皮苷的峰位上未出現(xiàn)色譜峰，說明供試品中其它成分對橙皮苷的測定無干擾。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品，分別制成每1mL含 5.01，10.02，20.04，40.08，400.8μg的對照品溶液，精密吸取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以橙皮苷對照濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：Y=18.072 X-0.97853，r=1.0000。結(jié)果表明橙皮苷在5.01～400.8μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL，按照3.1色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得色譜峰積分面積RSD為0.79%。

2.6 重復(fù)性試驗 分別精密稱取同一批號（批號20151211）的樣品5份，按供試品溶液制備方法制備，根據(jù)本實驗方法測定，結(jié)果樣品中橙皮苷的平均含量為2.87mg/袋，RSD為0.18%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液（批號20151211）10μL，按3.1色譜條件，分別于制備后0，2，4，6，8，10h測定，測得色譜峰面積的RSD為0.90%，結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 取供試品及標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，分別按供試品取樣含量與標(biāo)準(zhǔn)品加入量比例1∶0.5、1∶1、1∶1.5，根據(jù)供試品溶液的制備方法制成溶液，測定峰面積。加樣回收率統(tǒng)計結(jié)果見表1，表明橙皮苷的平均回收率為98.2%，RSD為1.8%（n=9）。

表1 橙皮苷加樣回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定 分別精密稱取10批待測樣品各4g，按供試品溶液制備方法制備。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各10μL，根據(jù)本實驗方法進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表2。

表2 十批樣品橙皮苷含量測定結(jié)果 mg/袋

3 討論

橙皮苷的含量測定方法已經(jīng)有較多文獻(xiàn)［4-5］，根據(jù)用HPLC分析測定相關(guān)藥片或制劑中橙皮苷含量的文獻(xiàn)［6-8］基礎(chǔ)上，本研究從柱溫、流速、水相酸濃度以及不同品牌色譜柱等多個方面考察了本實驗方法的耐用性，確定最佳色譜條件為色譜柱Diamonsil Plus C18-A（4.6mm×250mm，5μm），流動相為乙腈-0.1%甲酸（20∶80），流速1.0mL/min，檢測波長283nm，柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL。本實驗方法使橙皮苷色譜峰達(dá)到基線分離，靈敏度高，檢測范圍廣，精密度實驗表明連續(xù)5次進(jìn)樣橙皮苷峰面積的RSD為0.79%，穩(wěn)定性實驗表明本實驗法在10h內(nèi)測得的橙皮苷含量準(zhǔn)確，為沖和顆粒中橙皮苷的含量測定建立了一種可靠的方法。