血漿骨橋蛋白、纖維蛋白原水平與急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后相關(guān)性的前瞻性研究

趙士嬌，韓雪，高燕軍

腦卒中是全球范圍內(nèi)因病死亡的第二大原因，僅次于惡性腫瘤［1］，且約2/3腦卒中存活者存在不同程度殘疾，進(jìn)而增加了醫(yī)療負(fù)擔(dān)及社會(huì)負(fù)擔(dān)［2］。缺血性腦卒中最常見的TOAST病因分型是大動(dòng)脈粥樣硬化型，而炎性反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用［3］。骨橋蛋白（OPN）是一種多功能蛋白，其通過與細(xì)胞表面整合素相互作用而參與AS發(fā)生發(fā)展過程；此外，OPN還對炎性反應(yīng)和鈣化形成具有調(diào)控作用，進(jìn)而影響粥樣硬化斑塊形成［4］。纖維蛋白原（FIB）是由凝血因子Ⅰ在肝細(xì)胞內(nèi)合成，為炎性反應(yīng)急性期蛋白，其可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、變性及平滑肌細(xì)胞增殖，并可加速AS發(fā)生［5］。本研究旨在探討血漿OPN、FIB水平與急性腦梗死患者神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性，為改善患者預(yù)后提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 連續(xù)選取2017年8月—2018年3月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治的急性腦梗死患者150例作為腦梗死組，于發(fā)病48 h內(nèi)入院，均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》［6］中的急性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)顱腦CT或磁共振成像（MRI）證實(shí)。根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分將急性腦梗死組患者分為輕型腦梗死組（n=87）和中重型腦梗死組（n=63），根據(jù)治療后90 d改良Rankin量表（mRS）評分將急性腦梗死組患者分為預(yù)后良好組（n=104）和預(yù)后不良組（n=46）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＜18歲；（2）有腦卒中病史者；（3）合并出血性卒中者；（4）合并顱內(nèi)感染、慢性炎性疾病、冠心病、心力衰竭、骨質(zhì)疏松、結(jié)締組織疾病及腫瘤者；（5）合并肝、腎功能不全者；（6）近期有手術(shù)或創(chuàng)傷、中途轉(zhuǎn)院或失訪者。另選取同期體檢中心體檢健康志愿者100例作為對照組。腦梗死組和對照組受試者性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、高血壓病史、糖尿病病史、吸煙史、飲酒史比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表1），具有可比性。本研究經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者或家屬知情并簽署知情同意書。

1.2 血漿OPN和FIB水平檢測方法 對照組受試者于體檢當(dāng)天、腦梗死組患者于入院后第2天抽取空腹靜脈血3 ml，均置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，3 000 r/min離心15 min，留取血漿并置于-80 ℃冰箱中保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血漿OPN水平，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作；采用日本Sysmex CA 8000全自動(dòng)血凝儀檢測血漿FIB水平。

1.3 神經(jīng)功能缺損程度評估 采用NIHSS評估腦梗死組患者入院第1天神經(jīng)功能缺損程度，總分42分，評分越高提示患者神經(jīng)功能損傷程度越重。NIHSS評分＜5分定義為輕型腦梗死，NIHSS評分≥5分定義為中重型腦梗死。

1.4 近期預(yù)后評估 患者出院后通過門診或電話進(jìn)行隨訪，采用mRS評估腦梗死組患者發(fā)病3個(gè)月預(yù)后，總分5分，評分越高提示患者預(yù)后越差。mRS評分≤2分定義為預(yù)后良好，mRS評分＞2分定義為預(yù)后不良。

表1 腦梗死組和對照組受試者一般資料比較Table 1 Comparison of general information between control group and case group

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（x ±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料分析采用χ2檢驗(yàn)；血漿OPN、FIB水平與急性腦梗死患者NIHSS評分、mRS評分的相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析；繪制ROC曲線以評價(jià)血漿OPN、FIB水平對急性腦梗死患者神經(jīng)功能損傷程度和預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死組和對照組受試者血漿OPN、FIB水平比較腦梗死組患者血漿OPN、FIB水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

表2 腦梗死組和對照組受試者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 2 Comparison of plasma levels of OPN and FIB between control group and case group

表2 腦梗死組和對照組受試者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 2 Comparison of plasma levels of OPN and FIB between control group and case group

注：OPN=骨橋蛋白，F(xiàn)IB=纖維蛋白原

組別 例數(shù) OPN（mg/L） FIB（g/L）對照組 100 5.41±2.36 2.84±0.58腦梗死組 150 7.89±3.82 3.14±0.91 t值 5.799 2.884 P值 ＜0.001 0.004

2.2 輕型腦梗死組和中重型腦梗死組患者血漿OPN、FIB水平比較 中重型腦梗死組患者血漿OPN、FIB水平高于輕型腦梗死組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

2.3 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者血漿OPN、FIB水平比較 預(yù)后不良組患者血漿OPN、FIB水平高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表4）。

2.4 相關(guān)性分析 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，血漿OPN、FIB水平與急性腦梗死患者NIHSS評分（rs分別為0.480、0.497）、mRS評分（rs分別為0.387、0.352）呈正相關(guān)（P＜0.05）。

2.5 預(yù)測價(jià)值 ROC曲線顯示，血漿OPN水平預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度和預(yù)后的曲線下面積（AUC）分別為0.724、0.726，血漿FIB水平預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度和預(yù)后的AUC分別為0.714、0.711（見表 5、圖 1～2）。

表3 輕型腦梗死組和中重型腦梗死組患者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 3 Comparison of plasma levels of OPN and FIB in patients with different severity of cerebral infarction

表3 輕型腦梗死組和中重型腦梗死組患者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 3 Comparison of plasma levels of OPN and FIB in patients with different severity of cerebral infarction

組別 例數(shù) OPN（mg/L） FIB（g/L）輕型腦梗死組 87 6.61±3.11 2.88±0.69中重型腦梗死組 63 9.65±4.03 3.49±1.05 t值 5.214 4.274 P 值 ＜0.001 ＜0.001

表4 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 4 Comparison of plasma levels of OPN and FIB in patients with different prognosis

表4 預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者血漿OPN、FIB水平比較（±s）Table 4 Comparison of plasma levels of OPN and FIB in patients with different prognosis

組別 例數(shù) OPN（mg/L） FIB（g/L）預(yù)后良好組 104 6.89±3.18 2.94±0.68預(yù)后不良組 46 10.13±4.21 3.59±1.17 t值 5.186 3.518 P值 ＜0.001 0.001

3 討論

ROSS［7］研究結(jié)果顯示，炎性反應(yīng)可參與AS的發(fā)生、發(fā)展。WU等［8］研究表明，伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊患者炎性標(biāo)志物表達(dá)升高，且頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性與血清中炎性標(biāo)志物水平相關(guān)，包括OPN、FIB、超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白介素6（IL-6）及腫瘤壞死因子α（TNF-α）等。腦組織缺血后的炎癥級聯(lián)反應(yīng)可能是導(dǎo)致腦損傷進(jìn)一步加重的重要原因之一［9］。有研究顯示，通過檢測炎性反應(yīng)因子可預(yù)測腦梗死患者預(yù)后［10］。因此，本研究分析了血漿OPN、FIB水平與急性腦梗死患者NIHSS、mRS評分的相關(guān)性，并進(jìn)一步探討其對患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。

OPN是一種特異性骨涎蛋白，于大鼠肉瘤細(xì)胞克隆時(shí)被首次提出［11］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，頸動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷后內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞內(nèi)OPN mRNA表達(dá)上調(diào)，8 h可達(dá)高峰，持續(xù)14 d后逐漸下降［8］。WANG等［12］研究發(fā)現(xiàn)，急性缺血性腦卒中患者血漿OPN水平明顯升高，且其不僅在原發(fā)性AS形成過程中具有促進(jìn)作用，還可促進(jìn)血管重建術(shù)后動(dòng)脈再狹窄。相關(guān)研究表明，在頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫前采用抗OPN抗體治療可抑制內(nèi)膜增生［13］。本研究結(jié)果顯示，腦梗死組患者血漿OPN水平高于對照組，中重型腦梗死組患者血漿OPN水平高于輕型腦梗死組，預(yù)后不良組患者血漿OPN水平高于預(yù)后良好組，且血漿OPN水平與急性腦梗死患者NIHSS評分和mRS評分呈正相關(guān)，提示血漿OPN水平越高急性腦梗死患者神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重、預(yù)后越差。分析血漿OPN水平影響急性腦梗死患者神經(jīng)功能損傷程度及預(yù)后的可能機(jī)制如下：（1）OPN可通過RGD、SVVYGLR序列與細(xì)胞表面的多種整合素受體（如整合素αvβ1、αvβ3、αvβ5、α4β1等）相互作用，進(jìn)而促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞由中膜向內(nèi)膜遷移及以巨噬細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞向損傷部位聚集，增加T淋巴細(xì)胞中CD3表達(dá)和活性氧生成，加速AS形成［14］；（2）OPN是一種強(qiáng)效的軟組織礦化抑制劑，可防止血管鈣化、降低斑塊穩(wěn)定性；（3）AS斑塊中微血管形成有助于易損斑塊形成，OPN可通過αvβ3-磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-內(nèi)皮型一氧化氮合酶-一氧化氮（αvβ3-PI3-K-Akt-eNOS-NO）信號通路直接刺激微血管生成，進(jìn)而增加斑塊破裂發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［15］。本研究結(jié)果還顯示，血漿OPN水平預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度和預(yù)后的AUC分別為0.724、0.726，提示血漿OPN水平可在一定程度上預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后。

表5 血漿OPN、FIB水平對急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度和預(yù)后的預(yù)測價(jià)值Table 5 Predictive value of plasma levels of OPN and FIB on degree of nervous functional defects and prognosis

圖1 血漿OPN、FIB水平預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度的ROC曲線Fugure 1 ROC curve for predictive value of plasma levels of OPN and FIB on degree of nervous functional defects in patients with acute cerebral infarction

圖2 血漿OPN、FIB水平預(yù)測急性腦梗死患者預(yù)后的ROC曲線Figure 2 ROC curve for predictive value of plasma levels of OPN and FIB on prognosis in patients with acute cerebral infarction

FIB是一種經(jīng)典的炎性標(biāo)志物，其在AS形成過程中誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞向血管內(nèi)膜遷移，促進(jìn)其形成斑塊內(nèi)的泡沫細(xì)胞，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷；此外，F(xiàn)IB還可通過在血漿中形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而影響血流動(dòng)力學(xué)，使血小板和紅細(xì)胞聚集性增加，調(diào)節(jié)白細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，增加血液黏稠度，促使血栓形成［16］。本研究結(jié)果顯示，腦梗死組患者血漿FIB水平高于對照組，中重型腦梗死組患者血漿FIB水平高于輕型腦梗死組，預(yù)后不良組患者血漿FIB水平高于預(yù)后良好組，且血漿FIB水平與急性腦梗死患者NIHSS評分和mRS評分呈正相關(guān)，推測FIB可能參與急性腦梗死患者的炎性反應(yīng)過程。既往研究表明，血漿FIB水平升高是罹患冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、缺血性腦卒中和周圍血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［17］。本研究結(jié)果顯示，血漿FIB水平預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度和預(yù)后的AUC分別為0.714、0.711，提示血漿FIB水平可在一定程度上預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后。DEL ZOPPO等［18］研究結(jié)果顯示，血漿FIB水平升高是急性腦梗死患者發(fā)病后90 d時(shí)預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測因素，本研究結(jié)果與其相似。

綜上所述，血漿OPN、FIB水平與急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后呈正相關(guān)，并可在一定程度上預(yù)測患者神經(jīng)功能缺損程度及預(yù)后。但本研究為單中心研究，樣本量較小，且未動(dòng)態(tài)監(jiān)測血漿OPN、FIB水平變化，故研究結(jié)果結(jié)論仍需擴(kuò)大樣本量、聯(lián)合多中心進(jìn)一步研究證實(shí)。

作者貢獻(xiàn)：趙士嬌、高燕軍進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)；趙士嬌進(jìn)行研究的實(shí)施與可行性分析并撰寫論文；趙士嬌、韓雪進(jìn)行數(shù)據(jù)收集與整理，結(jié)果分析與解釋；韓雪進(jìn)行論文修訂；高燕軍負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。