液基細(xì)胞學(xué)檢查在惡性胸腹水鑒別診斷中的臨床應(yīng)用

謝小林，劉家斌，張利

（江西省萍鄉(xiāng)市上栗縣人民醫(yī)院病理科，江西 萍鄉(xiāng) 337009）

惡性胸腹水是指由于全身或胸腹腔內(nèi)的癌變或惡性腫瘤病變，引起胸腔、腹腔臟層和壁層的胸膜或腹膜發(fā)生大小范圍不確定的彌漫性病變，導(dǎo)致體腔內(nèi)液體異常增多的現(xiàn)象。液基細(xì)胞學(xué)是脫落細(xì)胞學(xué)的一部分，是把按傳統(tǒng)方式難以處理的脫落細(xì)胞學(xué)標(biāo)本放入一種中介的液體中去，以去除血液、黏液等影響診斷的干擾成分，達(dá)到提高診斷率的目的。中介的液體被稱為細(xì)胞保存液，具有保持細(xì)胞形態(tài)、軟化黏液、處理紅細(xì)胞等功能。有關(guān)實驗證明，液基細(xì)胞學(xué)在疑難胸腔積液鑒別診斷中有重要的臨床意義，能有效輔助細(xì)胞學(xué)鑒別肺腺癌細(xì)胞及間皮細(xì)胞，值得推廣應(yīng)用[1]。經(jīng)過多年的實踐證明，液基細(xì)胞學(xué)在胸腹水標(biāo)本的制片質(zhì)量和制片滿意度方面優(yōu)于傳統(tǒng)涂片細(xì)胞學(xué)，對惡性胸腹水的診斷陽性率略高于傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)[2]。胸腹水取樣結(jié)果情況不一，因此必須做一些前期處理，臨床送檢的胸腹水應(yīng)盡快離心放入保存液中。本研究的目的是探討液基細(xì)胞學(xué)在檢查惡性胸腹水鑒別診斷中的臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究選取2017年1月～2017年12月本院內(nèi)科收治的69例患者，按照隨機(jī)標(biāo)準(zhǔn)分為觀察組和對照組，觀察組35例，對照組34例。其中觀察組的35例中男16例，女19例；年齡19～53歲，平均（33±6.8）歲；病程3～12年，平均病程（4.1±1.9）年；輕度21例，重度14例；病變部位：胸水13例，腹水22例；對照組34例中男20例，女14例；年齡20～55歲，平均（32±3.9）歲；病程10個月～8年，平均病程（4.3±1.7）年；輕度10例，重度24例；病變部位：胸水19例，全結(jié)腸15例。兩組患者性別、年齡、病程、病情、病變部位等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)，影像學(xué)檢查，液體生化檢查及病理學(xué)檢查聯(lián)合診斷。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①選取69例患者均根據(jù)上條診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為惡性胸腹水；②為排除年齡因素影響，患者年齡應(yīng)控制在19～55歲范圍內(nèi)；③患者及家屬對參與此項研究知情并同意；④本院對此研究知情并同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者；②年齡＜19歲或者＞55歲者；③腹膜假性黏液瘤、柏查氏綜合征、宮頸原位癌、卵巢癌者等；④有嚴(yán)重并發(fā)癥如腸梗阻、腸穿孔、中毒性巨結(jié)腸者；⑤妊娠或哺乳期婦女；⑥對研究中所用藥物過敏者；⑦有嚴(yán)重的心、肺、腹基礎(chǔ)疾病者；⑧重度及難治性患者；⑨有精神疾患不能配合治療者[3]。

1.3 標(biāo)本取材 對照組進(jìn)行傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查，觀察組進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)檢查，液基細(xì)胞學(xué)檢查具體步驟如下。

1.3.1 標(biāo)本前期處理 ①若標(biāo)本液量較多，將液體靜置30 min左右，用吸管吸取底部沉淀12 ml進(jìn)行離心（2 000轉(zhuǎn)/min，10 min）。離心后若細(xì)胞沉淀較多，吸取上清棄之，將底部沉淀放入保存液中，混勻；若沉淀較少則棄上清液后保留沉淀，再吸取約12 ml離心，直至得到較多的細(xì)胞沉淀，再放入保存液。②血性標(biāo)本：離心后若得到較多的紅色沉淀，則用吸管小心吸去上清液后，取中間層的沉淀放入保存液中，重復(fù)多次，直至收集較多的細(xì)胞沉淀為止。

泰普液基沉降式細(xì)胞學(xué)制片染色技術(shù)（手工型）是在巴氏涂片基礎(chǔ)上進(jìn)一步獨立改良技術(shù)之一，采用先進(jìn)的自然沉降技術(shù)及特制高粘附力玻片，根據(jù)人體不同類型細(xì)胞比重不同，病變細(xì)胞核異質(zhì)、比重大、沉降速度快的特點，優(yōu)先捕獲病變細(xì)胞及有效成分。保存液中的細(xì)胞經(jīng)處理,有效去除黏液、血液與炎癥細(xì)胞等干擾物質(zhì)，制得的薄層細(xì)胞涂片效果清晰鮮艷，細(xì)胞分布均勻集中，重疊少，細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存良好，細(xì)胞與染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)清晰，克服了常規(guī)巴氏涂片所帶來的因制片質(zhì)量差及取材時細(xì)胞的丟失等所帶來的假陰性問題。

1.3.2 產(chǎn)品特點 ①先進(jìn)的細(xì)胞保存配方，標(biāo)本有效保存至少1個月；②獨特的玻片粘附配方，細(xì)胞數(shù)量充足；③梯度離心和自然沉降制片技術(shù)，背景干凈，細(xì)胞單層均勻平鋪；④全自動完成制片和染色過程，24～48片/h；⑤獨立染色室染色，一個標(biāo)本可重復(fù)制片3～10張；⑥HE和巴氏染色組合，滿足不同客戶需求。

1.3.3 產(chǎn)品優(yōu)勢

（1）實現(xiàn)標(biāo)本較為長期保存，使得胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)在普查中運(yùn)用成為可能。

（2）制片技術(shù)的改進(jìn)：①及時固定標(biāo)本，100%收集采集到的細(xì)胞，有效截留有診斷價值細(xì)胞成分；②特有的薄層制片技術(shù)：細(xì)胞分布均勻，重疊較少且三維立體感明顯，“二次分層”比重大的癌細(xì)胞更容易沉淀而被發(fā)現(xiàn)，提高了發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的機(jī)率；③制片效率高，一次可制片24張，染色更均勻鮮艷。HE和巴氏染色液組合，滿足不同客戶需求。④涂膜面積明顯縮小，降低了因病理醫(yī)師視眼疲勞產(chǎn)生漏診的現(xiàn)象，大大提高了工作效率。全自動沉降式制片染色系統(tǒng)在宮頸病變診斷中,具有制片省時，節(jié)約勞力，染色鮮明，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰等特點，為宮頸病變的診斷提供了良好的方法，聯(lián)合為患者進(jìn)行陰鏡活檢可提高診斷的準(zhǔn)確性，從而有效地預(yù)防宮頸癌的惡化[4]。基于上述優(yōu)勢，胸腹水沉降式液基薄層細(xì)胞制片染色技術(shù)（手工型）對于原發(fā)性間皮瘤和轉(zhuǎn)移癌的診斷效果明顯，為正確鑒別良性與惡性腫瘤提供更有效的診斷依據(jù)。

1.3.4 適用范圍 用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)、醫(yī)學(xué)研究部門對宮頸細(xì)胞、呼吸道脫落細(xì)胞、漿膜腔積液等人體標(biāo)本的制片染色。漿膜腔積液：胸水、腹水、腦積液、心包積液、尿液、羊水等。

1.4 方法 目前應(yīng)用較廣的兩種液基細(xì)胞學(xué)檢查法是全自動沉降式液基薄層制片系統(tǒng)和膜式液基薄層制片系統(tǒng)，兩種方法的區(qū)別見表1，本實驗的觀察組采取的是膜式液基薄層制片系統(tǒng)法。

表1 沉降式與膜式制片比較Table 1 Comparison between sedimentation and membrane production

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法的滿意度及準(zhǔn)確度比較 檢查前兩組患者在性別、年齡、病程、病情、病變部位的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，檢查結(jié)果的滿意度比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而準(zhǔn)確度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 兩種方法的滿意度及準(zhǔn)確度差異Table 2 Satisfaction and accuracy differences between the two methods

2.2 不良反應(yīng) 無明顯不良反應(yīng)。

3 討論

近年來，一種新型的國際上最先進(jìn)的“液基薄層細(xì)胞學(xué)”檢測技術(shù)得以應(yīng)用，一開始此檢查只用于宮頸細(xì)胞學(xué)篩查，但由于其還能發(fā)現(xiàn)癌前病變，微生物感染，如霉菌、滴蟲、衣原體等且患病異常細(xì)胞檢出率幾乎接近100%，所以也被應(yīng)用于：胸腹水，穿刺液，痰液標(biāo)本等脫落細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，典型應(yīng)用為宮頸刮片。液基細(xì)胞學(xué)優(yōu)點：①使用專用宮頸細(xì)胞刷取材，取材全面；②去掉了血液，黏液等雜質(zhì)；③細(xì)胞無重疊現(xiàn)象，因此診斷率高。細(xì)胞薄層技術(shù)能夠提高被檢胸腹水的涂片質(zhì)量，大大提高了惡性細(xì)胞的檢出率，為臨床治療提供了可靠的診斷依據(jù)[5]。液基細(xì)胞學(xué)檢查的技術(shù)原理是通過標(biāo)本采集、細(xì)胞混勻、細(xì)胞負(fù)壓過濾膜采集、細(xì)胞轉(zhuǎn)移四個步驟，制成薄層的玻片。經(jīng)HE染色，在光鏡下即可進(jìn)行閱片診斷。采用液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測胸腹水可獲高質(zhì)量涂片,能大大提高惡性細(xì)胞診斷率，且癌細(xì)胞分類更容易，更能為臨床治療提供可靠的診斷依據(jù)[6]。

漿膜腔包含體的胸腔、腹腔和心包腔。生理狀態(tài)下，正常人的這些腔隙內(nèi)都存在有少量液體。生理狀態(tài)下，這些腔隙內(nèi)液體一般采集不到；但是在病理狀態(tài)下，液體的產(chǎn)生、吸收平衡被打破，過多的液體將積存于體腔中，就會出現(xiàn)胸腹水。惡性胸腹水引起心臟壓迫、呼吸困難、胸痛、胸悶、腹脹等許多不適癥狀。以胸腔積液為例，運(yùn)用液基細(xì)胞薄層涂片檢測（TCT）法及傳統(tǒng)手工細(xì)胞學(xué)涂片法進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測，檢測結(jié)果以病理活組織檢查為標(biāo)準(zhǔn)：兩種方法對腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌的檢出率比較，液基細(xì)胞薄層涂片檢測明顯高些。所以得出結(jié)論液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)在胸腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中具有較高的病變檢出率，尤其對惡性腫瘤的檢出率具有重要臨床診斷價值[7]。惡性胸水在晚期肺癌中常見，發(fā)生率高達(dá)60%，常呈進(jìn)行性增多；而惡性腹水則以婦科腫瘤，消化道腫瘤和肝癌多見，同樣以血性腹水為主。由于液基細(xì)胞學(xué)的典型應(yīng)用即為宮頸刮片，而惡性腹水在婦科腫瘤中多發(fā)，即多為子宮疾病，TCT取材更加科學(xué)合理，檢查結(jié)果更加清晰準(zhǔn)確，且損傷小、陽性率高，可重復(fù)進(jìn)行檢查，是當(dāng)前進(jìn)行宮頸病變篩查的主要手段[8]。對于肺癌引起的惡性胸水，聯(lián)合運(yùn)用液基細(xì)胞學(xué)和細(xì)胞塊免疫組化檢測較單一檢測方法對肺癌診斷具有更高的靈敏度和準(zhǔn)確性，利于肺癌早期診斷的進(jìn)行[9]。通過痰液標(biāo)本檢測肺癌細(xì)胞，液基細(xì)胞學(xué)要好于傳統(tǒng)涂片法，具有明顯的優(yōu)越性；兩者聯(lián)用可提高肺癌的檢出率，值得臨床大力推廣[10]。

綜上所述，液基細(xì)胞學(xué)檢查法相比于傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢查法制片滿意度高，患病細(xì)胞檢出率也高，優(yōu)勢明顯。在惡性胸腹水鑒別診斷結(jié)果的臨床應(yīng)用方面已得到確認(rèn)，值得臨床大力推廣。