C-erbB-2、p53蛋白在遵義地區婦女子宮內膜不同病變組織中的表達的研究

肖欣

子宮內膜癌是女性生殖系統常見的三種惡性腫瘤之一,在發達國家, 其發病率已高居女性生殖道惡性腫瘤之首［1］。近年來, 我國上海等大中城市的子宮內膜癌發病率有逐年上升的趨勢, 且發病年齡漸趨年輕化。目前, 在上海市區,子宮內膜癌發病率已超過宮頸癌, 其中, 以子宮內膜樣腺癌(endometrioid adenocarcinoma, EA)最為常見［2］。而有關遵義地區婦女子宮內膜樣腺癌的發生率, 尚未見相關報告。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集本院2006年1月～2016年12月刮宮或手術切除經病理科確診的標本100例, 按照組織學分級分為Ⅰ級38例, Ⅱ級 41例, Ⅲ級 21例, 上述標本經過 10%福爾馬林液固定, 常規脫水 , 石蠟包埋 , 連續切片 4 μm厚為標準, 蘇木精-伊紅染色法(HE)染色, 并進行重新閱片明確診斷。選取同期正常子宮內膜、增生性病變、子宮內膜上皮內瘤變 (endometrial intraepithelial neoplasia, EIN) 各 20 例作為對照。

1.2 試劑 鼠抗人單克隆抗體C-erbB-2、鼠抗人單克隆抗體p53、免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司, 工作濃度分別為1∶100、1∶150.

1.3 方法 將存檔的石蠟塊4 μm厚標準連續切片, 行 HE染色和免疫組化染色。免疫組化實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作：石蠟切片脫蠟至水后, 蒸餾水沖洗, 3%過氧化氫溶液封閉(10 min), 抗原修復(p53采用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液高壓修復, C-erbB-2采用pH 9.0 EDTA 抗原修復液微波修復), 磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗, 加一抗 , 濕盒 4℃冰箱過夜 , PBS 沖洗 , 滴加二抗 (室溫 30 min), PBS 沖洗 , 用 DAB顯色 (鏡下控制 ), 蘇木素復染 , 酒精脫水 , 二甲苯透明 , 封片。一抗的工作濃度為1∶100, 二抗為即用型。用PBS代替一抗作陰性對照, 用預試驗中已知的陽性片作陽性對照。

1.4 染色結果判定標準 C-erbB-2的陽性信號主要定位于細胞膜, p53蛋白的陽性信號主要定位于細胞核。細胞出現棕黃色顆粒、黃色顆粒或棕褐色顆粒為陽性, 評分標準如下：①著色強度：無色為0分, 淡黃色為 1分, 棕黃色為2分, 棕褐色為 3分；②計數標準：無陽性細胞為0分, 陽性細胞≤25%為1分, 陽性細胞26%～50%為2分, 陽性細胞51%～75%為3分, 陽性細胞＞75%為4分, 以①②兩項相加的結果作為綜合評分：0分為 (-), 1～3分為 (±), 4～5 分為 (+),6～7 分為 (++), 其中 (+)和 (++)判為陽性。

1.5 統計學方法 采用SPSS23.0統計學軟件對數據進行處理。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 C-erbB-2、p53在子宮內膜不同病變組織中陽性表達情況比較 C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內膜組織中陽性表達率分別為5.00%、0, 在增生性病變組織中陽性表達率分別為10.00%、15.00%, 在EIN組織中陽性表達率分別為60.00%、45.00%, 在EA組織中陽性表達率分別為50.00%、59.00%；C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內膜組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病變組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, 差異均具有統計學意義(P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內膜組織中陽性表達率與在增生性病變組織中比較, 在EIN組織中陽性表達率與在EA組織中比較, 差異均無統計學意義 (P＞0.05)。見表 1, 圖 1, 圖 2。

2.2 C-erbB-2和p53在不同EA組織學分級中陽性表達情況比較 不同EA組織學分級中C-erbB-2、p53蛋白的陽性表達率比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表1 C-erbB-2、p53在子宮內膜不同病變組織中陽性表達情況比較(n,%)

圖1 EA腫瘤細胞膜表達C-erbB-2, Elivision法×400

圖2 EA腫瘤細胞核表達p53 Elivision法×400

表2 C-erbB-2和p53在不同EA組織學分級中陽性表達情況比較(n,%)

3 討論

C-erbB-2是表皮生長因子受體家族成員之一, 定位于染色體17q21, 編碼相對分子量185 kD的絡氨酸蛋白。在許多種惡性腫瘤組織中存在C-erbB-2基因擴增及蛋白的過度表達, 許多研究［3］顯示, 腫瘤組織內存在 C-erbB-2過度表達和基因擴增時, 更容易發生轉移和復發, 而且預后不佳。人類p53基因定位于染色體17p13, 是一種轉錄因子 , 轉錄 2.8 kD的mRNA, 編碼蛋白質為p53, p53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的基因, 通過生長抑制、誘導細胞凋亡、促進細胞分化達到抑制腫瘤的作用。該基因突變、失活在腫瘤生長與浸潤過程中具有重要作用［4］。

本研究結果顯示, C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內膜組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病變組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, 差異均具有統計學意義 (P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內膜組織中陽性表達率與在增生性病變組織中比較, 在EIN組織中陽性表達率與在EA組織中比較, 差異均無統計學意義(P＞0.05)。提示兩種基因蛋白的陽性表達參與了EA的發生發展。

本組100例EA中, C-erbB-2的陽性表達率隨組織學分級的升高而逐漸降低, 而p53的陽性表達率則隨組織學分級的升高而逐漸升高, 但不同EA組織學分級中C-erbB-2、p53蛋白的陽性表達率比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。提示兩種基因蛋白的陽性表達與惡性程度無關, 但C-erbB-2可能在EA發生的起始階段發揮一定的作用, 是EA發生的早期事件；一旦出現p53基因的突變, 則腫瘤可能向更高的惡性程度發展。

總之, 聯合檢測C-erbB-2和p53可能成為臨床診治子宮內膜樣腺癌的重要參考依據。