高效液相色譜法在抗生素類藥物殘留中的應用

李翠萍

【摘 要】 抗生素藥物殘留危害人體健康，因此，需要一種有效的檢測技術來控制其殘留量，高效液相色譜法作為一種先進高效的檢測技術，被用于抗生素殘留檢測中，本文對高效液相色譜法和抗生素類藥物作以概述，且簡單介紹了高效液相色譜法在抗生素藥物殘留中的應用。

【關鍵詞】 高效液相色譜法；抗生素；藥物殘留；應用

【中圖分類號】R155.5 【文獻標志碼】

A 【文章編號】1005-0019（2018）14-057-01

抗生素類藥物被廣泛用于醫療、畜牧、水產養殖等行業，然而大部分抗生素以原形排出體外，進入環境中，污染水體和土壤，進而造成藥物殘留，進入人體產生蓄積，危害人體健康。通常用于檢測分析抗生素類藥物的方法主要有微生物法和化學分析法等，但是這兩種方法專一性比較差，而高效液相色譜法存在很多優勢：如高效、高速、操作簡單、靈敏度高等，因此，高效液相色譜法被廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測分析[1]。

1 高效液相色譜法概述

高效液相色譜法，簡稱HPLC，是以經典液相色譜法為基礎，引入氣相色譜理論，從而發展起來的一種現代化的分析方法。這種分析技術發展十分迅速，短短三十幾年時間，應用已經十分廣泛。高效液相色譜法適合分離分析熱穩定性差、高沸點、相對分子量較大以及有生理活性的物質，如核酸、表面活性劑、人體代謝產物、肽類、高聚物、藥物、稠環芳烴、殺蟲劑等。和氣相色譜法相比，高效液相色譜法樣品無需氣化，不受物質揮發性限制。有數據表明：可以用高效液相色譜法分析的化合物占70～80%，而用氣相色譜法分析的化合物僅占20%。高效液相色譜法具有高效、高壓、高速且高靈敏度等優點，因此已被廣泛用于對藥物的分析檢測。

2 抗生素類藥物概述

抗生素類藥物是指用于殺滅細菌或者抑制細菌生長的藥物，又名“抗細菌藥”、“抗細菌劑”。現已廣泛應用于臨床，其種類繁多，比如四環素類、β-內酰胺類、大環內酯類、氨基糖苷類、磺胺類、喹諾酮類、多肽類、林可霉素類及其他類抗生素。

2.1 大環內酯類

大環內酯類抗生素是由鏈霉菌產生的一種廣譜抗生素，在動物治療以及飼料添加劑中應用廣泛，常見的有紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素等。如若過量使用會導致藥物殘留，長期使用造成蓄積，從而產生不良反應：①胃腸道反應；②肝毒性；③心臟毒性；④變態反應等。目前，我國已經規定了禽肉及蛋品中大環內酯類抗生素的殘留限量，比如紅霉素的殘留限量為150μg /kg。

2.2 氯霉素類

氯霉素類抗生素是從委內瑞拉鏈霉菌中分離提取的一種高效廣譜抗生素。在控制和治療動物傳染性疾病方面發揮了重要作用，但是氯霉素有很大的毒副作用：①骨髓造血障礙，如粒細胞和血小板減少，嚴重者導致再生障礙性貧血等；②灰嬰綜合征，故新生兒禁用；③損害神經系統，如視神經炎等；④消化道反應；⑤過敏反應。長期使用會導致藥物殘留，因此，在食用動物的飼養及治療中，我國已經明令禁止使用氯霉素，并且規定動物性食品以及動物可食組織中氯霉素均不得檢出。

2.3 四環素類

四環素類抗生素是一種常見的廣譜抗菌素，其成本低、抗菌效果好、報酬高，因而被廣泛用于養殖業，常見的有四環素、米諾環素、金霉素、土霉素等。目前，四環素類抗生素在獸藥中居于首位。雖然抗菌效果比較好，但副作用比較大，不良反應較多，比如①胃腸道反應；②肝毒性；③腎毒性；④影響牙齒和骨骼發育⑤局部刺激；⑥過敏反應等。

2.4 其他類抗生素

除上述抗生素外，還有其他抗生素類如氨基糖苷類、喹諾酮類、磺胺類等，也可用來預防和治療疾病。但是，同樣的道理，如果過量使用這些抗生素類藥物，也會造成殘留，產生蓄積，進而危害人體健康。如氨基糖苷類存在耳毒性、腎毒性、神經肌肉麻痹和變態反應等不良反應；氟喹諾酮類會導致光敏反應、胃腸道反應及結晶尿等；磺胺類抗生素[2]會導致過敏反應、腎毒性、影響造血系統等。

3 高效液相色譜法在抗生素類藥物殘留檢測中的應用

張科明等[3]采用液相色譜/質譜法對豬肉中包括磺胺類、喹諾酮類、四環素類等抗生素類藥物在內的多類獸藥殘留進行快速測定。結果表明：35種獸藥的檢出限為0.01-1.01μg/kg，定量限為0.04-3.37 μg/kg，在1.0-50.0μg/L 濃度范圍內呈現良好線性關系，相關系數r>0.996，回收率介于71.8%-113.5%之間，相對標準偏差為0.6%-9.8%。說明此方法靈敏度高、凈化效果好、操作簡單，可以定性及定量檢測分析豬肉中獸藥殘留。劉健明等[4]采用固相萃取/超高壓液相色譜/質譜法檢測水中4 種四環素類抗生素，發現4 種抗生素呈現良好的線性關系，相關系數r>0.999，四環素的加標回收率為101.8%-106.0%，土霉素的加標回收率107.5%-116.0%，金霉素的加標回收率105.0%-106.0%，強力霉素的加標回收率85.7%-92.3%，土霉素、四環素、強力霉素、金霉素的最低檢測限分別為： 0.12 ng/L、 0.52ng/L、0.15ng/L、0.88ng/L。說明該方法可以快速、準確檢測水體中四環素類抗生素。

王敏娟等[5]利用超高效液相色譜/質譜法對雞蛋中21 種四環素類和喹諾酮類抗生素殘留進行同時測定，結果表明：在2 μg/kg-100 μg/kg 濃度范圍內，21種四環素類和喹諾酮類藥物呈現良好的線性關系，相關系數 r > 0.9940，檢出限為0.5 μg/kg-2.0 μg/kg，加標回收率為79.5%-93.9%，相對標準偏差小于 10%。表明該方法可以用于檢測雞蛋中喹諾酮類、四環素類抗生素藥物殘留量。劉暢[6]采用超高效液相色譜/質譜法檢測蔬菜中20種磺胺類抗生素殘留。結果表明：20種磺胺類獸藥在0.5-100 μg/L濃度范圍內線性關系良好，相關系數均r>0.99，回收率為67.4%-116.6%，相對標準偏差為0.1%-12.8% 。說明該方法可以同時檢測蔬菜中獸藥殘留。

劉文靜[7]采用高效液相色譜法對乳品飲料中4種四環素類藥物進行檢測，發現4 種四環素類藥物的檢出限為2.0μg/kg-5.0μg/kg，在0.10μg/mL-1.00μg/mL 濃度范圍內，呈現良好的線性關系，相關系數r2 大于0.994，定量限介于6.0μg/kg-15.0μg/kg之間，4種四環素類抗生素的加標回收率達到77.6%-90.6%。程家興等[8]利用超高效液相色譜/質譜法對養魚河水中的抗生素進行檢測。發現的加標回收率達到61.0%-98.4%，15 種抗生素的檢出限達到0.01-0.3 ng /L，相對標準偏差為4.6%-14.0%，15 種抗生素呈現良好線性關系，相關系數r大于0. 990。曹慧等[9]采用超高效液相色譜/質譜技術對牛奶中青霉素類藥物殘留進行檢測。發現10種青霉素藥物的定量限為0.1-10.0μg/kg，回收率達到72.0%-110%，10種青霉素藥物呈現良好線性關系，相關系數r>0.99，相對標準偏差為1.83%-9.33%。說明該方法適用于牛奶中青霉素類抗生素殘留的檢測。

4 展望

高效液相色譜法已經廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測，但是，仍存在不足之處。隨著科技不斷創新發展，高效液相色譜技術將會和其他先進技術聯用，使藥物分析水平無論是分析速度、檢測質量還是檢測靈敏度方面，都將邁上一個新臺階。

參考文獻

[1] 張律，岳亞軍，賴少陽，等·高效液相色譜-串聯質譜法測定生活飲用水中11種抗生素[J]·食品安全質量檢測學報，2017，6（6）：2204-2210.

[2] 吳曉蓮，包艷萍，向壘，等.固相萃取-高效液相色譜-串聯質譜法同時測定蔬菜中8種磺胺類抗生素[J].環境化學，2013，32（6）：1038-1044.

[3] 張科明，梁飛燕，鄧明，等.QuEChERS 結合液相色譜-串聯質譜法快速測定豬肉中多類獸藥殘留[J].色譜，2016，34（9）：860～867.

[4] 劉健明，喬晉，陳明，等.固相萃取- 超高壓液相色譜- 串聯質譜測定水中4 種四環素類抗生素[J].城鎮供水. 2018（2） ：44-47.

[5] 王敏娟，胡佳薇，田麗，等.21 種喹諾酮及四環素類抗生素殘留[J].中國衛生檢驗雜志. 2017， 27（4）：473-476.

[6] 劉暢.蔬菜中二十種磺胺類抗生素殘留的QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法檢測[J].黑龍江農業科學，2018（6）：101-105.

[7] 劉文靜.高效液相色譜法檢測乳品飲料中四環素類抗生素[J].食品研究與開發.2016，37（21）：133-137.

[8] 程家興，趙起越，李令軍，等.固相萃取/超高效液相色譜-質譜法篩查及檢測養魚河水中抗生素[J]. 分析測試學報，2018，37（3）： 275-281.

[9] 曹慧，陳小珍，朱巖，等.多壁碳納米管凈化-超高效液相色譜-串聯質譜技術同時測定牛奶中青霉素類藥物殘留[J].質譜學報，2015，36（1）：23-28.