白細(xì)胞CD35和CD11b表達(dá)在診斷細(xì)菌感染中的價(jià)值

王維維， 郝 軍， 袁向亮， 章黎華， 鄭培明， 費(fèi)奇力， 奚 迪， 沈立松

（1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200092；2.威海市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 威海 264400）

細(xì)菌感染是常見的就診原因，也是臨床疾病常見的并發(fā)癥之一。感染后期可以引起敗血癥、膿毒血癥、器官衰竭等嚴(yán)重后果，甚至死亡。為早期干預(yù)治療，指導(dǎo)抗菌藥物的使用，細(xì)菌感染的早期快速、準(zhǔn)確診斷尤為重要。目前，細(xì)菌培養(yǎng)是診斷細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但細(xì)菌培養(yǎng)耗時(shí)較長(zhǎng)，而且培養(yǎng)結(jié)果與樣本取材關(guān)系密切。診斷感染的常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)有白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）等，但這些指標(biāo)的特異性和敏感性都有待提高。因此，臨床亟需一種可以特異且敏感地鑒別細(xì)菌感染的標(biāo)志物或方法。補(bǔ)體受體（complement receptor，CR）1即CD35，可以促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬顆粒和免疫復(fù)合物等[1-2]。CR3即CD11b，又稱CD18，介導(dǎo)細(xì)胞黏附和調(diào)理吞噬，在炎癥過程中參與吞噬細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附[1-2]。CD35和CD11b在靜止期的中性粒細(xì)胞中僅微弱表達(dá)，發(fā)生感染后，中性粒細(xì)胞會(huì)釋放大量CD35和CD11b到細(xì)胞表面[3-4]。因此，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)快速定量檢測(cè)白細(xì)胞CD35和CD11b的表達(dá)，以期能實(shí)現(xiàn)感染的快速診斷。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年5月—2016年2月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院感染疑似患者100例，另選取同期上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院健康體檢者40名。采集所有對(duì)象肝素抗凝外周血4 mL，2 h內(nèi)完成檢測(cè)。查詢感染疑似患者的血培養(yǎng)和臨床綜合診斷并進(jìn)行比對(duì)，排除非感染患者，排除伴隨病毒感染的患者，剩余39例（男22例，女17例，年齡14～84歲）作為細(xì)菌感染組。40名健康體檢者排除血常規(guī)和免疫指標(biāo)等異常者，剩余23名（男13名，女10名，年齡18～76歲）作為正常對(duì)照組。

1.2 方法

熒光抗體鼠抗人CD35-FITC、鼠抗人CD11b-PE及鼠抗人CD45-Pe-Cy5均購自美國(guó)Beckman-Coulter公司。取以上抗體各5 μL至流式專用試管內(nèi)，加入外周血50 μL，避光孵育10 min，加入BD Lysing細(xì)胞裂解液（美國(guó)BD公司）1 mL，裂解紅細(xì)胞10 min，采用BD canto Ⅱ流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)外周血白細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）的CD35和CD11b平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensity，MFI）。分別計(jì)算細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組中性粒細(xì)胞CD35 MFI /淋巴細(xì)胞CD35 MFI比值（簡(jiǎn)稱CD35比值）、中性粒細(xì)胞CD11b MFI/淋巴細(xì)胞CD11b MFI比值（簡(jiǎn)稱CD11b比值），并按公式[感染指數(shù)=中性粒細(xì)胞MFI2/（淋巴細(xì)胞MFI×單核細(xì)胞MFI）]計(jì)算CD35感染指數(shù)和CD11b感染指數(shù)。同時(shí)檢測(cè)CD64 MFI并計(jì)算CD64比值及CD64感染指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 5.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)診斷細(xì)菌感染的價(jià)值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌感染組與正常對(duì)照組白細(xì)胞CD35、CD11b和CD64 MFI的比較

細(xì)菌感染組淋巴細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均低于正常對(duì)照組（P＜0.000 1、P＜0.01、P＜0.000 1），而中性粒細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均高于正常對(duì)照組（P＜0.000 1、P＜0.000 1、P＜0.01）；細(xì)菌感染組單核細(xì)胞CD11b和CD64的MFI均高于正常對(duì)照組（P＜0.000 1、P＜0.001），而2個(gè)組之間單核細(xì)胞CD35 MFI差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1～表3。

表1 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組淋巴細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表1 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組淋巴細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

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表2 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組中性粒細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表2 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組中性粒細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

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表3 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組單核細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

表3 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組單核細(xì)胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比較

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2.2 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組白細(xì)胞CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

細(xì)菌感染組CD35比值、CD11b比值及CD64比值均明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.000 1）。見表4。

表4 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

表4 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比較

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2.3 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)和CD64感染指數(shù)的比較

細(xì)菌感染組CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)及CD64感染指數(shù)均明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.000 1）。見表5。

表5 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)和CD64感染指數(shù)的比較

表5 細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)和CD64感染指數(shù)的比較

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2.4 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細(xì)菌感染的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細(xì)菌感染的曲線下面積（area under curve，AUC）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表6、圖1。

2.5 CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)、CD64感染指數(shù)診斷細(xì)菌感染的ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，CD11b感染指數(shù)診斷細(xì)菌感染的AUC大于CD64感染指數(shù)（P＜0.05），CD35感染指數(shù)與CD64感染指數(shù)之間AUC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表7、圖2。

表6 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細(xì)菌感染的ROC曲線參數(shù)

圖1 CD35比值、CD11b比值和CD64比值診斷細(xì)菌感染的ROC曲線

表7 CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)、CD64感染指數(shù)診斷細(xì)菌感染的ROC曲線參數(shù)

圖2 CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)、CD64感染指數(shù)診斷細(xì)菌感染的ROC曲線

3 討論

補(bǔ)體是人和脊椎動(dòng)物血清與組織中的一組不耐熱、經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，并非單一成分，而是由30多種活性成分組成，包含補(bǔ)體及其調(diào)節(jié)因子和相關(guān)膜蛋白以及CR，故稱為補(bǔ)體系統(tǒng)，其廣泛參與了機(jī)體微生物防御反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)等[5]。CR是指細(xì)胞表面能與補(bǔ)體成分或補(bǔ)體片段特異性結(jié)合的糖蛋白分子，按其功能可以分為3類，其中CR1（CD35）和CR3（CD116）都屬于膜結(jié)合C3片段的受體[6]。CR1和CR3表達(dá)于中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞的表面，參與細(xì)胞的吞噬、黏附等[2，6-7]。

CD35和CD11b在正常情況下只弱表達(dá)于中性粒細(xì)胞表面。當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，在一些炎癥因子和趨化因子等的影響下，CR高表達(dá)于中性粒細(xì)胞表面[8]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白細(xì)胞CD35 MFI和CD11b MFI。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，細(xì)菌感染組CD35和CD11b在中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上呈明顯高表達(dá)，而在淋巴細(xì)胞呈低表達(dá)；細(xì)菌感染組CD35比值、CD11b比值、CD64比值、CD35感染指數(shù)、CD11b感染指數(shù)和CD64感染指數(shù)均明顯升高。

目前，臨床應(yīng)用較廣泛的判斷細(xì)菌感染的指標(biāo)是中性粒細(xì)胞CD64[9]，可作為新生兒膿毒血癥的診斷指標(biāo)[10]，也可以作為院內(nèi)感染的快速檢測(cè)指標(biāo)[11]，亦可作為CRP等感染指標(biāo)的補(bǔ)充[12]。目前，已有學(xué)者在探索CD64的即時(shí)檢驗(yàn)（point-of-care testing，POCT）方法[13]。這也證實(shí)了CD64對(duì)細(xì)菌感染具有較高的診斷價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，CD11b感染指數(shù)診斷細(xì)菌感染的AUC大于CD64感染指數(shù)（P＜0.05），即CD11b感染指數(shù)的診斷性能優(yōu)于CD64感染指數(shù)。因此，CD11b可以作為診斷細(xì)菌感染的良好指標(biāo)。但由于本研究最終入選的樣本量較少，因此得出的結(jié)論還需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。