生化試劑交叉污染對血清鎂測定結果的影響

李廣權， 周衛東， 鐘培英

（三六三醫院檢驗科，四川 成都 610041）

全自動生化分析儀隨著使用年限的延長，由于清洗結構老化引起的攜帶污染也隨之增加。我們在最近的工作中發現本實驗室的東芝TBA120全自動生化分析儀（簡稱東芝TBA120）檢測鎂離子（magnesian ion，Mg2+）的室內質控在控，但部分常規樣本檢測結果降低，單獨復測又恢復正常。這種檢測結果的隨機性一般由儀器的交叉污染導致[1-2]。由于很多生化試劑，如葡萄糖（glucose，Glu）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、甘油三酯（triglyceride，TG）、二氧化碳（carbon dioxide，CO2）、總膽汁酸（total bile acid，TBA）等成分中均含有Mg2+，如何解決引起Mg2+結果假性增高已有報道[3]，但未見由交叉污染導致Mg2+結果假性降低的報道。因此，本研究評估了不同實驗方案篩查Mg2+負干擾的效果差異。

1 材料和方法

1.1 樣本

取加樣順序位于Mg2+項目前的各項目試劑1及試劑2各1 mL備用。取當天檢測完畢的10份（每份約1 mL）無明顯黃疸、脂血、溶血的血清樣本充分混合，制成新鮮混合血清。

1.2 儀器與試劑

儀器為東芝TBA120（日本東芝公司）及日立7600-010全自動生化分析儀（簡稱日立7600，日本日立公司）。丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT；速率法）、天門冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST；速率法）、γ-谷氨酰基轉移酶（gammaglutamyltransferase，GGT；L-γ-谷氨酰-3-羧基-對硝基苯胺底物法）、總膽紅素（total bilirubin，TB；釩酸鹽氧化法）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBil；釩酸鹽氧化法）試劑購自日本和光株式會社，Mg2+試劑（二甲苯胺藍法）購自瑞士羅氏公司，總蛋白（total protein，TP）試劑（雙縮脲法）購自北京九強公司，白蛋白（albumin，Alb）試劑（溴甲酚綠法）購自四川邁克公司。生化質控血清（批號897UN、697UE）購自英國朗道公司。

1.3 方法

1.3.1 試劑中Mg2+的檢測 在保證所有項目質控在控，2臺儀器檢測項目加樣順序相同的條件下，將加樣順序位于Mg2+項目前的各項目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil）試劑1及試劑2分別作為樣本在2臺儀器上檢測Mg2+，每份樣本檢測10次，篩查可能對Mg2+檢測造成干擾的試劑[4]。

1.3.2 新鮮混合血清Mg2+檢測 分別在2臺儀器上單獨測定10次新鮮混合血清的Mg2+水平，以此作為對照。再將混合血清平均分成7份，將加樣順序位于Mg2+項目前的各項目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil）逐一與Mg2+項目組合，每個組合測定1份混合血清，先測定疑似干擾項目，再測Mg2+，每份混合血清在2臺儀器上各重復測定10次，記錄Mg2+結果，篩查可能對Mg2+檢測造成干擾的試劑。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。符合正態分布的計量資料采用表示，組間比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 疑似干擾項目試劑Mg2+結果

除TP試劑中檢出Mg2+外，其他項目（ALT、AST、GGT、Alb、TB、DBil）試劑中未檢出Mg2+。東芝TBA120和日立7600檢測TP試劑中的Mg2+結果分別為（3.79±0.16）、（3.85±0.16）mmol/L，二者差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 混合血清單獨檢測Mg2+與先檢測疑似干擾項目再測定Mg2+的結果比較

東芝TBA120檢測混合血清Mg2+水平與日立7600比較差異無統計學意義（P＞0.05）。先測TP、TB、DBil，再測Mg2+，東芝TBA120的Mg2+結果與對照及日立7600比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。日立7600先測疑似干擾項目（ALT、AST、GGT、TP、Alb、TB、DBil），再測Mg2+，其檢測結果與對照差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 東芝TBA120和日立7600單獨檢測Mg2+與先檢測疑似干擾項目再測定Mg2+的結果比較（mmol/L，）

表1 東芝TBA120和日立7600單獨檢測Mg2+與先檢測疑似干擾項目再測定Mg2+的結果比較（mmol/L，）

注：與對照比較，*P＜0.01；與日立7600比較，#P＜0.01

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3 討論

本研究采用2個不同的檢測系統排查Mg2+的干擾源，在確保加樣順序一致的情況下，一方面可以避免單個檢測系統可能存在的隨機誤差，保證篩查出的交叉污染源準確可靠；另一方面還可發現不同檢測系統抗交叉污染性能的差異。本研究將混合血清分成多份來篩查干擾項目，首先排除了樣本針攜帶污染[5-6]。本研究結果顯示，當懷疑Mg2+項目存在試劑間交叉污染時，將疑似干擾項目試劑作為樣本檢測Mg2+的篩查方法，適合發現試劑中含有Mg2+的項目，但無法排查對Mg2+檢測有負干擾的項目。本研究結果表明TP試劑對Mg2+檢測有正干擾，可能與TP試劑中含有Mg2+有關[7]。采用聯合疑似干擾項目檢測混合血清Mg2+的篩查方法，可同時發現對Mg2+有正干擾和負干擾的項目，即待測樣本中含有一定量的Mg2+更利于篩查對Mg2+有負干擾的項目。本研究結果顯示TB與DBil均對Mg2+存在負干擾，主要原因可能是采用釩酸鹽氧化法的TB及DBil的試劑2中均含有乙二胺四乙酸二鈉（ethylenediaminetetraacetic acid-Na2，EDTA-Na2）。 EDTA-Na2是一種常見的絡合劑，易與鈣、鎂形成螯合物。當先檢測TB或DBil項目再檢測Mg2+項目時，由于儀器試劑針的清洗能力下降，殘留在試劑2試劑針上的EDTA-Na2由試劑針攜帶進入Mg2+項目的檢測反應中，與樣本中的部分Mg2+生成螯合物，使Mg2+的測定結果降低[8]。

綜上所述，通過檢測疑似干擾項目試劑Mg2+的篩查方法，可發現對Mg2+的正干擾源，采用2個檢測系統測定Mg2+結合先測定疑似干擾項目再測定混合血清Mg2+的實驗方案可快速、準確地篩查出對Mg2+的正、負干擾源及發現不同檢測系統抗交叉污染性能的差異。