FA160型糞便自動分析儀檢測糞便隱血的性能評價

張春瑩， 黃 茜， 謝 恒， 熊 明， 粟 軍

（四川大學華西醫院實驗醫學科，四川 成都 610041）

糞便隱血試驗（fecal occult blood test，FOBT）可檢測出糞便中微量的血紅蛋白，有助于消化道出血及消化道腫瘤的早期診斷[1]。目前，FOBT在實驗室多采用手工加樣，人工判讀結果。雖然手工操作簡單，但主觀性強，難以實現檢測的標準化和規范化。隨著實驗室自動化程度的不斷提高，糞便檢測從手工檢測發展到儀器檢測是必然趨勢。糞便自動分析儀通過規范操作流程，對標本進行定量稀釋，在相同的反應時間內自動判定隱血結果，盡量使整個操作過程標準化。本研究擬評價FA160型糞便自動分析儀（簡稱FA160）檢測糞便潛血的效能。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

FA160（四川沃文特生物技術有限公司）及配套卡型便潛血檢測試劑（膠體金法）（簡稱W試劑）。艾博生物醫藥（杭州）有限公司條形便潛血檢測試劑（膠體金法）（簡稱A試劑）。

采用FA160及配套W試劑進行自動加樣、自動判讀結果稱為儀器法。單獨采用W試劑、A試劑分別進行手工取樣、人工判讀結果稱為手工法。

1.2 標本

取新鮮健康人全血1份，用于制備已知濃度的血紅蛋白（hemoglobin，Hb）母液，用樣本稀釋液將Hb母液稀釋成20種理論濃度：3 200、2 000、1 600、800、400、200、100、51.2、25.6、12.8、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0 μg/mL。

隨機收集四川大學華西醫院住院患者232份糞便標本，分別采用儀器法和手工法進行FOBT。

從實驗室信息系統中統計分析2015年和2016年FOBT陽性檢出率。

1.3 方法

1.3.1 儀器法與手工法的最低檢測限和檢測范圍 采用儀器法和手工法分別檢測已配制的糞混懸液。儀器法嚴格按儀器說明書進行操作。手工法嚴格按《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）的相關要求進行操作。

1.3.2 儀器法攜帶污染試驗 將上述20種不同濃度的Hb稀釋液與糞便混勻，制備成混懸液，采用FA160檢測，在每個濃度混懸液檢測后加入稀釋液空白管進行平行檢測，以判斷是否有攜帶污染。

1.3.3 FOBT 分別采用手工法和儀器法檢測232份臨床糞便標本。（1）手工法：取新鮮糞便標本，手工采集火柴頭大小糞便于稀釋杯內，加0.5 mL稀釋液混勻，分別采用A試劑和W試劑檢測糞便潛血，10 min內根據比色卡人工判讀結果；（2）儀器法：取同一份新鮮糞便標本，用采便勺采集一平勺大小糞便標本于采集管內，按儀器操作說明書進行操作，由FA160自動稀釋、自動加樣，4 min后儀器自動判讀結果。對2種方法檢測結果不一致的樣本重新取樣進行雙試劑復檢，10 min內根據比色卡人工觀察結果。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件進行統計分析。對結果一致性進行Kappa檢驗，并用McNemar檢驗觀察2種方法檢測結果有無差異。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 儀器法與手工法的最低檢測限和檢測范圍

儀器法檢測Hb的最低檢測限為0.1 μg/mL。當糞便標本中Hb≥0.1 μg/mL時，檢測結果為弱陽性或陽性；當糞便標本中Hb＜0.1 μg/mL時，檢測結果為陰性；當標本中Hb＞2 000 μg/mL時，由于Hb抗原過量造成后帶效應，檢測結果為假陰性。因此，儀器法的檢測范圍為0.1～2 000.0 μg/mL。手工法與儀器法的結果一致。見表1。

表1 儀器法和手工法Hb的最低檢測限和檢測范圍

2.2 儀器法攜帶污染試驗

采用FA160檢測20種不同濃度的Hb糞便混懸液，在每個濃度混懸液后加入稀釋液空白管并進行檢測。結果顯示稀釋液空白管的隱血結果均為陰性，因此無攜帶污染。

2.3 手工法不同試劑FOBT結果的比較

同時采用W試劑和A試劑檢測232份糞便標本。W試劑共檢出41份FOBT陽性標本，陽性率為17.6%；A試劑共檢出33份FOBT陽性標本，陽性率為14.2%。2種試劑檢測不一致標本8份，W試劑為弱陽性，而A試劑為陰性，雙試劑復檢均呈弱陽性或陽性，W試劑陽性檢出率稍高，2種試劑檢測結果總符合率為96.55%。2種試劑陽性檢出率一致性較好（Kappa=0.87），但W試劑陽性率高于A試劑（P=0.008）。見表2。

表2 手工法不同試劑FOBT結果的比較

2.4 儀器法與手工法FOBT結果的比較

同時采用儀器法與手工法檢測232份糞便標本。儀器法共檢測出48份FOBT陽性標本，陽性率為20.7%，稍高于手工法，總符合率為93.53%。儀器法與W試劑手工法的一致性較好（Kappa=0.85），2種方法FOBT的陽性檢出率差異無統計學意義（P＞0.05）。有2份標本雖然同樣使用W試劑，但儀器法檢測結果為陰性，手工法檢測結果為弱陽性，推測可能原因是標本量較少，儀器采樣稀釋倍數較大，使得標本中的Hb濃度較低而未被檢測出。儀器法與A試劑手工法的一致性較好（Kappa= 0.78），但2種方法FOBT的陽性檢出率差異有統計學意義（P=0.000）。見表3。

表3 儀器法與手工法FOBT結果的比較

2.5 2015年和2016年臨床標本FOBT結果分析

2015年采用手工法A試劑進行FOBT，2016年采用儀器法進行FOBT。2015年與2016年的FOBT陽性率差異無統計學意義（χ2=1.0，P＞0.05）。

表4 2015年和2016年FOBT結果的比較[例（%）]

3 討論

消化道出血是消化道疾病常見和主要癥狀之一，FOBT是臨床診斷消化道出血性疾病、篩查消化道腫瘤有效實用的手段之一。美國臨床化學學會[2]和中華醫學會檢驗分會[1]均推薦FOBT作為消化道出血和結直腸癌篩查指標。免疫法FOBT是目前我國結直腸癌篩查的最適合和有效的篩查手段[3]。免疫法FOBT具有簡單、快速，以及較高的敏感性和特異性[4-5]，抗干擾能力強等特點。

目前，由于糞便標本的特殊性，FOBT仍沿用幾十年來一直使用的手工法，生物安全性低，易交叉污染，主觀判斷誤差大，檢測速度慢，影響工作效率。儀器法的檢測原理與手工法相同，但可使操作過程簡單、試驗過程和工作環境更潔凈衛生，儀器自動判讀結果，使檢測結果具有可比性。

本研究結果顯示，儀器法檢測Hb的最低檢測限為0.1 μg/mL，檢測范圍為0.1～2 000.0 μg/ mL，與手工法一致。攜帶污染試驗顯示儀器法無攜帶污染。在檢測臨床糞便標本時，儀器法陽性率高于手工法，原因可能是：手工采樣量較?。ɑ鸩耦^大小，約10～50 mg），而儀器采集管取樣量大（一平勺約0.3～0.5 g），因此采集到病變標本的可能性更大，陽性檢出率高，降低了漏檢風險。但儀器法也會受到采樣制約，在本研究中，有2份標本雖然同樣使用W試劑，但儀器法檢測結果為陰性，而手工法為弱陽性，推測原因可能是儀器采樣量少于要求量，稀釋倍數相對較大，使得標本中的Hb濃度較低而未被檢出。另一種常見的假陰性結果為患者消化道大出血時，糞便中Hb濃度過高，呈柏油樣便，免疫膠體金法檢測因后帶現象易出現假陰性，解決辦法是充分稀釋便樣后再檢測[6-7]。本研究結果顯示，2015年采用手工法，2016年采用儀器法，但2年之間FOBT的陽性檢出率差異無統計學意義（P＞0.05），說明儀器法檢測糞便隱血的效能與手工法基本一致，但儀器法檢測更方便快速，符合生物安全性的要求。

綜上所述，FA160檢測糞便隱血的敏感性、特異性均較高，陽性檢出率高于手工法，可降低漏檢的風險，適宜在臨床實驗室推廣使用。