百香果莖段培養技術探究

牛俊樂 黃斌政 潘彩娟 蘇仕林 晉文金

摘 要：以紫果百香果幼嫩莖段作為試驗材料，MS培養基作為基礎培養基，進行外植體的誘導和培養，探究外植體適宜的滅菌方法，初代、繼代及生根培養過程中適宜的激素種類及濃度。結果表明，75%的酒精滅菌30s+0.1%的升汞滅菌12min滅菌效果最好；初代培養以2.5mg/L的6-BA在芽的誘導中效果最好；繼代培養以1.0mg/L的6-BA+0.3mg/L的IBA適宜芽的增殖且利于壯苗；生根培養以1/2 MS培養基為基礎培養基，加入0.1mg/L的NAA+0.1mg/L的IBA形成的苗健壯，生根率高達100%。

關鍵詞：百香果；組織培養；激素誘導

中圖分類號 Q943.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）15-0024-03

百香果，又名愛情果，學名：西番蓮（拉丁文名：Passiflora edulis Sims），包括黃色百香果、紫色百香果、紫紅色百香果，屬西番蓮科西番蓮屬的草質藤本植物。百香果富含人體所需的17種氨基酸、多種維生素和類胡蘿卜素以及各種微量元素，可溶性固形物15%～16%，總酸量3.8%～4.0%，甜酸適中，素有“果汁之王”的美稱[1]。

百香果主要栽培地為廣西、廣東和福建等地，其繁殖方法主要有3種：一是用種子直接播種繁殖；二是用蔓條扦插繁殖；三是種子播種苗再嫁接高產無病毒母本。嫁接苗雖然穩產，但成本高；常年的種子繁殖，延長了勞作時間，增加不必要的成本；無選擇的進行扦插壓條繁殖，加快了品種的退化，且病害加劇；另外，扦插苗的壽命短于實生苗、分株苗、嫁接苗；扦插移栽苗的根系普遍較弱、生根淺，抗逆性弱，在移栽種植過程中，需要投入大量的人力和物力[2-3]。百香果的經濟壽命為8～10年，作為經濟作物在于穩產的同時還要有較長的經濟壽命。而通過組織培養，可以在不受植物體其它部分干擾下研究被培養部分的生長和分化的規律，并且可以利用各種培養條件影響它們的生長和分化，以解決理論上和生產上的問題。

本研究通過對百香果的組織培養方法進行探究，目的是在短時間內培育出健康易成活的高質量的百香果種植苗，為百香果快繁提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 供試材料為健壯紫果百香果嫩枝，采摘于百色市森林公園園圃內。采摘的外植體修剪感長度2cm左右有腋芽的莖段，備用。

1.2 培養條件 溫度：（25±1）℃；光照度：2000lx、12h/d。

1.3 試驗方法

1.3.1 外植體的滅菌 將外植體放入燒杯內，洗去污漬，加入適量洗衣粉，浸泡3～10min；用雙層紗布封住燒杯口，用自來水流水沖洗1h后置于超凈工作臺內；用75%濃度的酒精滅菌10、20、30、40、50s，無菌水沖洗3次，再用0.05、0.1、0.15、0.2、0.25%濃度的升汞滅菌10min；無菌水沖洗3次[4]，接種，培養25～30d，分析結果，選出合適的酒精滅菌時間、升汞滅菌濃度組合，對選出的不同升汞滅菌濃度，依次滅菌6、7、8、9、10、11、12、13min，挑選出最佳滅菌時間。

1.3.2 初代培養 在超凈工作臺上將準備好的外植體接種到加入了濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/L的KT和6-BA以及MS培養基中，25～30d后觀察結果，記錄分析。

1.3.3 繼代培養 在初代培養后，以MS+0.5、1.0、1.5、2.0mg/L配合6-BA，0.1、0.2、0.3、0.4mg/L的IBA進行繼代培養，接入無菌芽，培養25～30d后，記錄分析。

1.3.4 生根誘導培養 挑選健康、粗壯、長勢均勻長度2～3cm的增殖芽，將嫩芽從基部切下，接入0.05、0.1、0.15、0.2mg/L的NAA配合0.05、0.1、0.2mg/L的IBA的MS、1/2MS的培養基中培養進行壯苗生根培養，培養25～30d進行結果統計分析。

2 結果與分析

2.1 外植體滅菌處理 由表1可知，隨著酒精滅菌時間的增加，外植體的污染率也隨著降低，增加升汞濃度的同時，外植體的污染率也隨著降低，成活率隨著升高。但是，隨著酒精滅菌時間增加，升汞濃度增加，外植體的成活率會隨著降低，當酒精滅菌時間到50s，升汞濃度達到0.2%、0.25%時，外植體無污染，但外植體發黃、褐化死亡非常嚴重。結合表2可知：紫果百香果外植體的滅菌以75%的酒精30s+0.15%濃度的升汞滅菌12min效果最好。

2.2 初代芽誘導 由表3可知，外植體出芽率的高低受細胞分裂素濃度的影響，濃度低時，出芽率明顯偏低，誘導效果不明顯；隨著濃度的提高，出芽率明顯增加，但超過一定濃度后，芽的誘導率會呈下降趨勢，并伴隨著愈傷組織的形成。KT誘導出的芽顏色淡黃，弱小，不均勻。加入2.5mg/L的6-BA，誘導芽發生的效果最好，出芽率高，芽均勻健壯。

2.3 繼代培養 從表4可以看出，高濃度的6-BA則會抑制芽的的增殖，隨著6-BA的激素濃度量的遞減，芽的增殖明顯增加；6-BA濃度為1.0mg/L時，芽的增殖率最高；當6-BA的素濃度過低時，芽的誘導不均勻，芽出現兩極分化，芽的長勢比較弱；相同6-BA濃度下，加入濃度為0.3mg/L的IBA后，芽的增殖率和長勢可以得到明顯的改善，形成粗壯健康的芽體系。因此，繼代培養以1.0mg/L的6-BA配合0.3mg/L IBA的效果最佳。

2.4 生根培養 從表5可以看出，芽的生根受NAA濃度的影響，隨著NAA濃度的降低，根的誘導率增加，但濃度過低時，誘導效果會變差。相同NAA濃度下，加入IBA可以增強植株的長勢，當加入0.1mg/L的IBA時，植株長勢最好。對比MS、1/2MS培養基中植株的長勢，1/2MS培養基中植株的長勢要遠遠優于MS培養基。由此可知，在1/2MS培養基中加入0.1mg/L的NAA配合0.1mg/L的IBA，利于芽生根的誘導，同時能夠起到很好的壯苗作用。

3 結論

研究結果表明，外植體在洗衣粉液中浸泡3～10min，經自來水沖洗1h，再用75%的酒精滅菌30s，0.15%的升汞滅菌12min，在不影響成活率的前提下，可以起到有效的滅菌效果。初代培養中，加入了2.5mg/L 6-BA，誘導芽的發生效果最好，出芽率高，芽均勻健壯；繼代培養過程中，培養基內加入1.0mg/L 6-BA配合0.3mg/L IBA，利于芽的增殖，芽長勢均勻、健壯。生根培養中，以1/2MS培養基作為基礎培養基，加入0.1mg/L NAA配合0.1mg/L IBA，利于芽生根的誘導，誘導率高達100%。

參考文獻

[1]張小平.百香果種植技術[J].農村實用技術，2014（5）：20-21.

[2]楊冬業，張麗珍，徐淑慶.百香果組織培養及植株再生[J].北方園藝，201（3）：125-127.

[3]楊冬業，張麗珍.百香果的扦插種植研究[J].北方園藝，2015，9：38-40.

[4]蔡蕊，徐民澤，段浩楠，等.紫色甘薯試管苗穩定高效快繁技術研究[J].廣東農業科學，2012（22）：16-18.

（責編：張宏民）