黃楊葉中黃酮多糖和多酚含量及其抗氧化活性

楊潔 曹旭蓉 林佳麗 吳春萍 趙二勞

摘 要：以大葉黃楊葉為原料，以微波輔助提取黃楊葉中黃酮和多糖，以超聲波輔助提取黃楊葉中多酚，分別測定其含量，并采用清除DPPH·法評價(jià)其抗氧化活性。結(jié)果表明：大葉黃楊葉中黃酮含量為31.10mg/g；多糖含量為37.85mg/g；而多酚含量為18.81mg/g。大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚清除DPPH·的IC50分別為5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL，則其抗氧化能力的強(qiáng)弱順序?yàn)椋憾喾?黃酮>多糖。大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量較高，均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，具有開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：大葉黃楊葉；抗氧化性；黃酮；多糖；多酚

中圖分類號：TS202.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20180732001

我國地大物博，有極其豐富的植物資源，且大多具有藥理價(jià)值，有效開發(fā)應(yīng)用這些植物資源具有重要的意義。大葉黃楊（Euonyus japonicus），又名“冬青衛(wèi)矛”，為衛(wèi)矛屬常綠灌木或小喬木，是我國許多城市中常見的綠籬樹種[1]，栽培甚為普遍，資源豐富。我國《本草綱目》中記載，黃楊具有清熱活血、行氣解毒以及祛濕通絡(luò)等藥理活性[2]。現(xiàn)代研究表明，大葉黃楊葉中含有黃酮類成分，是其主要功能成分之一[3]。目前有關(guān)大葉黃楊葉中活性成分的研究較少。本試驗(yàn)提取測定大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量，并采用清除DPPH·法評價(jià)其抗氧化活性，為合理利用大黃楊資源，充分發(fā)揮其經(jīng)濟(jì)價(jià)值提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

材料：黃楊葉為大黃楊葉，2017年10月采集于忻州師范學(xué)院校區(qū)。自來水洗凈后，恒溫烘箱中45℃下烘干，藥材粉碎機(jī)粉碎，過60目篩保存?zhèn)溆谩?/p>

試劑：DPPH·購自美國Sigma公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；其余無水乙醇、葡萄糖、沒食子酸、苯酚、碳酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉，以及福林酚等試劑，均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器

主要儀器見表1。

2 試驗(yàn)方法

2.1 黃楊葉預(yù)處理

將粉碎的黃楊葉粉按1：15加入石油醚進(jìn)行脫脂12h后，抽濾，濾渣置于50℃恒溫干燥箱中烘干，備用。

2.2 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚的提取

2.2.1 黃楊葉中黃酮的提取

精密稱取經(jīng)預(yù)處理的黃楊葉粉1.0g，參考文獻(xiàn)[4]的方法，稍作改動，以體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇為提取劑，在料液比為1：25（g：mL）、微波功率為390W的條件下，提取10min，提取液抽濾，收集濾液，用去離子水定容到100mL容量瓶中，得到黃楊葉黃酮提取液。

2.2.2 黃楊葉中多糖的提取

精密稱取經(jīng)預(yù)處理的黃楊葉粉1.0g，參考文獻(xiàn)[5]的方法，稍作改動，以去離子水為提取劑，微波功率455W，料液比1：30（g：mL），微波提取8min，提取次數(shù)為2次。抽濾后合并濾液，并用去離子水定容到100mL容量瓶中，得到黃楊葉多糖提取液。

2.2.3 黃楊葉中多酚的提取

精密稱取經(jīng)預(yù)處理的黃楊葉粉1.0g，參考文獻(xiàn)[6]的方法，稍作改動， 70%的乙醇為提取劑，超聲功率320W，料液比1：25（g：mL），在50℃下提取30min，提取液抽濾，用去離子水定容到100mL，得到黃楊葉多酚提取液。

2.3 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量的測定

2.3.1 黃楊葉中黃酮含量測定

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對照品，采用硝酸鋁比色法對黃楊葉黃酮進(jìn)行測定。配制濃度為0.4mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，參考文獻(xiàn)[7]方法，測定并繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密移取1.0 mL黃酮提取液于10 mL比色管中測定其吸光度，并由回歸方程計(jì)算黃楊葉中黃酮含量。

2.3.2 黃楊葉中多糖含量的測定

以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)對照品，采用硫酸-苯酚法對黃楊葉中多糖進(jìn)行測定。配制濃度為0.24 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，參考文獻(xiàn)[5]的方法，測定并繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密移取0.5mL多糖提取液于10mL比色管中測定其吸光度，并由回歸方程計(jì)算黃楊葉中多糖含量。

2.3.3 黃楊葉中多酚含量的測定

以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)對照品，采用福林酚法對黃楊葉中多酚進(jìn)行測定。配制濃度為0.1 mg/mL的沒食子酸對照品溶液，參考文獻(xiàn)[6]的方法，測定并繪制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密移取0.5mL多酚提取液于10mL比色管中測定其吸光度，并由回歸方程計(jì)算黃楊葉中多酚含量。

2.4 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚抗氧化活性測定

本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[7]采用清除DPPH·法評價(jià)黃楊葉黃酮、多糖和多酚的抗氧化活性。準(zhǔn)確移取質(zhì)量濃度為0.10 mg/mL的DPPH·溶液2.0mL，置于10mL比色管中。再加入一定量的黃酮提取液，然后用去離子定容到5mL，搖勻，避光放置30min，在517nm最大波長下，分別測定其吸光度。按照公式：清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100，計(jì)算其對DPPH·的清除率。其中：A0為只加DPPH·溶液的吸光度；A1為加DPPH·溶液和黃酮提取液的吸光度；A2為只加黃酮提取液的吸光度。

按同樣方法分別測定多糖、多酚對DPPH·的清除率。

3 結(jié)果與分析

3.1 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量

按照試驗(yàn)方法，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：A=10.533c-0.0041，R2=0.9994，線性范圍為0 ～ 0.072mg/mL；

得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：A=35.048c-0.0478，R2=0.9992，線性范圍為 0 ～ 0.0288mg/mL；得沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A=55.768c+0.0149，R2=0.9991，線性范圍為 0 ～ 0.014mg/mL。測得大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量分別為31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g。可見，大葉黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量均較高，且多糖含量>黃酮含量>多酚含量。表明大葉黃楊葉具有開發(fā)價(jià)值。

3.2 黃楊葉中黃酮、多糖和多酚的抗氧化活性

按照試驗(yàn)方法，分別測定黃楊葉中黃酮、多糖和多酚對DPPH·的清除率，結(jié)果見圖1至3。可見，無論是黃酮、多糖還是多酚，隨著濃度的增大，其對DPPH·的清除率也隨之增大，具有明顯的量效關(guān)系。計(jì)算知黃楊葉中黃酮清除DPPH·的IC50為5.45μg/mL；黃楊葉中多糖清除DPPH·的IC50為133.46μg/mL；黃楊葉中多酚清除DPPH·的IC50為2.91μg/mL。表明黃楊葉中黃酮、多糖和多酚均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，且多酚的抗氧化活性最強(qiáng)。

4 結(jié)論

黃楊葉中黃酮、多糖和多酚含量分別為31.10mg/g、37.85mg/g和18.81mg/g。上述3種成分清除DPPH·的IC50值分別為：5.45μg/mL、133.46μg/mL和2.91μg/mL。結(jié)果表明黃楊葉中具有開發(fā)研究價(jià)值，值得進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

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[2]洪軍，劉俊紅，管玉周.超聲波輔助提取大葉黃楊總黃酮的工藝及其抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技，2014，35（13）：266-270.

[3]張雪輝，唐蕊.大葉黃楊不同生長期葉片中類黃酮含量的測定[J].邢臺學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，32（02）：183-184.

[4]楊喜花，陳敏，張華珺，等.微波法提取沙棘葉總黃酮的工藝研究[J].中草藥，2006（4）：535-537.

[5]陳義勇，馮燕紅.微波輔助提取銀杏葉多糖工藝及其體外抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2012，33（6）：24-28.

[6]陳樹俊，胡潔，王振文，等.超聲波輔助響應(yīng)面法提取藜麥多酚及抗氧化性研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（11）：1708-1714，1737.

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作者簡介：楊潔（1987-），女，博士，講師，從事天然產(chǎn)物活性成分研究。