3種分子檢測技術(shù)在結(jié)核病實驗室診斷中的應(yīng)用評價

230000安徽省胸科醫(yī)院檢驗科

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的可累及全身多系統(tǒng)多器官的疾病。我國2014年估算發(fā)病人數(shù)93萬，排名世界第3位，是結(jié)核病高負擔(dān)國家之一[1]。目前常規(guī)結(jié)核病實驗室診斷方法是涂片顯微鏡觀察法和固體培養(yǎng)法。本文通過與改良羅氏培養(yǎng)基法的比較，分析TBDNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3種分子診斷技術(shù)對痰標本的檢測情況，探討此3種結(jié)合檢測方法對結(jié)核病診斷的臨床應(yīng)用價值。

資料與方法

2015年1月-2016年10月收治初診疑似肺結(jié)核患者180例，男102例，女78例；年齡15～78歲，平均50.2歲。(1)納入結(jié)核病組嚴格遵守世界衛(wèi)生組織(WTO)《肺結(jié)核診斷指南》診斷標準：①3次痰涂片陰性，X線胸片肺部影像學(xué)檢查顯示有活動性肺結(jié)核征象且伴有咳嗽、咳痰、咯血等肺結(jié)核可疑癥狀；②3次痰涂片結(jié)果中有≥1次抗酸涂片陽性；③未開展過抗結(jié)核藥治療。(2)排除標準：①嚴重心臟、肝臟、腎臟疾病、惡性腫瘤等嚴重系統(tǒng)性疾病患者；②妊娠或哺乳期患者；③HIV患者。另選擇性別、年齡匹配的同期入院非肺結(jié)核患者150例作對照組，男82例，女68例；年齡17～75歲，平均47.8歲。

方法：對所有的痰液標本同時進行痰分枝桿菌培養(yǎng)法、TB-DNA PCR、TBRNA PCR和Xpert MTB/RIF進行檢測。

統(tǒng)計學(xué)分析；采用SPSS 19.0軟件進行χ2檢驗，對不同檢測方法的檢測結(jié)果進行比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

3種檢測方法對疑似肺結(jié)核患者180例和非肺結(jié)核患者150例痰液標本檢測結(jié)果比較：改良羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法、TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF檢測疑似肺結(jié)核患者180例痰液標本的陽性率分別為30.6%、45.6%、40.5%、47.4%。其中 TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3種分子學(xué)檢測方法檢測陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，3者均高于改良羅氏培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。分別對非肺結(jié)核患者150例的痰液標本檢測，TBDNA PCR和Xpert MTB/RIF各檢出2例和1例，見表1。

討 論

近年來，分子生物學(xué)的快速發(fā)展和推廣能夠較好地彌補傳統(tǒng)鑒定結(jié)核分枝桿菌方法耗時長、陽性率低等缺陷[2]。TB-DNA方法檢測靈敏度高、速度快，但只能判斷是否有結(jié)核桿菌，不能鑒別死菌和活菌。TB-RNA以病原菌內(nèi)的特異16SrRNA為靶點，僅存在活菌中且半衰期短，能檢測出活動性感染[3-4]，可以作為活動性肺結(jié)核及治療效果的監(jiān)測手段。Xpert MTB/RIF檢測法是美國Cepheid公司研發(fā)的全自動一體化實時定量核酸擴增技術(shù)，能夠在2 h內(nèi)同時檢測結(jié)核病和利福平耐藥的檢測方法，但價格昂貴。

表1 3種檢測方法對180例疑似肺結(jié)核患者和150例非肺結(jié)核患者痰液標本檢測結(jié)果比較

本實驗數(shù)據(jù)表明，對疑似肺結(jié)核患者痰標本進行TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3種以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測方法檢測陽性率明顯高于傳統(tǒng)改良羅氏培養(yǎng)法[5]，這與之前文獻資料報告相一致。

總之，與傳統(tǒng)的抗酸染色涂片和改良羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)法相比，TB-DNA PCR、TB-RNA PCR和Xpert MTB/RIF 3種以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測方法更安全、高效、準確[6]，為結(jié)核病的早診斷、早治療提供了新依據(jù)，在結(jié)核病的診斷中具有廣闊的前景和應(yīng)用價值。