氨基末端激酶參與胃癌順鉑耐藥機制的研究

張 雯

（蘇州市吳江區第一人民醫院消化內科，江蘇蘇州 215200）

本研究旨在探討氨基末端激酶參與胃癌順鉑化療耐藥機制的具體情況，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2018年1月本院收治的122 例胃鏡患者作為研究對象，所有患者均未接受放化療治療，均有完整資料。其中，男性70例，女性52例，年齡34～81歲，平均年齡（52.3±3.4）歲。同期選取35例手術切除的正常胃組織標本作為對照組。標本均用10%的甲醛液固定，應用石蠟包埋。

1.2 方法

（1）采用四氮唑炎還原法（MTT）檢測藥物的敏感性。將 SGC7901、SGC7901-DDP、SGC7901加 SP600125、SGC7901-DDP加SP600125所屬細胞分別制成單細胞懸液，將其接種到96孔培養板上，設置DDP、ADM兩種藥物5 個梯度濃度，分別為：0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μg/L，各個濃度均設3個復孔，應用MTT法來計算4種類型的DDP、ADM半數抑制濃度。

（2） 制作組織芯片。選用所需病例存檔蠟塊，用病理學專家依據蘇木精—伊紅染色切片觀察切片形態學情況，確定出最具有代表性的病變部位，同時還需要避開出血壞死部位及纖維化區域，做好標記，之后借助組織微陣列儀來制作組織芯片蠟塊[2]。借助組織微陣列儀在蠟塊中打孔，在選用的癌組織、正常胃組織蠟塊標記部位進行穿刺，將所有的標本都植于空白蠟塊中，行連續切片，貼敷在1%額多聚賴氨酸上。

（3）免疫組化檢驗及判定結果。應用免疫組化染色方法進行檢測，結果用陽性細胞占據百分比來表示。具體是在低倍的光鏡下隨機選擇10個視野，各個視野中計數100個細胞，獲得細胞均值，其中P-糖蛋白（P-gp）以胞質/胞膜出現棕黃色顆粒為陽性染色；p-氨基末端激酶（p-JNK）以胞質/胞核出現棕黃色的顆粒為陽性染色。陽性細胞的數量若≥10%為陽性表達，陽性細胞＜10%為陰性表達。

1.3 統計學分析

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（±s）表示，行t檢驗；計數資料用（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細胞藥物敏感性變化情況比較

MTT耐藥情況顯示，應用SP600125后耐藥株對DDP、ADM敏感性增加，顯示p-JNK抑制導致化療藥物對敏感株及耐藥株生長抑制均有增強作用，見表1。

表1 MTT檢測細胞藥物敏感性情況比較（±s）

表1 MTT檢測細胞藥物敏感性情況比較（±s）

類別 DDP ADM SGC7901 0.33±0.03 0.31±0.02 SGC7901加SP600125 0.12±0.02 0.21±0.07 t 41.36 7.89 P 0.00 0.01 SGC7901-DDP 8.82±0.12 1.52±0.13 SGC7901-DDP加SP600125 1.62±0.18 0.62±0.21 t 7.86 23.36 P 0.01 0.00

2.2 P-gp與p-JNK蛋白表達在胃癌與正常胃組織中的表達與相關性

P-gp在胃癌組織中陽性表達率為53.28%（65/122），正常的胃組織中陽性表達率為22.86%（8/35），兩者比較差異有統計學意義（χ2=10.118，P＜0.05）。p-JNK在胃癌組織中陽性表達率為45.08%（55/122），正常胃組織中的陽性表達率為11.43%（4/35），兩者比較差異有統計學意義（χ2=13.131，P ＜ 0.05）。

P-gp和p-JNK蛋白共同陽性患者53例，P-gp和p-JNK蛋白共同陰性患者48例，P-gp陽性p-JNK蛋白陰性患者37例，P-gp陰性p-JNK陽性患者29例，相關系數r=0.221（P=0.003）。

3 討論與結論

氨基末端激酶屬細胞中重要信號傳導成員，信號通路可以被應激因素與細胞因子激活，雙特異性激酶JNK為JNK上游激活酶，可以活化JNK轉錄因子，使得c-fos結合至靶基因啟動子區，調控靶基因轉錄[3-6]。當前，對于JNK在耐藥機制中的作用尚且存在爭議，耐藥白血病細胞菌株中JNK持續激活的過度表達同耐藥性呈現正相關的關系，有效抑制JNK的活性，降低多藥耐性相關蛋白的表達，以增強細胞對藥物敏感性[7]。

胃癌治療上，一般應用順鉑化療，主要是鉑類藥物能夠增強JNK持續活化與下游因子表達，減少藥物所致凋亡，這樣可以增加小細胞肺癌藥物敏感性[8]。與此同時，持續激活的JNK還可以導致下游c-Jun過度磷酸化，形成轉錄激活因子，JNK參與耐藥雙重性可能由于由細胞類型及條件依賴性特點所致[9-10]。本研究結果顯示，P-gp在胃癌組織中陽性表達率為53.28%（65/122），顯著高于正常的胃組織中陽性表達率22.86%，P-gp在胃癌組織中陽性表達率為53.28%（65/122），顯著高于正常的胃組織中陽性表達率22.86%（8/35），且P-gp和p-JNK在胃癌組織中表達呈正相關。

綜上，JNK通路參與了DDP所致胃癌耐藥，高表達預示化療的效果不佳，抑制通路可成為逆轉耐藥的新靶點。