高效液相色譜法測(cè)定不同基質(zhì)內(nèi)的紐甜含量

劉李婷

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院農(nóng)副食品所，陜西西安 710048）

紐甜是新一代人工合成的二肽類強(qiáng)力甜味劑，其化學(xué)名稱為N-［N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天門冬氨酰］-L-苯丙氨酸-1-甲酯，分子式為C20H30N2O5[1]，是一種新型功能性甜味劑，紐甜的甜度為蔗糖的8 000～12 000倍[2]，是阿斯巴甜的衍生物，其穩(wěn)定性和使用成本均優(yōu)于阿斯巴甜[3]。

目前，國(guó)標(biāo)中GB 5009.247—2016[4]中測(cè)定紐甜方法適用于飲料、蜜餞、糕點(diǎn)、炒貨、醬腌菜、糖果、果醬、果凍、復(fù)合調(diào)味料。試樣需經(jīng)過(guò)混合提取液提取、固相萃取柱提取、水浴氮吹凈化等步驟，過(guò)程較為繁瑣。結(jié)合紐甜的物化性質(zhì)，優(yōu)化提取步驟，形成一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，為日后紐甜的快速測(cè)定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

液體乳、糕點(diǎn)、牛板筋、面包、海鮮醬，均為市售常見樣品。

1.2 試劑與儀器

試劑：乙腈（色譜純）、超純水、乙酸銨（分析純）。

儀器：高效液相色譜儀、超聲波清洗儀、離心機(jī)。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取不同基質(zhì)的樣品5 g左右，加入10 mL超純水，超聲提取10 min，取出后乙腈定容至50 mL，充分搖勻，超聲提取15 min，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)0.45μm有機(jī)濾頭，上機(jī)測(cè)試。

1.4 儀器條件

色譜柱：C18ODS-3（5μm，4.6 mm×250 mm），柱溫40℃，流動(dòng)相0.02 mol/L乙酸銨∶乙腈=65∶35，流速1.0 mL，檢測(cè)波長(zhǎng)218 nm。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.100 0 g紐甜標(biāo)準(zhǔn)品，加水溶解定容至100 mL，此溶液紐甜含量為1.00 mg/mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

分別吸取適量紐甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水制成質(zhì)量質(zhì)量濃度分別為0.2，1.0，5.0，10.0，50.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。以峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制線性回歸曲線，得到如下回歸方程：Y=14 865X+11 116，R2=0.997 4。

紐甜的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 紐甜的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 檢出限

選取不同基質(zhì)樣品分別加標(biāo)進(jìn)行逐級(jí)稀釋，儀器檢測(cè)，可檢出的最小質(zhì)量濃度為該樣品的檢出限，最終得出該試驗(yàn)在5種基質(zhì)條件下可達(dá)到檢出限為0.2 mg/kg。

2.3 精密度

取質(zhì)量濃度為10μg/mL的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，通過(guò)峰面積計(jì)算RSD，取同一基質(zhì)的樣品6份，按上述檢測(cè)方法進(jìn)行紐甜含量測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD值。

測(cè)定方法精密度見表1。

表1 測(cè)定方法精密度

標(biāo)品峰面積的RSD為0.54%。稱取同一紐甜樣品共6份，按上述色譜條件進(jìn)行紐甜含量的測(cè)定，結(jié)果樣品RSD為1.21%。

2.4 樣品檢測(cè)結(jié)果

不同基質(zhì)中紐甜含量見表2。

由表2可知，該檢驗(yàn)方法在5種不同基質(zhì)中回收率為87%～107%，牛板筋、海鮮醬樣品中因油脂含量較高，故回收率相對(duì)較低，在實(shí)際操作中可先去除油脂再進(jìn)行提取檢測(cè)。

紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖2，紐甜樣品的色譜圖見圖3。

紐甜標(biāo)液的出峰時(shí)間為9.512 min，樣品經(jīng)上述方法提取后，樣品峰的峰形良好。

表2 不同基質(zhì)中紐甜含量

圖2 紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

圖3 紐甜樣品的色譜圖

3 結(jié)論

紐甜作為新型食品甜味劑廣泛應(yīng)用于各類食品中，但國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法相對(duì)復(fù)雜，建立一種快速檢測(cè)方法，通過(guò)乙腈提取，0.02 mol/L乙酸銨∶乙腈=65∶35流動(dòng)相洗脫，高效液相色譜法檢測(cè)，并通過(guò)5種不同基質(zhì)下的紐甜含量檢測(cè)結(jié)果得出該方法回收率為87%～107%，檢出限為0.2 mg/kg，可作為快速檢測(cè)方法應(yīng)用于日常檢測(cè)中，提高工作效率。