美國(guó)豬偽狂犬病監(jiān)測(cè)程序手冊(cè)（1.3版）—樣本運(yùn)送、提交程序及附件

文│美國(guó)農(nóng)業(yè)部動(dòng)植物衛(wèi)生檢驗(yàn)局獸醫(yī)處

譯校│張淼潔 付雯 翟新驗(yàn)（中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

一、樣本的運(yùn)送

關(guān)于動(dòng)物衛(wèi)生官員收集的樣本，應(yīng)采用以下程序?qū)颖咎峤恢罭AHLN或USDA實(shí)驗(yàn)室。

1.包裝。將貼有標(biāo)簽的樣本管/容器放入透明的帶有吸收劑的生物學(xué)危害品袋（STP—741）中，并密封；將該生物學(xué)危害品放入生物學(xué)危害品袋（STP—740）中，并密封；將白色袋子放入運(yùn)送箱中；在袋子上放置冷凍冰塊；將填寫好的美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)豬監(jiān)測(cè)提交表（若有）放置在泡沫箱蓋子上；密封箱子；將運(yùn)送地址標(biāo)簽貼在箱子上，送至對(duì)該收集樣本進(jìn)行PRV（豬偽狂犬病病毒）檢測(cè)的指定實(shí)驗(yàn)室；將其他需要的運(yùn)送標(biāo)簽貼在箱子上，滿足當(dāng)前的IATA運(yùn)送要求（比如，UN 3373標(biāo)簽等）；由合同承運(yùn)服務(wù)商隔夜送達(dá)；若在周五運(yùn)送，確保在箱子上貼上周六送達(dá)的標(biāo)志。確保實(shí)驗(yàn)室可在周六接收并冷凍運(yùn)送到的物品。（注：運(yùn)送監(jiān)測(cè)樣本至實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人需要滿足生物物質(zhì)運(yùn)送的要求。上述個(gè)人至少應(yīng)熟悉IATA包裝須知。）

2.運(yùn)送至指定的NAHLN實(shí)驗(yàn)室。只能通過承包的隔夜送達(dá)服務(wù)將樣本送至NAHLN實(shí)驗(yàn)室。附件A包括指定的PRV NAHLN實(shí)驗(yàn)室的名單。

二、提交樣本至NAHLN實(shí)驗(yàn)室

VS人員可聯(lián)系VS地區(qū)辦公室獲得一次性的血液采集用品。在可能的情況下，血液樣本應(yīng)用離心機(jī)分離出血清。然后將血清存放在離心管中，同提交表格一起送至NAHLN實(shí)驗(yàn)室或USDA實(shí)驗(yàn)室。提交至NAHLN實(shí)驗(yàn)室的所有血液/血清管都必須擁有獨(dú)立的條形碼。可聯(lián)系NVSL的運(yùn)送部門獲取條形碼。

血液收集和血清提交推薦的物品/設(shè)備：冷卻器；冰袋；血液收集時(shí)可選擇的針；10～15毫升的注射器（頂部帶有盧爾鎖）；10毫升的真空容器；豬監(jiān)測(cè)樣本條形碼標(biāo)簽，WS—聯(lián)系布蘭頓·斯密特獲取條形碼 ，VS—聯(lián)系NVSL獲取條形碼；裝血清的離心管或冷凍管；離心管運(yùn)送容器；封口冷凍袋，用作主要和次要的運(yùn)送容器；紙巾，用作主次運(yùn)送容器之間的吸收性材料；用離心機(jī)分離血清；GPS裝置用于記錄樣本收集的位置；豬保定裝置；提交表格（見附件D）。

在可能的情況下，每個(gè)進(jìn)行PRV檢測(cè)的動(dòng)物至少提供2毫升的清澈、非溶血血清。

三、診斷專家的酌情判斷

執(zhí)業(yè)獸醫(yī)提交至NAHLN實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PRV血清或抗原檢測(cè)（監(jiān)測(cè)流程2和3）的樣本必須滿足最低的信息要求。沒有監(jiān)測(cè)所需的最低信息的樣本不適合進(jìn)行USDA國(guó)家PRV監(jiān)測(cè)計(jì)劃下的PRV檢測(cè)，且不得使用USDA支持的資金進(jìn)行PRV分析。此外，診斷專家需要遵守本文件中列出的采樣標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)于樣本可追蹤性的最低信息要求為：提交樣本的執(zhí)業(yè)獸醫(yī)的信息，包含姓名 、城市 、州 、郵政編碼；動(dòng)物識(shí)別號(hào)；樣本提交日期；生產(chǎn)地信息應(yīng)明確為進(jìn)行采樣而取樣的豬的實(shí)際位置；經(jīng)營(yíng)場(chǎng)所的ID或經(jīng)營(yíng)場(chǎng)所的名稱，必須包括街道、城市、州、郵政編碼。

檢測(cè)的樣本應(yīng)能夠在空間和時(shí)間上代表所有提交的樣本。每次提交樣本中最多檢測(cè)五個(gè)樣本。在執(zhí)業(yè)獸醫(yī)提交至實(shí)驗(yàn)室的每份合格樣本上粘貼NVSL提供的獨(dú)立條形碼。

診斷專家若有關(guān)于樣本檢測(cè)和所需信息的問題，應(yīng)聯(lián)系USDA VS NAHLN的協(xié)調(diào)員。

附件A：指定的NAHLN PRV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的地址和聯(lián)系信息（略）

附件B：州、機(jī)構(gòu)及屠宰場(chǎng)進(jìn)行的PRV監(jiān)測(cè)活動(dòng)

在屠宰場(chǎng)收集母豬—公豬市場(chǎng)屠宰樣本（監(jiān)測(cè)流程6）。屠宰樣本的檢測(cè)將在KS和KY的兩個(gè)聯(lián)邦PRV實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。各州應(yīng)提交所有必要的監(jiān)測(cè)或檢測(cè)樣本至USDA堪薩斯和肯塔基地區(qū)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，以滿足最低常規(guī)監(jiān)測(cè)要求（5%）。

收集用于監(jiān)測(cè)或回溯調(diào)查的血清樣本（除屠宰以外）的監(jiān)管官員應(yīng)將貼有正確的標(biāo)簽和條形碼的樣本送至PRV NAHLN實(shí)驗(yàn)室。各州應(yīng)在提交樣本前聯(lián)系NAHLN實(shí)驗(yàn)室，確定其能在不超過指定樣本檢測(cè)配額的情況下處理樣本，或各州可聯(lián)系其地區(qū)傳染病學(xué)家決定將樣本送至何處（即哪個(gè)NAHLN實(shí)驗(yàn)室）。

為監(jiān)測(cè)流程3“提交至診斷實(shí)驗(yàn)室的豬病例的血清檢測(cè)”而選擇的樣本應(yīng)在時(shí)間和空間上能夠代表提交至NAHLN實(shí)驗(yàn)室的所有樣本。每批提交的樣本中最多檢測(cè)5個(gè)樣本。實(shí)驗(yàn)室將在每個(gè)樣本上使用USDA提供的獨(dú)立條形碼。

各州列出的預(yù)期檢測(cè)的樣本目標(biāo)（略）。

1.野生動(dòng)物處的野豬PRV監(jiān)測(cè)。WS國(guó)家野生動(dòng)物疾病計(jì)劃將在VS官員的幫助下確定PRV采樣的地區(qū)。WS負(fù)責(zé)確定樣本量并根據(jù)已知的各州野豬分布情況分配樣本量。通過WS和VS的聯(lián)合決定，WS生物學(xué)家為PRV監(jiān)測(cè)而收集的樣本將按照WS指導(dǎo)提交至NAHLN實(shí)驗(yàn)室。只有WS提交的樣本適合使用本計(jì)劃中的USDA資金。

2.PRV高風(fēng)險(xiǎn)豬群的監(jiān)測(cè)。AVIC和州獸醫(yī)應(yīng)根據(jù)高風(fēng)險(xiǎn)豬群的血清檢測(cè)流程（監(jiān)測(cè)流程4）列出的標(biāo)準(zhǔn)確定高風(fēng)險(xiǎn)豬群。AVIC/州獸醫(yī)應(yīng)同其地區(qū)的傳染病學(xué)家合作，從高風(fēng)險(xiǎn)中獲取樣本，確定采集樣本的數(shù)量確定最實(shí)用的方法。為了幫助各州確定高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)場(chǎng)的所在地，國(guó)家監(jiān)測(cè)為上述高風(fēng)險(xiǎn)的州提供指南。本表（略）列出有文件記錄的野豬的縣，這些縣也報(bào)告了飼養(yǎng)了超過1000個(gè)豬群及其種豬的密度，可在同地區(qū)傳染病學(xué)家的咨詢下用作各州的抽樣指南。該表不是絕對(duì)的，各州參考或者不參考該表，確定高風(fēng)險(xiǎn)豬所在地區(qū)名單。此外，各州可將其他地區(qū)和豬群視為“高風(fēng)險(xiǎn)”。監(jiān)測(cè)的目標(biāo)是快速確定商業(yè)豬群中的PRV感染。重點(diǎn)在于檢測(cè)接觸野豬的高風(fēng)險(xiǎn)的商業(yè)豬群。此類豬群可能在NSU提供的地區(qū)內(nèi)。由當(dāng)?shù)豓S和地區(qū)官員確定高風(fēng)險(xiǎn)豬群。只有被定義為“高風(fēng)險(xiǎn)”的豬群才能夠使用聯(lián)邦資金支持的高風(fēng)險(xiǎn)豬群檢測(cè)流程（監(jiān)測(cè)流程4）。

表1

表2

表3

附件C：AVIC和州獸醫(yī)辦公室名錄

可通過查閱以下網(wǎng)站找到目前的AVIC辦公室和詳細(xì)的AVIC信息：州動(dòng)物衛(wèi)生辦公室可通過查閱以下網(wǎng)站找到目前的州動(dòng)物衛(wèi)生辦公室和官員的名單：http://www.nasda.org/cms/7195/8617.aspx

附件D：美國(guó)農(nóng)業(yè)部偽狂犬病監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表

數(shù)據(jù)表1，表2是USDA APHIS WS人員使用的例子。只有被授權(quán)的人員才能填寫該表格，填寫需符合WS國(guó)家野生動(dòng)物疾病計(jì)劃要求。以下并非完整的表格，刪除了一部分說明。

執(zhí)行監(jiān)測(cè)或傳染病追蹤活動(dòng)的USDA VS或州人員使用的數(shù)據(jù)表必須包括在樣本內(nèi)，并送至合適的PRV NAHLN實(shí)驗(yàn)室獲得檢測(cè)資格。

提交的所有樣本都必須有獨(dú)立的條形碼。表3、4、5并非完整表格，有部分說明被刪除。

附件E：NAHLN實(shí)驗(yàn)室PRV血液/血清檢測(cè)程序

提示，屠宰監(jiān)測(cè)和移動(dòng)資格，包括展覽（出口/跨州移動(dòng)）的樣本不適用于此檢測(cè)程序。

在對(duì)樣本進(jìn)行PRV檢測(cè)之前，選擇豬血液/血清用于PRV檢測(cè)的NAHLN實(shí)驗(yàn)室需要確保：已提供所需的流行病學(xué)回溯信息；有足夠的血清量；以及血清質(zhì)量好，無細(xì)菌污染或過多的溶血。

若樣本有必要的回溯信息，則應(yīng)分析樣本以確保其符合定量和定性要求。由于樣本由執(zhí)業(yè)獸醫(yī)提交至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行其他檢測(cè)，因此只有在有足夠的血清能進(jìn)行所有必要的檢測(cè)時(shí)才進(jìn)行檢測(cè)。若樣本有足夠的血清進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)（包括PRV），請(qǐng)考慮，如果PRV抗體為疑似/陽性的情況下，必須將樣本轉(zhuǎn)發(fā)至NVSL進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)。因此，每份樣本應(yīng)至少含有2毫升的優(yōu)質(zhì)血清。

實(shí)驗(yàn)室若為了除USDA監(jiān)測(cè)計(jì)劃以外的目的而對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，則應(yīng)按照CFR的要求，遵照生產(chǎn)商推薦的測(cè)試/復(fù)檢程序，并將所有陽性樣本送至NVSL進(jìn)行確認(rèn)。

為USDA監(jiān)測(cè)目的而進(jìn)行血清篩查的實(shí)驗(yàn)室需要按照以下要求處理所有PRV監(jiān)測(cè)血液/血清樣本。

1.查看文件和信息以獲取正確的回溯信息，至少應(yīng)包括豬所在實(shí)際位置（非公司所在地）的郵政編碼或經(jīng)營(yíng)場(chǎng)所標(biāo)識(shí)。

2.觀察樣本是否具備足夠的血清量和質(zhì)量。

3.若樣本適合進(jìn)行檢測(cè)，則在樣本上粘貼USDA提供的條形碼。檢測(cè)樣本：篩查檢測(cè)PRV gB ELISA，或者自動(dòng)乳膠凝集試驗(yàn)（ALA）（實(shí)驗(yàn)室可選擇以上方法之一進(jìn)行初次樣本篩查，但應(yīng)保持一種檢測(cè)方法）。

若篩查檢測(cè)結(jié)果為疑似【在PRV監(jiān)測(cè)中，疑似定義在初次檢測(cè)中及按照生產(chǎn)商建議的程序進(jìn)行復(fù)測(cè)后既非陽性也非陰性（重新測(cè)試）的樣本】或陽性，則應(yīng)在1個(gè)工作日內(nèi)使用PRV g1 ELISA方法重新檢測(cè)樣本。

若g1結(jié)果為疑似或陽性，將已有檢測(cè)結(jié)果的所有相關(guān)信息連同樣品一起提交至NVSL進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)。如果使用的是gB篩選檢測(cè)，由于臨界值會(huì)隨著方法而變化，則提交的信息中應(yīng)包括使用的是哪種檢測(cè)方法。樣本應(yīng)隔夜運(yùn)送到NVSL。

運(yùn)送樣本之前需打電話通報(bào)NVSL代表。在處理樣本后，實(shí)驗(yàn)室將在PRV實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)表上記錄所有信息。

樣本保存標(biāo)準(zhǔn)：若樣本在初次篩查中為陰性，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)程廢棄該樣本；若樣本在初次篩查中為陽性，在二次篩查中為陰性，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室規(guī)程廢棄該樣本；若樣本在初次和二次篩查中均為陽性，應(yīng)將樣本送至NVSL進(jìn)行再次檢測(cè)，并應(yīng)將樣本及同批所有其他樣本至少保留十五天。

表4

表5

USDA監(jiān)測(cè)計(jì)劃中的PRV血液/血清檢測(cè)程序見圖1。

注：從USDA WS提交至實(shí)驗(yàn)室的USDA PRV野豬監(jiān)測(cè)樣本只能進(jìn)行篩查檢測(cè)（PRV gB ELISA或自動(dòng)乳膠凝集）。所有篩查檢測(cè)結(jié)果，包括疑似、陽性和陰性結(jié)果，應(yīng)報(bào)告至USDA WS，國(guó)家野生動(dòng)物疫病計(jì)劃。測(cè)試野豬血清不需要g1 ELISA。此外，野豬的陽性樣本無須提交至NVSL進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)，除非因其他監(jiān)管目的需要進(jìn)行檢測(cè)。

附件F：血清檢測(cè)的95/10采樣程序

該采樣程序?qū)⒂糜谒羞M(jìn)行PRV檢測(cè)的豬群，包括因回溯而檢測(cè)的豬群。95/10采樣程序有95%的概率從流行率至少為10%的豬群中發(fā)現(xiàn)一個(gè)陽性動(dòng)物。 每個(gè)獨(dú)立的豬群（不同地點(diǎn)，同一所有者）應(yīng)作為單獨(dú)的豬群進(jìn)行檢測(cè)。以下為滿足95/10程序需要進(jìn)行檢測(cè)的動(dòng)物數(shù)量：數(shù)量低于100頭的豬群檢測(cè)25頭；數(shù)量在100～200頭的豬群檢測(cè)27頭；數(shù)量在201～999頭的豬群檢測(cè)28頭；數(shù)量在1000頭以上的豬群檢測(cè)29頭。

附件G：PRV通報(bào)和響應(yīng)行動(dòng)

本附件規(guī)定了出現(xiàn)陽性或疑似PRV的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果而產(chǎn)生的通報(bào)和響應(yīng)行動(dòng)。本文件并不取代任何獸醫(yī)處備忘錄或通報(bào)。NAHLN實(shí)驗(yàn)室或NVSL公司報(bào)告的疑似或陽性結(jié)果將啟動(dòng)通報(bào)和響應(yīng)行動(dòng)。NVSL確認(rèn)的PRV陽性結(jié)果預(yù)示著全面響應(yīng)。

1.響應(yīng)行動(dòng)。PRV監(jiān)測(cè)計(jì)劃中檢測(cè)的樣本將由經(jīng)過培訓(xùn)的人員在指定的NAHLN實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行初步篩查。上述人員必須按照指定的程序篩選血清、肌紅蛋白和組織以進(jìn)行PRV監(jiān)測(cè)。若篩查結(jié)果為疑似或陽性，則將由愛荷華州艾姆斯市的NVSL進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)。

若野豬血清在NAHLN實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為陽性或不確定性，應(yīng)將結(jié)果報(bào)告至WS。WS將通過涉及其野生動(dòng)物疾病生物學(xué)家的認(rèn)證溝通程序向VS發(fā)布實(shí)驗(yàn)室結(jié)果。上述樣本無須遞送至NVSL，除非因其他監(jiān)管或研究目的需要。野豬樣本出現(xiàn)PRV陽性不會(huì)啟動(dòng)下述行動(dòng)，根據(jù)當(dāng)?shù)乇O(jiān)管機(jī)構(gòu)和特定州的野豬群體狀況，州機(jī)構(gòu)和WS可能對(duì)野豬的PRV調(diào)查結(jié)果采取不同的對(duì)策。

提交至NAHLN檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的血清（包括肌紅蛋白樣本）或組織的疑似或陽性結(jié)果，不包括常規(guī)的野豬樣本，若NAHLN實(shí)驗(yàn)室認(rèn)定疑似或陽性結(jié)果，則將采取以下行動(dòng)。

A NAHLN實(shí)驗(yàn)室的行動(dòng)。第一，立即通過電話或傳真將結(jié)果匯報(bào)至愛荷華州艾姆斯市的NVSL，按照附件E提交所有樣本至愛荷華州艾姆斯市的NVSL進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)。不得分離樣本。樣本包括所有必要的文件和此前檢測(cè)的結(jié)果；第二，在數(shù)據(jù)表或電子數(shù)據(jù)表中輸入結(jié)果和所需數(shù)據(jù)。

B NVSL的行動(dòng)。第一，從NAHLN實(shí)驗(yàn)室接收的樣本進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)；第二，若結(jié)果為陰性，將檢測(cè)結(jié)果告知提交樣本的實(shí)驗(yàn)室；第三，若結(jié)果為陽性，將檢測(cè)結(jié)果告知提交樣本的實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)室所在州的AVIC、動(dòng)物來源州的AVIC以及地區(qū)傳染病學(xué)家和豬衛(wèi)生計(jì)劃員工。

◎圖1 PRV血液/血清檢測(cè)程序

C NAHLN實(shí)驗(yàn)室所在州、樣本采集州以及豬來源州VS、SAHO的行動(dòng)，僅在NVSL確定樣本為陽性時(shí)進(jìn)行此類行動(dòng)。第一，確保提交樣本相關(guān)的所有文件和任何鑒定材料安全。第二，確定提交樣本的來源。第三，確定涉及動(dòng)物的最后一處已知的居住場(chǎng)所。第四，若樣本采集自屠宰場(chǎng)，則收集最初的回溯信息。第五，同地區(qū)辦公室的人員溝通調(diào)查結(jié)果。第六，遵照“偽狂犬病根除的州—聯(lián)邦—產(chǎn)業(yè)計(jì)劃標(biāo)準(zhǔn)”中的規(guī)定。

D 當(dāng)確定樣本為陽性時(shí)豬群衛(wèi)生項(xiàng)目員工采取的行動(dòng)。第一，告知NCAHEM員工；第二，若有必要，協(xié)助地區(qū)官員獲取所需的信息；第三，檢查從地區(qū)接收的信息。

E 通報(bào)。外部到VS：AVIC確保告知州獸醫(yī)；在合適的情況下，員工或地區(qū)官員將通報(bào)立法和公共事務(wù)部（LPA）去告知產(chǎn)業(yè)和公眾。

注意：如果本節(jié)的部分內(nèi)容不適用或需要修改，則將進(jìn)行適用的修訂。應(yīng)通過電子郵件同豬衛(wèi)生計(jì)劃相關(guān)部門溝通。

2.NAHLN檢測(cè)的疑似或陽性結(jié)果在NVSL檢測(cè)為陰性。若NAHLN實(shí)驗(yàn)室報(bào)告并提交了疑似或陽性結(jié)果，NVSL的檢測(cè)顯示為陰性，則需要將陰性結(jié)果通報(bào)到以前得到NAHLN疑似或陽性結(jié)果通報(bào)的各方。無需要開展進(jìn)一步的調(diào)查行動(dòng)。

3.NVSL陽性結(jié)果的確認(rèn)。若NVSL確認(rèn)陽性結(jié)果，將執(zhí)行本部分C到E中概述的程序。控制和清除感染豬群的PRV的相應(yīng)行動(dòng)將盡快開始。需立即通報(bào)到NAHLN實(shí)驗(yàn)所在州和動(dòng)物所在州的州動(dòng)物衛(wèi)生官員。此外，動(dòng)物衛(wèi)生官員應(yīng)開始執(zhí)行所有必要的措施，如確定疾病的來源，收集所有追溯信息，并啟動(dòng)檢疫以防止疾病蔓延。動(dòng)物衛(wèi)生官員將遵循“偽狂犬病根除州—聯(lián)邦—產(chǎn)業(yè)計(jì)劃標(biāo)準(zhǔn)”中概述的疾病控制和清除方法。

響應(yīng)和溝通行動(dòng)的流程見圖2。

附件H：國(guó)家偽狂犬病監(jiān)測(cè)計(jì)劃

可在網(wǎng)上查閱國(guó)家偽狂犬病監(jiān)測(cè)計(jì)劃。網(wǎng)址為：h t t p://www.aphis.usda.gov/vs/nahss/swine/prv/prv_surveillance_plan_final_draft_04_16_08.pdf

◎圖2 響應(yīng)和溝通行動(dòng)流程圖