環指蛋白181在乳腺浸潤性導管癌中表達及其臨床意義

王 磊 張 珉 王旭光 王翠芳 張 玲

(沈陽醫學院基礎醫學院病理教研室，遼寧 沈陽 110034)

環指蛋白(RN)181又稱HSPC238，屬于RN超家族成員，具有RING型結構域及E3泛素鏈接酶活性。在肝癌、彌漫大B細胞淋巴瘤等多種腫瘤中，RN181可分別通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)/細胞外調節蛋白激酶(ERK)信號通路或泛素化途徑調控腫瘤的進展。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤〔1，2〕，其中以浸潤性導管癌為最常見病理類型，RN181在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及臨床病理意義目前尚無報道。本研究探討RN81在浸潤性導管癌發生、發展過程中發揮的作用及其臨床診斷意義。

1 材料與方法

1.1臨床資料 2015年1月至2015年12月經病理確診的女性乳腺浸潤性導管癌標本79例，另選取36例經病理確診的乳腺增生組織為對照。浸潤性導管癌術前均未行放療、化療及內分泌治療。79例乳腺癌標本中，年齡25～82歲，平均52.8歲，組織學分級參考諾丁漢聯合組織學分級；分子分型：luminalA型〔雌激素受體(ER)+和(或)孕激素受體(PR)+和人表皮生長因子受體(HER)2-〕28例，luminalB型〔ER+和(或)PR+和HER2+〕30例，HER2過表達型(ER-，PR-和HER2+)10例，三陰型(ER-，PR-和HER2-)11例。

1.2試劑 鼠抗人RN181單克隆抗體(購自美國Santa cruz公司)，ElivisionTM Plus即用型免疫組化試劑盒(鼠/兔)、磷酸鹽緩沖液(PBS)、內源性過氧化物酶阻斷劑、動物非免疫血清(羊)等均購自福州邁新生物開發有限公司。

1.3方法 標本均經包埋，制成4 μm厚切片。標本均在同一條件下進行免疫組織化學染色，具體步驟如下：經脫蠟，脫苯，水化后，首先用3%的過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶的活性，高溫高壓修復抗原，然后使用RN181一抗(1∶600)4℃濕盒內孵育過夜，次日按Elivision試劑盒說明書進行染色，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木素復染。PBS代替一抗。

1.4結果判定 免疫組化結果采用雙盲法由兩位病理醫師進行評定。判定標準：每張切片在高倍鏡下隨機選取10個視野(×400)，隨機計數100個細胞。根據染色強度(0，沒有染色；1，淺黃色；2，棕色；3，深棕色)及著色比例0分(陰性著色)；1分(陽性細胞數1%～10%)；2分(陽性細胞數11%～50%)；3分(陽性細胞數51%～80%)；4分(陽性細胞數81%～100%)，兩項計分相乘即為最終得分(0～12分)。得分<6分為低表達，≥6分為高表達。

1.5統計學分析 采用SPSS22.0統計軟件進行χ2檢驗或Fisher確切概率法分析。

2 結 果

2.1免疫組織化學染色結果 RN181的表達主要位于胞質，見圖1。79例乳腺癌組織中36例(46%)低表達，36例乳腺增生組織中30例(83%)高表達；二者差異顯著(P=0.003)。在淋巴結轉移中的表達低于未轉移(P=0.000)，RN181在乳腺浸潤性導管癌中的表達與年齡(P=0.918)、腫瘤直徑(P=0.817)、組織學分級(P=0.150)均無明顯相關性，見表1。

2.2RN181在乳腺癌不同分子分型中的表達及其關系 RN181在各分子分型中的組間表達率存在差異性(P=0.001)，luminalB型中RN181高表達低于其他3種亞型。見表2。

圖1 RN181免疫組織化學染色Elivision法結果(×400)

表1 RN181的表達與臨床病理指標之間的關系〔n(%)〕

表2 RN181的表達與乳腺癌分子分型的關系〔n(%)〕

與luminalA相比：1)P<0.001；與luminalB相比：2)P<0.05

3 討 論

RN181是由人類基因LOC51255編碼的含有153個氨基酸的小分子蛋白，RN家族成員與腫瘤發生密切相關〔3，4〕，具有E3泛素蛋白連接酶活性，并可與血小板整聯蛋白aⅡbβ3的KVGFFKR結構域相結合〔5〕。整聯蛋白相關信號通路與泛素化途徑在多種腫瘤組織中發揮調控作用〔6～8〕，而RN181可能將二者結合在一起共同調控腫瘤進展。現有研究報道RN181在不同腫瘤進展過程中發揮不同作用。在直腸癌的研究中，沉默RN181蛋白可激活MAPK/ERK信號通路促進SW480細胞增殖〔9〕。RN181在肝癌組織中表達低于癌旁，通過抑制ERK/MAPK信號通路抑制肝癌細胞增殖，而干擾肝癌細胞中的RN181后可以解除增殖抑制，提示RN181具有抑制肝細胞癌生長的作用〔10，11〕。Tan等〔12〕發現RN181通過泛素-蛋白酶體途徑與血紅素加氧酶(HMOX)1，核糖體蛋白(RP)S27A，泛素B和金屬硫蛋白(MT)2A這4種蛋白相互作用發揮腫瘤抑制作用〔12〕。RN181作為E3泛素連接酶通過抑制核因子(NF)-κB信號通路抑制彌漫大B細胞淋巴瘤細胞的生長〔13〕，由此可見，RN181在腫瘤的調控中可能發揮抑癌作用，其具體分子機制尚需深入研究。本研究結果提示，RN181在浸潤性導管癌中可能發揮抑癌作用，但其具體分子機制尚需進一步研究。

乳腺癌具有高度異質性〔14～17〕，Peroul等〔18〕最先提出了乳腺癌分子分型的概念，其將乳腺癌分為5種亞型：管腔A型〔luminalA：ER+和(或)PR+和HER2-〕，管腔B型〔luminalB：ER+和(或)PR+和HER2+〕，HER2+型(ER-，PR-和HER2+)，基底樣型(BLBC)及其他。根據分子分型制定乳腺癌局部及全身治療策略十分重要。一方面，乳腺癌的分子分型能充分反映其生物學行為，明確個體分子的特征，為乳腺癌患者判斷預后及個體化治療提供基礎，對于luminal型患者手術治療可提前，內分泌治療是基礎〔19〕。因此尋找luminal型的敏感、特異性指標顯得尤為重要。另一方面，在2011年St.Gallen國際乳腺癌會議上在原有分子分型指標上新加入了KI67，在2013年St.Gallen國際乳腺癌會議上又將KI67的比例進行調整〔20〕。由此可見乳腺癌的分子分型在不斷細化，但目前的分子分型標志物仍然具有局限性，尚不能完全滿足診治需求。本實驗提示RN181在luminalB型中可能為特異性低表達，可能作為新的乳腺癌分子分型特異性標志物，具體分子機制有待進一步研究。