山楂葉總黃酮對心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細胞的影響

邱曉梅 趙曉航 王 斌 馬瑜紅

(南陽醫學高等專科學校臨床醫學系，河南 南陽 473000)

心肌缺血再灌注損傷(MRI)是指心肌缺血后冠狀動脈再通，恢復心肌灌注后引起心肌一系列損傷性反應，其是一個復雜的病理生理過程，這其中血管活性物質和氧自由基發揮重要作用〔1〕。山楂葉總黃酮(HLF)含有豐富的黃酮類物質，對心血管有顯著保護作用，其能擴張冠狀動脈，降低血脂、降低血壓和改善心臟活力和興奮中樞神經系統等作用，有良好的抗氧化作用。本研究觀察HLF對MRI心肌細胞的影響。

1 材料與方法

1.1動物 選擇清潔級大鼠30只，均為雄性，平均體重為(210±20)g，由贛州醫學院實驗動物中心提供，合格證編號為SKXX(滬)2010-0003，均正常飲食，均在24℃下喂養，光照和黑暗交替進行飼養，飼養2 d以適應試驗環境。

1.2藥品和試劑 HLF純度為95%，由山西晉中制藥有限公司提供，試劑試驗盒有超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Na+-K+-ATP酶檢測試劑盒等均由上海建設生物工程有限公司提供。

1.3主要儀器 紫外分光光度計、生理壓力傳感器、動物人工呼吸機、四道生物信號采集處理系統等均由北京航空醫學工程研究所提供。

1.4模型制備 先在大鼠腹腔內注射3%戊巴比妥鈉麻醉，劑量為30 mg/kg，然后固定在木板上，進行氣管切開后用動物人工呼吸機進行機械通氣。呼吸頻率為65～70次/min，分離右側股動脈、靜脈和左側頸總動脈，靜脈注射藥物，動脈監測血壓，右側頸總動脈插管至左心室后通過生理壓力傳感器連接四道生物信號采集處理系統，記錄左心室內壓(LVSP)和左心室內壓最大變化速率(dp/dtmax)，并記錄肢體導聯心電圖。然后在胸骨左緣第2～4肋間隙打開胸腔和心包膜，暴露心臟，在肺動脈右緣平左心耳下緣1～2 mm處，經左冠狀動脈淺層心肌穿一絲線，結扎冠狀動脈左前降支，造成心肌缺血模型。結扎左前降支30 min后讓缺血心肌血流灌注，再灌注90 min后結束試驗。造模成功標志為心電圖Ⅱ導聯ST段抬高或降低。將造模成功的30例大鼠分成2組，每組15只，對照組股靜脈注射生理鹽水0.5 ml/h，觀察組HLF 50 mg/kg，完成后取大鼠心臟，在心尖區域取心肌組織，冷藏備用。

1.5檢測指標 取心尖心肌組織，切碎后應勻漿器制成勻漿，配稱10%勻漿液，轉速3 000 r/min離心15 min，取上層清液，用化學比色法檢測Na+-K+-ATP酶活性。TBA法檢測MDA，黃嘌呤氧化法檢測SOD。再灌注90 min后，用外周靜脈血檢測谷草轉氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)變化。

1.6統計學方法 應用SPSS15.0統計軟件進行t和χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組缺血灌注前后心功能變化比較 兩組ST均明顯抬高，再灌注60～120 min觀察組ST段抬高水平較同時期對照組水平明顯降低，兩組同時期比較差異顯著(P<0.05)；兩組LVSP和±dp/dtmax均逐級下降，但觀察組再灌注60～120 min下降水平較對照組下降更加顯著(P<0.05或P<0.01)；兩組治療后頸動脈收縮壓(SAP)、頸動脈舒張壓(DAP)均進行性下降，但觀察組下降幅度低于對照組，兩組再灌注60～120 min時SAP、DAP差異顯著(P<0.05或P<0.01)，見表1。

表1 兩組缺血灌注前后心功能變化比較

與對照組同時期比較:1)P<0.05,2)P<0.01

2.2兩組試驗后相關指標比較 對照組Na+-K+-ATP酶、MDA較觀察組顯著提高，而在SOD、AST、CK、LDH上較觀察組下降明顯，兩組比較差異顯著(P<0.05)，見表2。

表2 兩組試驗后相關指標比較

3 討 論

心肌缺血會引起心肌靜止張力增加，發展張力低下，心肌收縮功能下降，在本次研究中，LVSP是反映心肌收縮功能指標，其和心肌損傷程度負相關〔2〕。本研究結果顯示，HLF應用后LVSP明顯增大，這說明HLF可明顯減輕心肌缺血程度。ST段移位是電生理學基礎，是正常組織和心肌缺血區之間出現損傷電位差，差值越大，則ST-T段抬高程度越大，因為心肌缺血時心肌中的氧張力降低或無氧代謝加強，出現電位差，故出現ST段抬高〔3,4〕。研究證實，心肌缺血極早期，細胞氧化磷酸化水平減弱，ATP合成減少，造成Na+-K+-ATP酶功能下降，大量的鈉離子內流，鉀離子外流，細胞膜電位下降，產生去極化，從而造成電壓依賴性鈣離子通道開放，造成鈣離子超載，氧自由基增高，激發自由基連鎖反應，故產生更多的損害〔5〕。

SOD是一種金屬蛋白酶，是體內非常重要的抗氧化酶和氧自由基清除劑，能清除超氧陰離子，保護細胞受損，對機體氧化和抗氧化有重要作用〔6〕。而MDA是脂質過氧化反應主要產物，中樞神經系統有大量不飽和脂肪酸，容易產生脂質過氧化反應，生成大量的過氧化物酶(LPO)，故MDA是反映組織自由基含量和自由基引發脂質過氧化反應過程，能間接反映細胞損傷程度〔7〕。本研究結果顯示，MDA水平有所升高，SOD顯著下降，這說明HLF能抑制氧自由基產生，促進其消除，能抑制氧自由基引起的脂質過氧化反應，對心肌缺血再灌注有保護作用。

AST、CK、LDH三種物質是廣泛存在于細胞胞質中，心肌缺血時細胞能量下降，代謝產物增多，細胞損傷和細胞生物膜通透性增加引起細胞胞質酶釋放，灌注時氧自由基和鈣超載造成生物膜進一步損傷，促使AST、CK、LDH大量漏出，以上三種是目前臨床上最常見的心肌損傷的指標〔8,9〕。本研究結果顯示，HLF有保護心肌損傷作用。 綜上所述，HLF對心肌缺血有保護SOD活性，降低MDA含量作用，其原因和減輕細胞鈣超載，阻滯鈣內流，減少膜質脂過氧化有關，而其作用機制可能是HLF能增強內源性氧自由基清除力，減輕脂質過氧化反應，能減輕心肌細胞膜損傷，維持細胞膜通透性，能減輕心肌細胞損傷〔10〕。