大棗果醋的鎮靜、催眠及抗焦慮作用

高佳琪 于澤鵬 劉 聰 朱 闊 劉佳樂 蔣維海 王春梅 孫靖輝 陳建光 李 賀

(北華大學藥學院藥理教研室，吉林 吉林 132013)

研究表明，老年人的失眠發病率為49.9%，有10%～27%的老年人依賴催眠藥維持正常睡眠〔1，2〕。盡管應用催眠藥可暫時性緩解睡眠障礙，但長期應用可導致依賴、作用喪失和藥源性失眠，停藥時還會產生反跳性失眠和夢魘。因此，研發促睡眠功效明確、無明顯不良反應的保健食品已成為人們研究的熱點。尤其是研發藥食同源的保健食品更受到人們青睞。大棗，系鼠李科棗屬植物棗的果實，是家喻戶曉的健康食品。藥王孫思邈曾在《千金方》中寫道“大棗蔥白湯”專治心煩失眠。日本研究報道，從大棗提取物分離到一種黃酮-雙-葡萄糖甙的混合物，藥理實驗證明其具有鎮靜催眠作用〔3，4〕。果醋以其良好的風味、獨特的口感及有效的保健功能已逐漸受到消費者廣泛關注。本研究以大棗果醋為研究對象，觀察其鎮靜、催眠及抗焦慮作用。

1 材料與方法

1.1實驗動物 健康ICR雄性小鼠，體重(20±2)g，由長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK(吉)：2016-0003。小鼠采取分籠飼養，分籠后放于安靜、溫濕度適宜、通風良好的環境中，自由飲水，合理攝食，適應所處環境1 w后開始實驗。

1.2實驗材料與藥品 大棗果醋由北華大學五味子開發及產業化工程研究中心提供；戊巴比妥鈉(批號：090919)為北京化學試劑公司產品；小鼠γ-氨基丁酸(GABA)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒、谷氨酸(Glu)ELISA試劑盒為美國GBD公司產品。

1.3儀器與設備 YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀和小動物行為學系統(成都太盟科技有限公司)；全自動酶標儀(瑞士Tecan集團)。

1.4實驗方法

1.4.1動物分組及處理 將雄性ICR小鼠隨機分為5組，每組10只，空白對照組(灌胃給予蒸餾水)；地西泮組(①自主活動實驗給予小鼠地西泮2 ml/kg；②協同戊巴比妥鈉閾/閾下劑量促睡眠實驗及EMP焦慮小鼠行為學實驗給予小鼠地西泮4 ml/kg)，Jv低劑量組(灌胃給予Jv 2.125 ml/kg)；Jv中劑量組(灌胃Jv 4.250 ml/kg)；Jv高劑量組(灌胃給予Jv 8.500 ml/kg)，各給藥組分別每天給藥灌胃1次，連續給藥7 d。

1.4.2Jv對小鼠自主活動的影響 將各組小鼠于末次灌胃給藥30 min后，分別置于自主活動記錄儀中，適應5 min后開啟自主活動儀，測定5 min內各小鼠自主活動次數和站立次數。

1.4.3Jv協同閾下劑量戊巴比妥鈉對小鼠的影響 末次灌胃給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射37.5 mg/kg的戊巴比妥鈉，觀察并記錄30 min內翻正反射消失1 min以上的實驗小鼠只數。

1.4.4Jv協同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠的影響 于末次灌胃給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射49.5 mg/kg的戊巴比妥鈉，觀察30 min內翻正反射消失1 min以上的實驗小鼠數，觀察并記錄各組小鼠潛伏期及睡眠時間。

1.4.5Jv對高架十字迷宮(EPM)焦慮小鼠行為學的影響 末次給藥30 min后，將小鼠從中央格面向閉合臂放入迷宮。記錄并計算5 min內小鼠進入開放臂次數比例(OE%)，開放臂停留時間比例(OT%)。

1.4.6Jv對小鼠腦組織GABA和Glu含量的影響 各組小鼠連續灌胃給藥7 d，于末次給藥后30 min，處死小鼠，取出腦組織，應用生物素雙抗體夾心ELISA測定腦組織GABA和Glu含量并計算二者比值。

1.5統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行單因素方差分析及t檢驗。

2 結 果

2.1Jv對小鼠自主活動的影響 與空白對照組相比較，地西泮和Jv高劑量組小鼠自主活動和站立次數明顯減少(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2Jv協同閾下劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠只數的影響 與空白對照組(1只)相比較，地西泮(9只)和Jv低、中、高劑量組(4只，5只，5只)均能明顯增加睡眠小鼠只數。

2.3Jv協同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠時間和睡眠潛伏期的影響 與空白對照組相比較，地西泮和Jv高劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，睡眠時間明顯延長(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中、劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.4Jv對EPM焦慮小鼠行為學的影響 與空白對照組比較，Jv中劑量組小鼠OE%明顯升高(P<0.05)；地西泮和Jv高劑量組小鼠OE%、OT%明顯升高(P<0.05或P<0.01)，見表3。

2.5Jv對小鼠腦組織中GABA和Glu含量的影響 與空白對照組比較，Jv高劑量組小鼠腦組織中Glu含量明顯下降，GABA含量和GABA/Glu明顯升高(P<0.05，P<0.01)，Jv中劑量組GABA/Glu明顯升高(P<0.05)，見表4。

表1 大棗果醋對小鼠自主活動的影響次)

與空白對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2 Jv協同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠時間和睡眠潛伏期的影響

表3 Jv對EPM焦慮小鼠OE%和OT%影響

表4 Jv對小鼠腦組織GABA和Glu含量的影響

3 討 論

大棗在現代安神方劑中被廣泛應用，如酸棗仁湯、甘麥大棗湯、黃連阿膠湯、鎮驚定志湯〔5～7〕，但未見大棗果醋鎮靜催眠方向的相關報道，本實驗所用大棗果醋由北華大學五味子開發及產業化工程研究中心經醋酸菌發酵制得，色澤清澈、透明、有光澤，無刺激性氣味，口感協調，甜酸適度。小鼠自主活動實驗是評價中樞神經系統興奮狀態的一項重要指標。大腦皮層興奮性與小鼠自主活動次數呈正相關〔8～10〕。本實驗結果顯示大棗果醋可減少小鼠自主活動次數，提示大棗果醋具有一定的鎮靜作用。

通過觀察受試藥對巴比妥類藥物誘導睡眠的影響，是觀察藥物催眠作用的經典方法〔11，12〕。本實驗結果表明，大棗果醋能有效增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠只數，縮短閾劑量戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠潛伏期、延長睡眠時間，提示Jv具有明顯的催眠作用。

高架十字迷宮是利用動物對新異環境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，是國際通用的抗焦慮實驗方法〔13〕，實驗以OE%及OT%為指標來反映動物的焦慮程度，OT和OE增大則表明藥物具有抗焦慮效應〔14〕。本研究結果表明，大棗果醋可增加小鼠的OT%和OE%，提示其具有一定的抗焦慮作用。GABA作為抑制性神經遞質能結合抗焦慮的腦受體并使之激活，阻止焦慮相關信息抵達大腦中樞，從而達到抗焦慮及鎮靜催眠的效果〔15～17〕。Glu作為興奮性神經遞質的作用是與膜后受體結合，產生興奮性突觸后電位〔18〕。興奮性突觸后電位加大到一定程度時，就導致突觸后神經元產生擴布性興奮，傳到整個突觸后神經元，使機體處于興奮狀態〔19，20〕。本實驗結果表明，大棗果醋可增加小鼠腦組織GABA含量，增加GABA/Glu比值，提示大棗果醋的鎮靜催眠作用與其調節GABA和Glu含量有關。綜上，大棗果醋對小鼠具有鎮靜催眠及抗焦慮作用，該作用可能與其提高腦內GABA含量，降低Glu含量有關。