重組靈芝免疫調節蛋白對衰老模型小鼠的抗衰老作用

劉 凱 劉媛媛 孫 非 任立群

(承德醫學院病理生理學教研室，河北 承德 067000)

1 吉林大學藥學院

重組靈芝免疫調節蛋白(rLZ-8)是通過基因工程方法，利用畢赤酵母表達系統構建酵母表達載體P819-LZ-8，然后轉化到畢赤菌株GS115中表達，最終經發酵和純化所得，其與天然LZ-8具有相同生物活性〔1，2〕。研究顯示〔3～5〕，rLZ-8具有抗腫瘤、抗骨質疏松及免疫調節作用，但有關rLZ-8抗衰老作用尚無報道。鑒于LZ-8抗衰老作用明顯〔6〕，本研究對rLZ-8抗小鼠衰老作用進行研究，以期為rLZ-8的臨床應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1實驗動物 昆明種小鼠，60只，雌雄各半，體重(20±2)g，由吉林大學實驗動物中心提供。

1.2試劑與儀器 D-半乳糖購自美國Sigma公司；rLZ-8由吉林大學鉆智基因工程藥物研究中心提供；DG5031型酶聯免疫檢測儀(華東電子集團醫療裝備有限責任公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、褪黑素(MT)試劑盒均購自南京建成生物試劑有限公司。

1.3衰老小鼠模型的制備及分組 隨機分為5組，即空白對照組、模型組、rLZ-8低、中、高(660、990、1 320 μg/kg)劑量組，每組各12只。各組適應性飼養1 w后，除空白對照組外，其余各組分別皮下注射D-半乳糖(1 g·kg-1·d-1)，連續注射42 d，造模期間，空白對照組皮下注射等體積生理鹽水。成模后，將各組背部(脊柱兩側，肩胛下)區域剃毛(面積均為2 cm×2 cm)，rLZ-8各劑量組分別涂抹給藥，連續涂抹60 d，空白對照組與模型組用純基質涂抹。給藥期間小鼠自由進食和飲水。

1.4組織樣品的制備 末次給藥1 h后，摘眼球取血，常規分離血清，-80℃凍存備用。動物處死后，取給藥部位皮膚，去除皮下脂肪，一部分多聚甲醛固定，另一部分-80℃凍存備用。

1.5統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1rLZ-8對各組血清SOD、CAT、GSH-Px、MT和MDA水平的影響 與空白對照組相比，衰老模型組SOD、CAT、GSH-Px及MT水平均顯著降低(P<0.05)，MDA水平顯著升高(P<0.05)；與衰老模型組相比，rLZ-8高劑量組可顯著提升血清中SOD、CAT、GSH-Px及MT水平，顯著降低MDA水平，中劑量組可顯著增加SOD、MT水平，呈劑量依賴性，見表1。

2.2rLZ-8對各組皮膚勻漿中SOD、CAT、GSH-Px和MDA水平的影響 與空白對照組相比，衰老模型組SOD、CAT及GSH-Px水平均顯著降低，MDA水平顯著升高；與衰老模型組相比，rLZ-8高劑量組可顯著提升皮膚中SOD、CAT、GSH-Px及MT水平，同時降低MDA水平，中劑量可顯著增加GSH-Px水平，顯著降低MDA水平，且呈劑量依賴性，見表2。

表1 各組血清中SOD、CAT、GSH-Px、MT和MDA水平

與空白對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與衰老模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01；下表同

表2 各組皮膚中SOD、CAT、GSH-Px和MDA水平

3 討 論

皮下注射D-半乳糖構建衰老模型是研究藥物抗衰老的經典模型，D-半乳糖在細胞內經一系列代謝反應最終破壞機體的抗氧化防御系統，造成脂質過氧化，脂褐質堆積從而造成與老齡小鼠相似的衰老癥狀〔7〕。機體的抗氧化能力與SOD、CAT、GSH-Px和MDA等指標水平密切相關，其中，SOD被稱為機體內的清道夫，是衡量機體抗氧化能力的最重要物質之一；CAT是過氧化物酶體的標志酶，其主要作用是將對機體有害的過氧化氫轉化為無毒物質；GSH-Px是機體內廣泛存在的一種過氧化物分解酶，其主要作用是保護細胞膜的結構和功能；而MDA是脂質過氧化的標志性產物，是衡量機體衰老的重要指標。MT是哺乳動物松果體產生的一種胺類激素，除具有抗擊腫瘤、改善睡眠、調節免疫功能外，醫學上常把它作為機體延緩衰老的重要指標之一。

本研究結果提示，rLZ-8的抗衰老作用與其提高抗氧化物酶活性及其抑制脂質過氧化物的產生等一系列抗氧化作用密切相關。rLZ-8可通過上調機體內延緩衰老物質MT水平達到延緩機體衰老的作用。